摘要：在成功建立体外分离培养大鼠胚胎脑和脊髓神经前体细胞(neuron precursor cells,NPCs)的基础上,本研究设计了三种培养液组合:DF/N2、DF/B27和DF/(N2+B27),观察在不同培养液成分对胚胎脑和脊髓NPCs增殖和分化的影响。结果显示:与NF/N2組和DF/B27组相比,脑来源的NPCs在DF/(N2+B27)中增殖最快、最稳定(P<0.01),而脊髓来源的NPCs在三种培养液组合中的增殖速度无明显差异。脑和胚胎15 d脊髓来源的NPCs在DF/B27和DF/(N2+B27)中分化为神经元的比例明显高于DF/N2组合(P<0.01);取自胚胎15 d的脊髓NPCs分化为神经元和少突胶质细胞的比例均显著高于胚胎16 d的NPCs(P<0.05)。以上结果提示:(1)在培养液中同时添加N2和B27不仅可以提高体外培养的NPCs的增殖速度,同时可显著增加神经元分化的比例;(2)NPCs的分化潜能可因NPCs来源(脑或脊髓)和发育阶段的不同而有差异。

摘要：目的构建硫酸软骨素蛋白多糖Versican V-2小干扰RNA(SiRNA)的表达载体,转染大鼠神经干细胞,并从基因表达水平验证其抑制效果。方法利用专门软件,设计针对Versican V2 mRNA序列的特异性SiRNA插入序列,体外合成该序列后将其定向克隆入真核表达载体pRNAT-H1.1/Neo,用电穿孔法将Versican V2-SiRNA表达载体转至大鼠神经干细胞中,并以表达载体中带有的绿色荧光蛋白(GFP)的表达作为转染效率的评价指标,利用反转录-聚合酶链反应鉴定Versican V2-SiRNA对Versican V2基因表达的抑制效果。结果构建的干扰表达载体转染大鼠神经干细胞后可特异性抑制该细胞中内源性Versican V2的表达,而优化的转染条件使转染效率及转染后的细胞特性及活力均能满足下一步研究的需要。结论该干扰表达载体的成功构建,以及转染后在大鼠神经干细胞中抑制功能的有效发挥,为日后开展Versican V2在神经干细胞中表达的功能研究奠定了基础。

摘要：目的:成年哺乳动物中枢神经系统损伤后,少突胶质细胞和髓鞘来源的几种抑制蛋白能够显著抑制其再生,通过与共同的Nogo-66受体结合而发挥抑制轴突再生的作用。近来发现Nogo-A及髓鞘相关糖蛋白还有另外的不同于Nogo-66受体途径,为进一步研究中枢神经系统损伤后再生提供了新思路。本文就Nogo-A、髓鞘相关糖蛋白、少突胶质细胞髓鞘糖蛋白及其受体的研究进展作一综述。资料来源:应用计算机检索PUBMED1981-01/2004-05期间的相关文章,检索词为“Nogo-A,MAG,OMgp,NgR”,并限定文章语言种类为English。资料选择:选取实验为各类型中枢神经系统损伤的大鼠模型的相关实验,进行初审,删除明显不符合动物模型实验的研究,然后查找余下的文献全文,进一步判断是否为随机动物模型实验。纳入标准:①随机动物模型试验,无论是否为单盲、双盲或非盲法。②平行对照组为脊髓未受损伤的大鼠动物模型,治疗组为中枢神经系统受损的大鼠模型。排除标准:明显不随机的动物模型试验或非动物模型研究;质量评价主要考察资料的真实性,试验设计是否合理,观测检验过程是否严格,统计学处理是否有说服力;重复研究或Meta分析类文章。资料提炼:共检索到30篇相关文献,排除的6篇文献中,2篇是重复的同一研究,4篇不符合大鼠模型试验。共24篇文献符合纳入标准,其中7篇涉及Nogo-A蛋白,8篇涉及髓鞘相关糖蛋白,5篇涉及少突胶质细胞髓鞘糖蛋白,5篇涉及Nogo-66受体及其他受体。资料综合:Nogo-A包含Nogo-66和amino-Nogo两个功能性结构域,对轴突生长均有抑制作用。髓鞘相关糖蛋白不仅对成年轴突生长具有抑制作用,且可以促进新生神经元轴突生长。少突胶质细胞髓鞘糖蛋白是糖基磷脂酰肌醇锚合蛋白,富含亮氨酸重复片段结构域,参与蛋白间的相互作用,发挥DNA修复、RNA剪接、细胞间黏附及信号转导等功能。结论:成年哺乳动物中枢神经系统受损后,几种主要的抑制蛋白与共受体结合而发挥抑制轴突再生的作用,为进一步研究中枢神经系统损伤后再生做铺垫。

摘要：目的建立检测硫酸软骨素蛋白多糖versican不同亚型mRNA的SYBR Green实时PCR方法,观察炎症因子γ-干扰素对大鼠神经干细胞中不同versican亚型基因表达的调控。方法分离孕大鼠胚胎的神经干细胞,在含有营养因子的基质中进行体外培养。当加入处理因素γ-干扰素并作用48h后,收集细胞,抽提RNA进行反转录。同时根据versican不同亚型的基因序列,设计特异性不同的引物,利用ABI7900PCR仪和SYBR Green,建立优化的实时荧光PCR反应条件,通过比较Ct(△△Ct)进行基因表达的相对定量分析。结果熔解曲线分析和琼脂糖凝胶电泳结果证实了PCR反应的特异性;相对定量结果显示,γ-干扰素可以上调versican V2基因的表达,但对versican V1的表达无影响。结论应用SYBR Green实时荧光PCR可以特异、准确、快速地分析versican不同亚型的基因表达差异,为系统研究其复杂的调控机制创造了有力条件。