摘要：目的构建含趋化因子受体5(CCR5)-短发夹状RNA(shRNA)的重组慢病毒,观察其对小鼠外周血CD34+造血干细胞(CD34+细胞)CCR5 mRNA表达的影响。方法使用Ambion RNAi靶序列及参考相关文献设计并确定RNA干扰(RNAi)靶序列。将靶序列转入克隆载体pBShH1扩增,再转入含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的FG12慢病毒载体,酶切、测序鉴定。包装CCR5-shRNA慢病毒并测定滴度,转染小鼠外周血CD34+细胞,检测转染效率。将CCR5-shRNA慢病毒转染的CD34+细胞回输小鼠体内,1周后采用Real-Time PCR检测细胞CCR5 mRNA的表达。结果相关鉴定结果显示:目的片段插入了FG12载体,并带入pBSHH1上的H1 RNA polymeraseⅢ启动子,CCR5-shRNA慢病毒载体构建完成;病毒感染滴度为5×107 TU/mL;CCR5-shRNA慢病毒对小鼠外周血CD34+细胞的转染效率为97.9%;Real-Time PCR检测结果显示:转染CCR5-shRNA慢病毒的CD34+细胞回输后,小鼠外周血CD34+细胞CCR5 mRNA表达显著下降。结论成功制备高滴度的CCR5-shRNA重组慢病毒,该病毒在体内能有效下调小鼠外周血CD34+细胞CCR5 mRNA的表达,为治疗器官移植后排斥反应的研究奠定了基础。

摘要：冠状动脉粥样硬化性心脏病(coronary atherosclerotic heart disease,CHD)的发病率及病死率居全球首位,而低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)的升高是CHD的主要危险因素,因此降低LDL-C水平可有效减少CHD的发病风险。临床上降脂药物如他汀类虽能够有效降低LDL-C水平,但仍有部分患者无法达到降脂目标或者无法耐受。前蛋白转化酶枯草溶菌素9(proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9)抑制剂作为新一代的降脂药物,越来越受到重视。其通过对PCSK9的抑制作用,增加低密度脂蛋白受体的循环利用,能够显著降低血清中LDL-C水平。目前PCSK9抑制剂已进入Ⅲ期临床试验,试验结果显示其具有良好的降脂效果和耐受性。该文就PCSK9抑制剂最新进展和面临的问题作一综述。

摘要：背景:细胞凋亡与心肌梗死后的心室重构之间互为因果,形成恶性循环,如何减少心肌梗死后的凋亡事件是挽救心功能的关键之一。目的:观察脐血间充质干细胞移植对犬急性心肌梗死后残存心肌细胞的影响。设计:随机对照观察。单位:上海交通大学附属新华医院心胸外科。材料:实验于2005-10/2007-05在上海交通大学附属新华医院中心实验室完成。选用36只成年杂种犬,雌雄各半,由上海交通大学附属新华医院动物实验中心提供。方法:采用随机数字表法将36只犬分为细胞移植组和对照组,每组18只。自近足月的妊娠杂种犬脐血中提取、培养、扩增间充质干细胞,Laz基因标记,经5-氮胞苷体外诱导后移植入细胞移植组急性心梗模型犬,对照组同法注射生理盐水。移植后1,4,8周后麻醉处死各组实验犬,获取心肌标本。主要观察指标:①TUNEL检测残存凋亡指数。②共聚焦显微镜检测心肌细胞体积及组织形态学检测。③苏木精-碱性复红-苦味酸染色检测心脏胶原网络的组织学变化。结果:纳入实验犬36只,均进入结果分析。①细胞移植后1,4,8周移植组的凋亡指数均低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。②移植组移植后1,4,8周心肌细胞体积均高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05)。③移植组心肌组织内胶原纤维排列整齐、规律,对照组排列较紊乱、无规律,部分发生融合。结论:脐血间充质干细胞移植后可通过减少心肌细胞凋亡,促使残存心肌细胞肥大,调节心肌胶原网络从而改善心功能。

摘要：背景:内皮细胞基础培养液主要用于培养内皮祖细胞,作者所查用此液培养间充质干细胞的报道较少。目的:对以内皮细胞基础培养液为基础的不同方法培养脐血间充质干细胞的效果比较。设计、时间和单位:对比观察的细胞培养实验,于2005-09/2006-05在上海市新华医院市级重点实验室完成。材料:选取妊娠杂交犬8只,抽取脐血进行干细胞的分离和培养。内皮细胞基础培养液及内皮细胞培养基为美国Clonetics产品。鼠抗CD11a单克隆抗体,鼠抗CD11b单克隆抗体,鼠抗CD29单克隆抗体,鼠抗CD71单克隆抗体均为美国Antibodydiagnostica产品;鼠抗CD34单克隆抗体为美国LabVisionCorporation产品。方法:收集的脐血干细胞分为A,B,C,D4组。A组用内皮细胞基础培养液培养;B组用添加有微血管内皮细胞生长培养液的内皮细胞基础培养液在6孔板上培养。C组用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液在纤维连接蛋白包被的6孔板上培养。D组用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液在25cm2细胞培养瓶中培养。主要观察指标:观察各组细胞形态学变化和群体倍增数。应用免疫组化法检测细胞抗原CD11a、CD11b、CD34、CD29及CD71的表达。结果:各组均有成纤维细胞样细胞培养出。A组细胞形态不良,增殖缓慢;B组细胞增殖旺盛;C组细胞克隆不稳定,容易老化;同时出现另一种细胞克隆。D组细胞培养的结果与C组相似。免疫组化法检测抗原显示CD11a(-),CD11b(-),CD34(-),CD29(+)及CD71(+)。结论:在未经处理的6孔板上,用添加有内皮细胞培养基的内皮细胞基础培养液细胞培养液可以培养出生长良好、增殖旺盛的间充质干细胞。应用纤维连接蛋白和25cm2细胞培养瓶培养的效果不佳。

摘要：背景:脐血间充质干细胞诱导分化为心肌细胞后移植入心肌缺血组织,可以通过与宿主细胞建立联系来修复取代缺血心肌组织。目的:对犬脐血干细胞进行肌源性诱导,观察其植入后与宿主细胞间的连接情况。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-07/2007-10在上海交通大学医学院附属新华医院动物实验中心完成。材料:接近足月的妊娠杂种犬2只,用于分离培养脐血间充质干细胞。成年杂种犬36只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,18只/组。方法:取传至第4代的犬脐血间充质干细胞,加入含lacZ基因的重组腺相关病毒载体进行基因转染,继续培养3d后,行10μmol/L5-氮杂胞苷肌源性诱导,常规培养3周。两组犬均建立心肌梗死模型,造模后细胞移植组经冠状动脉和局部注射将2mL细胞悬液(约107个脐血间充质干细胞)移植到梗死区,模型对照组同法注射等量生理盐水。分别于移植后2,4,8周取材制备心肌组织切片,免疫组化检测细胞间连接情况。主要观察指标:脐血间充质干细胞的基因转染、肌源性诱导分化情况,移植细胞与宿主心肌细胞的细胞间连接情况。结果:转染72h后大部分细胞表达LacZ基因,并合成半乳糖苷酶,X-gal染色呈蓝色。5-aza诱导3周后,脐血干细胞α-Actin(+),Desmin(+),Connexin43(+),而诱导前均呈阴性。移植后第8周,心肌切片中移植细胞和宿主心肌相连处可形成连接,连接处可见cadherin和connexin43绿色荧光阳性表达;模型对照组仅表达cadherin和connexin43,未见带红色荧光的移植细胞。结论:脐血间充质干细胞可在体外诱导为心肌样细胞,移植后能与宿主心肌可能形成有效连接,从而具有通讯联系。

摘要：目的探讨水通道蛋白-1（AQP1）慢病毒载体可否成功转染心肌细胞，转染成功的心肌细胞在体外循环结束后，不同时点AQP1表达变化及与心肌水肿的关系。方法健康成年羊36只，分为空载体组和AQP1慢病毒转染组。根据羊AQP1mRNA全基因设计酶切引物，克隆到慢病毒表达载体中，与其它包装载体共转染293T细胞产生病毒载体并测定病毒滴度。体外循环期间将空载体或AQP1病毒悬液注射入左心室心肌组织，体外循环结束后不同时间点（2、6、12、24、48、72h）取材，每个时间点3只。应用reahimePCR、WesternBlot、ELASE、流式细胞仪（FACS）和干湿重法等检测AQP1慢病毒载体是否成功转染心肌细胞，成功转染体外循环后不同时间点AQP1表达变化和心肌水肿程度。结果成功构建AQP1慢病毒载体并转染心肌细胞，体外循环后不同时间点AQP1表达变化趋势和心肌水肿程度与空载体组心肌表达变化趋势一致，但程度较高，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AQP1慢病毒载体可成功转染心肌细胞，AQP1高表达的心肌组织在体外循环后不同时间点AQP1的表达和水肿程度变化趋势不变，但均较空载体转染组程度高。AQP1表达量与心肌水肿程度正相关。

摘要：目的探索新型改良Nuss手术矫治漏斗胸的效果并总结漏斗胸手术设计经验。方法回顾性分析2013年1月至2017年4月在我院行新型改良Nuss手术治疗的漏斗胸患者903例的临床资料。其中男716例、女187例,年龄2~45(12.1±6.8)岁。术前Haller指数(Haller index,HI)3.1~15.2(4.6±1.3),其中轻度漏斗胸(HI6.0)42例。观察患者手术时间、术中出血量、术后住院时间及相关并发症。结果所有患者均顺利完成手术。特殊漏斗胸组(复发漏斗胸、心脏术后漏斗胸及2根钢板植入漏斗胸)手术时间为48~150(63.5±28.1)min,术中出血量为15~50(23.5±5.5)m L。普通漏斗胸组手术时间为20~45(25.2±2.6)min,术中出血量少于10 mL。术后3~15(4.5±1.6)d出院。845例(93.6%)患者植入1根钢板,58例(6.4%)患者植入2根钢板。术后疗效评估优805例,良84例,中14例,差0例,优良率达98.4%。结论优化手术设计,简化手术流程,新型改良Nuss手术治疗漏斗胸安全有效。

摘要：目的:探讨PHD1在肺癌中的功能,并进一步研究其分子机制,为肺癌的治疗寻找新的靶点。方法:选取人肺癌细胞A549,以脂质体为载体一方面过表达PHD1,另一方面合成设计靶向PHD1的siRNA沉默PHD1,利用荧光素酶检测NF-κB的活性,分别用western blot和real-time PCR检测cyclinD1的表达水平。在A549细胞中过量稳定表达带GFP标记的PHD1,流式细胞仪检测细胞周期变化,测量细胞的生长曲线,并将细胞注射到裸鼠皮下观察其成瘤情况。结果:过表达PHD1可明显抑制NF-κB的活性和IκBα的降解,降低cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平;而干扰PHD1的表达可显著增加NF-κB的活性,并上调cyclin D1的mRNA和蛋白表达水平,而不影响cyclinE1。过表达IκBαSR可以阻止干扰PHD1引起的cyclinD1 mRNA水平的上调。过表达PHD1可引起细胞周期的停滞,显著抑制细胞的增殖和移植瘤的生长。结论:PHD1可能通过下调NF-κB介导的cyclinD1的表达抑制肺癌细胞的生长和增殖。

摘要：背景:目前对几种脱细胞方法的效果各家观点不同。大都认为各种方法均可去除细胞,但实验结果却有较大差异。目的:对比胰蛋白酶法、十二烷基硫酸钠法和去氧胆酸钠法去除细胞后心脏瓣膜形态学及生物力学特征。设计、时间及地点:对比观察实验,于2007-10/2008-07在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和上海交通大学医学院附属新华医院进行。材料:40个新鲜猪主动脉瓣120片瓣叶分为3组,分别为胰蛋白酶组、十二烷基硫酸钠组和去氧胆酸钠组,每组40片。方法:胰蛋白酶消化法:置于0.5g/L胰蛋白酶和0.2g/L乙二胺四乙酸,在37℃,体积分数为0.05CO2培养箱中振荡24h。十二烷基硫酸钠法:置于0.3g/L十二烷基硫酸钠和DNase,RNase中持续振荡24h。去氧胆酸钠法:首先在5g/LTriton-X100,5g/L去氧胆酸钠,0.2g/L乙二胺四乙酸中振荡24h,然后在2.5g/LTriton-X100,2.5g/L去氧胆酸钠和0.2g/L乙二胺四乙酸中破膜去污振荡48h,两阶段均加入DNase,RNase。主要观察指标:3种方法去细胞前后心脏瓣膜的生物力学特性变化。3种方法去除细胞程度和对胶原纤维、弹力纤维的影响。结果:去氧胆酸钠组拉伸率、最大拉伸应力、最大载荷均高于十二烷基硫酸钠组和胰蛋白酶组(P<0.01)。胰蛋白酶法脱细胞效果差,对基质破坏明显;十二烷基硫酸钠法可完全脱细胞,对基质破坏较大;去氧胆酸钠法完全脱细胞同时对基质破坏较少。结论:与胰蛋白酶法、十二烷基硫酸钠法比较,去氧胆酸钠法脱细胞效果好,能更好保护基质。