摘要：目的设计针对a交配型位点内特有的SXI2a基因的特异扩增法,评价其在鉴定新生和格特隐球菌所有主要基因型a交配型中的作用。方法在SXI2a基因4号外显子的序列保守区设计引物SXI2aF-SXI2aR特异扩增新生和格特隐球菌a交配型,并比较其与现有的针对STE20a、MFa或STE3a基因的特异扩增法及交配试验在鉴定新生和格特隐球菌所有主要基因型a交配型中的作用。结果针对SXI2a基因的特异扩增法准确鉴定受试的各主要基因型a交配型菌株,而针对STE20a、MFa或STE3a基因的特异扩增法均至少无法扩增1种以上主要基因型的a交配型。部分受试菌株不能发生交配,交配试验无法鉴定其交配型。结论针对SXI2a基因的PCR扩增可鉴定新生和格特隐球菌各主要基因型的a交配型。SXI2aF-SXI2aR引物在快速鉴定a交配型中具有更好的通用性和特异性。

摘要：目的探讨针对结构基因g6341的PCR-RFLP方法在新生隐球菌基因分型中的应用价值，并与PCR指纹分型法进行比较。方法以野生型噬菌体M13中针对小卫星DNA的核心序列为单引物，对受试的新生隐球菌进行PCR指纹分型。选择结构基因g6341进行PCR-RFLP分析，在序列保守区设计通用引物，筛选合适的限制性内切酶进行RFLP分析，并与PCR指纹法进行比较。g6341基因扩增片段测序，进行系统发育分析，研究各主要基因型间的亲缘关系。结果多位点基因序列分析表明，结构基因g6341可作为RFLP分析的合适靶点。对76株新生隐球菌的基因分型结果显示，针对g6341的PCR-RFLP方法与PCR指纹法结果一致。分析g6341基因部分序列得出，8种主要基因型菌株相互间的同源性在84％-97％之间，同一主要基因型菌株的同源性在99％-100％之间。分子发育树中，VNⅠ—VNⅣ基因型、VGⅠ—VGⅣ基因型分别聚在一类。结论针对结构基因g6341的PCR-RFLP方法可作为新生隐球菌分子分型的有效工具，对g6341基因的序列分析可揭示不同菌株间的遗传进化关系。

摘要：目的评价限制性片段长度多态性（Restriction fragment length polymorphism，RFLP）方法检测α和a交配型位点内GEF1α/a基因片段在鉴定新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型中的作用。方法筛选交配型位点内的GEF1α/a基因进行PCR—RFLP分析。根据各基因型和交配型参考株的GEF1α/a基因保守序列设计引物，扩增受试新生和格特隐球菌GEF1α/a基因部分片段。利用DNAMAN和Vector NTI软件进行序列比对、限制性图谱分析、限制性内切酶的筛选和模拟电泳。选择EcoT14 Ⅰ和Hap Ⅱ限制性内切酶分别对125株新生和格特隐球菌的GEF1α/a基因扩增片段进行RFLP分型。结果所有受试的82株新生隐球菌和43株格特隐球菌均扩增出1300bp大小片段，而罗伦隐球菌、白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌、光滑念珠菌、阿萨希毛孢子菌、烟曲霉和黄曲霉参考株均扩增阴性。RFLP分型准确鉴定所有125株新生和格特隐球菌的种、变种、基因型和交配型。结论针对GEF1α/a基因片段的PCR—RFLP方法特异性高、稳定性好，适用于新生和格特隐球菌种、变种、基因型和交配型的同步和快速鉴定以及进一步的分子流行病学分析。

摘要：目的建立一种基于核糖体基因内间隔区（IGS）的多重聚合酶链反应（PCR），用于快速鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌。方法选取新生隐球菌和格特隐球菌IGS中变异度最高的I区（IGSl）为靶点，经clustalw2多重比对，并结合Oligo 6软件在不同序列位点设计针对新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌的引物用于多重PCR分析。通过51株新生隐球菌（VNI—VNIV和VNB基因型）和41株格特隐球菌（VGI—VGIV基因型）对该方法进行验证，并将该方法与已报道的CGB显色培养和采用特异性引物GPAlA、CLA4D和SODlgattii扩增格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的单一引物PCR方法进行比较。结果基于IGS的多重PCR分析成功鉴定所有92株新生隐球菌和格特隐球菌，对其他常见致病酵母的扩增均阴性，显示所设计引物较高的特异性；已报道的基于GPAlA和CLA4D引物PCR分别在鉴定2株和1株格特隐球菌时出现假阳性结果；CGB培养基在鉴定1株格鲁比变种和1株新生变种时出现假阳性结果。上述方法在鉴定时均未出现假阴性结果。结论建立的多重PCR可快速准确地鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种、AD杂合子和格特隐球菌，且优于已报道的单一引物PCR或CGB显色培养法。

摘要：【目的】建立一种基于格特隐球菌α交配型位点内SXI1α基因和a交配型位点内SXI2a基因的多重PCR分析,用于快速鉴定格特隐球菌的交配型。【方法】设计针对格特隐球菌α交配型位点内SXI1α基因部分片段和格特隐球菌a交配型位点内SXI2a基因部分片段的特异性引物,用于多重PCR鉴定格特隐球菌的交配型;并与交配试验以及已报道的扩增α交配型位点的引物MFα、STE12α,及扩增a交配型位点的引物STE20a、STE3a进行扩增效果的比较。【结果】基于SXI1α基因和SXI2a基因的多重PCR分析,准确鉴定所有受试格特隐球菌(包括VGI、VGII、VGIII和VGIV基因型)的交配型,引物STE12α、STE20a和STE3a在常规PCR鉴定中不能鉴定部分菌株的交配型;66.7%的受试菌株不能发生交配,交配试验无法鉴定其交配型。【结论】建立的多重PCR方法明显优于常规PCR或交配试验鉴定。

摘要：目的 建立一种核糖体基因内间隔区(igs)的特异性pcr扩增和序列分析方法,用于快速鉴定格特隐球菌vgⅡ基因型及其亚型.方法 选取新型和格特隐球菌核糖体igs区中可变度最高的1区为靶点,经clustalx 2多重比对后,设计特异性扩增格特隐球菌vgⅡ基因型的引物用于pcr分析.通过扩增新型和格特隐球菌其余基因型以及其他致病酵母菌来评价引物的特异性,并对阳性扩增片段(vgⅡ基因型)进行测序和序列分型研究.结果 基于核糖体igs区的特异pcr引物扩增所有受试格特隐球菌vgⅡ基因型菌株均为阳性,而新型和格特隐球菌其余基因型以及其他致病酵母菌均为阴性.序列分型显示,在扩增片段的72、79和104 bp处存在3个多态性位点,可用于区分vgⅡ基因型中的不同亚型.结论 该研究建立的特异性pcr扩增方法可快速、准确地鉴定格特隐球菌vgⅡ基因型,对扩增片段的序列分型可初步筛查高致病性的vgⅡa亚型.

摘要：目的:检测中国汉族色素失禁症一家系NEMO基因突变。方法:收集该家系内2例患者及1名正常人外周静脉血和临床资料,提取家系及100名健康对照全基因组DNA,针对NEMO基因外显子区及其侧翼序列设计引物,PCR产物扩增后进行Sanger测序,同时MLPA检测该基因是否存在大片段缺失。结果:该家系2例患者均检测出NEMO基因第5号外显子存在一移码突变c.723_c.724insCAGG,但该家系正常人和100名健康对照个体均未检出此突变。家系内三位被检测者均不存在NEMO基因大片段缺失。结论:该色素失禁症家系内NEMO基因c.723_c.724insCAGG突变可能是其发病的原因。