摘要：目的通过RNAi技术干扰T细胞CD28、CD134基因表达后，诱导获得抑制性T细胞（Ts）；探讨Ts免疫学特性。方法设计针对目标基因的siRNA，转染大鼠T淋巴细胞，FCM检测CD28、CD134水平，混合淋巴细胞反应（MLR）检测转染后的T淋巴细胞对异体淋巴细胞的增殖能力的影响，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）及酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞因子水平。结果siRNA转染大鼠T淋巴细胞后，抑制CD28、CD134分子的表达，siRNA转染24h后，siRNA组CD28、CD134表达受到抑制[转染后及转染前表达分别为（22．35±4．37）％及（34．76±3．51）％（P〈0．05）]，T淋巴细胞分泌细胞因子IL-10水平增高，转染组及未转染组表达分别为（77．15±12．60）ng／L及（37．56±5．93）ng／L（P〈0．01）。而转染组及未转染组的IL-2表达分别为（2．79±0．51）及（4．35±1．11）ng／L（P〈0．05）；干扰素（IFN）-γ表达分别为（277．15±14．8）、（682．7±53．5）ng／L（P〈0．05）。结论siRNA可以特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28、CD134基因表达，抑制了IL-2、IFN-γ的表达，提高了IL-10细胞因子表达水平，从而产生了免疫耐受效应。Ts细胞具有抗原特异性，而且在外源性rrIL-2存在时，不能逆转Ts细胞的功能。

摘要：背景：生物反应器膜材料不仅具备双向物质交换、良好的理化特性,还要具有良好的生物相容性。目的：通过溶血试验、细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验、皮肤和皮内刺激试验来评价接枝改性微孔聚丙烯超滤膜（modified micropore polypropylene semipermeable ultrafiltration membrane,Modified MPP）的生物相容性。设计、时间及地点：动物实验观察。

摘要：背景：间充质干细胞可以在体内或体外分化成肝样细胞,但是间充质干细胞数量少,在1×10^4-1×10^5 个骨髓有核细胞中仅有一个,肝细胞移植和生物人工肝的治疗都需要1×10^10 级的细胞数,利用常规的单层培养方法难以实现。目的：建立一种体外分离、大量扩增培养成人骨髓间充质干细胞的方法。设计、时间及地点：随机对照实验。实验于2005-09/2006-04 在上海市消化外科研究所（上海市教委重点实验室）及上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科和器官移植中心完成。材料：骨髓标本收集于上海交通大学医学院附属瑞金医院血液科骨髓检查正常者,供者均为知情同意志愿者。方法：采用 Percoll 梯度离心结合贴壁法分离人骨髓间充质干细胞。应用微载体cytodex3 培养人骨髓间充质干细胞,以普通单层聚苯乙烯（TCPS）培养作对照,用流式细胞仪（FCM）和 MTT 法对其细胞表型和增殖活性进行检测。主要观察指标：①hMSCs 的分离及培养。②hMSCs 的形态学观察。③hMSCs 在cytodex 3 表面生长时的增殖活性测定。④hMSCs 在 cytodex 3 表面生长时 FCM 细胞周期测定。结果：①流式细胞仪检测表明,微载体cytodex3 表面生长的人骨髓间充质干细胞表面标记与普通单层聚苯乙烯培养时一致,表达 CD29、CD44 和 CD105,而不表达CD14、CD34、CD45、VLA-1 和 HLA-DR。②MTT 检测显示,人骨髓间充质干细胞第1-3 天处于适应期,3 d 后进入对数生长期,人骨髓间充质干细胞此期间在 TCPS 和cytodex3 表面的增殖活性无差异 （P 〉 0.05）,而在普通单层聚苯乙烯表面培养时,人骨髓间充质干细胞 6 d 后进入衰退期,而cytodex3 表面生长第 9 天时仍然处于对数生长,差异显著（P 〈 0.05）。③流式细胞仪分析表明,人骨髓间充质干细胞在 TCPS 和cytodex3 表面培养细胞周期分布相同,差异不显著（P 〉 0.05）。结论：微载体 cytodex3 培养技术可以很好地大量扩增人骨髓间充质干细胞,并能保持其良好的增殖活性。

摘要：目的:探讨RNA干扰(RNAi)后对大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28基因的表达及其对细胞功能的影响。方法:设计针对目标基因的小干扰RNA(siRNA),转染大鼠T淋巴细胞。以FCAS检测CD28水平,MTT检测转染后T淋巴细胞对异体淋巴细胞增殖能力的影响,Realtime-PCR及ELISA法检测细胞因子水平。结果:siRNA转染大鼠T淋巴细胞后可抑制CD28的表达,T细胞增殖能力、IL-2、IFN-γ水平明显低于空白对照组(P<0.05)。结论:siRNA可特异性抑制大鼠T淋巴细胞共刺激分子CD28的表达,降低大鼠T细胞的增殖能力,抑制IL-2、IFN-γ细胞因子的基因水平表达和分泌水平,从而产生免疫耐受效应,为器官移植免疫研究提供实验依据。

摘要：背景：生物反应器膜材料不仅具备双向物质交换、良好的理化特性，还要具有良好的生物相容性。目的：评价人肝细胞／微孔聚丙烯杂化界面，即接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的生物相容性。设计、时间及地点：动物实验观察，于2005—09-007-10在上海交通大学医学院附属瑞金医院器官移植中心（上海消化外科研究所）实验室和浙江大学高分子材料研究所共同完成。材料：选用孔径为0．2um，分子截流量为M50000～100000的微孔聚丙烯超滤平面薄膜为实验模型，利用光化学接枝聚合改性技术，在聚丙烯超滤膜表面通过化学键的形式接枝亲水性丙烯酰胺基冈，成功地构建一种人肝细胞／微孔聚丙烯杂化界面，即新型的生物人工肝生物反应器膜——接枝改性微孔聚丙烯超滤膜。方法：参照国际标准化组织ISO10993-1：1992医疗器械生物学评价标准和要求进行溶血试验、细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验、皮肤和皮内刺激试验，评价接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的生物相容性。主要观察指标：接枝改性微孔聚丙烯超滤膜浸提液的溶血试验、细胞毒性试验、全身急性毒性试验、热原试验、皮肤和皮内刺激试验结果。结果：接枝改性微孔聚丙烯超滤膜的溶血率为1．90％〈5％，表明其无致溶血性；其浸提液对L929细胞增殖活性无明显的抑制作用；注射接枝改性微孔聚丙烯超滤膜浸提液后24，48，72h，所有小鼠无死亡，体质量无明显变化，未观察到眼睑下垂、呼吸困难、发绀、腹部刺激症、腹泻、运动减少、震颤等全身急性毒性反应。热原试验中兔体温变化范围-0．2～0．4，符合生物医学材料无热原的评价标准。皮肤刺激实验中仅1例有极轻微的红斑，积分1分，其原发刺激指数为0．25〈0．4，皮内刺激试验结果原发刺激指数为0．2，平均原发刺激指数为O．068，均〈0．4，无皮肤刺激性。结论：人肝细胞／微孔聚丙烯杂化界面，即接枝改性微孔聚丙烯超滤膜无致溶血性、细胞毒性、致热原性和皮肤刺激致敏性，证实通过光化学接枝丙烯酰胺后具有良好的生物相容性。

摘要：目的探讨通过RNA干扰技术诱导产生的CD8^＋CD28^-抑制性T淋巴细胞（Ts细胞）的免疫学特性。方法取SD大鼠骨髓，培养分离树突状细胞（DC），设计、合成主要组织相容性复合物（MHC）I类小片段干扰RNA（siRNA），以MHCIsiRNA转染DC。先以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液刺激转染MHCIsiRNA的IX2，然后将DC与从SD大鼠脾脏分离得到的CD8^＋T淋巴细胞共同培养，通过磁珠法分离出Ts细胞。分别在由SD大鼠脾脏淋巴细胞（反应细胞）和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞（刺激细胞）组成的混合淋巴细胞培养体系中加入数量不等的Ts细胞，检测反应细胞增殖情况；分别以Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞和卵白蛋白（OVA）刺激SD大鼠脾脏淋巴细胞，然后再按不同比例加入Ts细胞，检测各组脾脏淋巴细胞的增殖情况；在由SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入可溶性重组白细胞介素2（rrIL-2），观察IL-2对Ts细胞功能的影响；采用实时定量聚合酶链反应（PCR）测定Ts细胞中转化生长因子／3（TGF-β）和7干扰素（IFN-γ）mRNA的表达，流式细胞仪和实时PCR检测Ts细胞上CD25分子的表达。结果Ts细胞对SD大鼠脾脏淋巴细胞和Wistar大鼠肠系膜淋巴组织细胞之间的混合淋巴细胞反应（MLR）具有抑制作用，但对于SD大鼠脾脏淋巴细胞和OVA之间的MLR则无抑制作用。在SD大鼠脾脏淋巴细胞、Wistar大鼠肠系膜淋巴组织液和Ts细胞组成的混合淋巴细胞培养体系中加入rrIL-2后，SD大鼠脾脏细胞的增殖并无明显增加（P〉0．05）。与CD8^＋ CD28^＋T淋巴细胞和CD8^＋T淋巴细胞比较，Ts细胞的TGF-β和IFN-γmRNA的表达量明显升高（P〈0．01，P〈0．05），而CD25的表达量明显降低（P〈0．05）。结论采用经MHCIsiRNA干扰的DC能够诱导CD8^＋T淋巴细胞产生CD8^＋CD28^-Ts细胞；Ts细胞在体外具有免疫抑制特性，其免疫抑制作用不被外源性IL-2所逆转，且其免疫调节作用具有抗原特异性。