摘要：血-脑屏障能够保护大脑不受外来有害物质影响,但也使药物难以进入大脑,阻碍中枢神经系统疾病的新药研究.生物体内存在能够跨血-脑屏障的天然物质,其生物学机制可以为脑部药物输送系统的设计研发提供指导.本文介绍一系列脑部递送策略,重点介绍具有临床应用潜力的仿生纳米递送系统.研究成果能够促进脑靶向诊疗产品的临床转化.

摘要：针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌*** BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液。为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化。结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性纳米抗体分离效果较好,目的蛋白产量超过1 mg/L,纯度可达到97%。同时,anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体能够与细胞表面两个抗原特异性结合,增强IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC)对胰腺癌细胞株AsPC-1的杀伤能力,为其后续体内药效学评价奠定了基础。

摘要：mRNA疫苗技术作为最新一代的疫苗制备技术已实现疫苗生产和临床应用,例如新型冠状病毒肺炎mRNA疫苗(COVID-19 mRNA vaccine)。和传统的灭活疫苗、重组亚单位疫苗相比,mRNA疫苗技术具有效价高、开发周期短、安全性好、生产技术通用性高的特点。由于mRNA的特点和工艺特殊性,传统的生物药物设计理念已经不能完全符合其制备要求,如何合理设计mRNA疫苗生产厂房和工艺工程是值得研究的问题。由于各国的地理位置、人文特点、能源结构、环保要求等都各不相同,因此在借鉴欧美已有的mRNA疫苗规模化生产设施的基础上,该研究探索了符合我国国情的生产设施和工艺工程设计方案,并以拟定的目标生产规模(每年10亿剂次量)进行产能计算及分析,探索了mRNA疫苗大规模商业化生产厂房的工艺工程设计要点,阐述并讨论了厂房平面布局、洁净区域划分、人流和物流走向、压差分布和气流方向等,以期为国内mRNA疫苗商业化生产平台的快速落地提供参考。

摘要：断裂型内含肽Nostoc punctiforme(Npu)DnaE作为一种为构建抗体-药物偶联物(ADC)过程中实现定点偶联的工具,其C端序列中的赖氨酸对其剪接活性有较大影响。该研究对断裂型内含肽Npu DnaE C端序列中的赖氨酸进行定点突变,得到了5种氨基酸(精氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、谷氨酸和甲硫氨酸)取代的多肽序列,以探究不同氨基酸取代对其剪接活性的影响。结果显示分别由精氨酸、谷氨酰胺和甲硫氨酸3种氨基酸取代赖氨酸的内含肽C端序列保持了剪接活性,其中精氨酸取代的内含肽C端序列剪接效率较高。采用精氨酸取代的内含肽C端序列制备了ADC HER2-Lc-SMCCDM1,经检测其保有抗原亲和力和抗肿瘤活性。该研究结果为ADC的定点偶联和基于内含肽设计、改造蛋白质或多肽连接合成相关研究提供了技术支撑。

摘要：目的研究毕赤酵母生产重组灵芝锰过氧化物酶(recombinant Ganoderma lucidum manganese peroxidase,rGlMnP)的最优培养条件。方法在单因素实验基础上,采用中心组合设计和响应曲面法对rGlMnP工程酵母产rGlMnP的发酵条件进行优化,探讨初始pH、温度、甲醇浓度和血红素浓度对重组毕赤酵母生产的rGlMnP的酶活力的影响,分析上述4个因子的交互作用及其最佳水平范围,并验证模型的有效性。结果初始pH、温度、甲醇浓度和血红素浓度对毕赤酵母生产rGlMnP的酶活力有显著影响;毕赤酵母生产rGlMnP最优的培养条件为:初始pH 5.5、诱导温度30℃、甲醇浓度1.5%以及血红素浓度1.0mmol/L。结论本研究为利用毕赤酵母工程菌大规模生产rGlMnP奠定了基础。

摘要：随着靶向β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)和淀粉样蛋白轻链(amyloid light chain,AL)单克隆抗体的开发,建立一种有效的抗Aβ和AL单克隆抗体亲和力及其生物活性检测方法十分必要。Crenezumab是基于Aβ靶点研制的IgG4型全人源化抗Aβ单克隆抗体,对Aβ寡聚体具有较强的亲和力。前期计算机方法模拟抗体抗原分子结合试验证实,可能设计1种新型的抗体对2种抗原均有结合力和生物活性。本文基于研发同时具备抗Aβ和AL 2种抗原新型抗体的需求出发,以Crenezumab为例,建立间接ELISA方法,并用该方法分别检测Crenezumab抗体对Aβ寡聚体和AL纤维的亲和力。进一步建立SH-SY5Y细胞活性实验方法和ThT荧光分析方法,分别检测Crenezumab对Aβ和AL抗原的生物活性。本研究建立的检测方法可为同时靶向Aβ和AL的抗体的药学初步研究提供检测方法。