摘要：目的 观察中期因子（MK）基因小干扰RNA（siRNA）对膀胱癌细胞化疗药物敏感性的影响.方法 设计合成3个MK siRNA,转染人膀胱癌RT4细胞株,定量RT-PCR方法筛选下调MK mRNA效果最好的siRNA;以该siRNA转染RT4细胞后分组：空白对照组（Con-A）、空载对照组（Con-B）、错配对照组及MK siRNA 3.125、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、200.00 nmol/L组,实时定量RT-PCR和蛋白质印迹方法检测各组细胞MK表达情况;噻唑盐法检测紫杉醇（PTX）对各组细胞生长的影响;通过检测caspase-3活性和TUNEL方法观察癌细胞凋亡情况.结果 3个siRNA均明显下调MK mRNA水平,以S3效果最好.PTX组、Con-A十PTX组、Con-B＋PTX组、siRNA 12.50 nmol/L组、3.125 nmol/L＋PTX组、siRNA 6.25 nmol/L＋PTX组、siRNA 12.50nmol/L＋PTX组肿瘤细胞抑制率分别为（18.21±0.36）%、（18.19±0.29）%、（17.89±0.33）%、（1.86±0.52）%、（32.56±0.53）%、（53.83±0.38）%、（78.95±0.55）%.TUNEL结果显示,ConA、Con-B、siRNA 3.125、6.25、12.50 nmol/L组凋亡指数分别为（1.81±0.36）%、（1.89±0.38）%、（5.56±0.58）%、（9.68±0.55）%和（15.25±0.56）%.结果 MK基因siRNA可增强膀胱癌细胞化疗敏感性,诱导凋亡是其重要机制之一.

摘要：目的：构建含小鼠细胞因子信号抑制因子-1基因（SOCS1）的重组腺病毒载体（Ad5F35-SOCS1），探讨其介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达。方法：设计含AgeI和NheI酶切位点的SOCS1基因上下游引物，以质粒pEF-FLAG-1／mSOCS1为模版，通过PCR扩增获得SOCS1全部序列，片段回收后经AgeI和NheI酶切，再定向插入到经AgeI和NheI酶切的质粒pDC316-LacZa中，获得重组穿梭质粒pDC316-SOCS1，经AgeI和NheI酶切、PCR及测序等鉴定后，用脂质体将穿梭质粒pDC316-SOCS1与腺病毒骨架质粒pBHGF35共转染293细胞，经位点特异性重组获得重组腺病毒Ad5F35-SOCS1，行PCR鉴定，经293细胞扩增、纯化制备高滴度病毒液，TCID50法测定病毒滴度。用获得的重组腺病毒感染小鼠树突状细胞，以免疫组化检测SOCS1的表达。结果：成功构建了含小鼠SOCS1基因的重组腺病毒载体，病毒感染滴度为1．4×10^9IU／ml，该载体能有效介导SOCS1基因在小鼠树突状细胞中的表达。结论：重组腺病毒载体能将SOCS1基因转入小鼠树突状细胞并有效表达，为基因转染制备耐受性树突状细胞奠定了基础。