摘要：目的观察高糖诱导原代心肌细胞时成纤维细胞生长因子21(FGF21)的表达,初步探讨内源性FGF21对高糖诱导心肌细胞肥大的保护作用。方法原代培养C57BL/6J乳鼠心肌细胞,观察FGF21在不同糖浓度(5、25、33和45 mmol/L)以及不同作用时间(24和48 h)的表达情况。设计并合成可沉默FGF21基因的小干扰RNA(siRNA),观察心肌细胞的形态学变化,并采用Real-time PCR检测心肌细胞肥大表型ANP、β-MHC mRNA的表达变化。结果 FGF21水平随着高糖浓度升高而升高,同一时间点高糖组(33和45 mmol/L)的FGF21水平高于对照组(P<0.05);FGF21水平随高糖作用时间延长出现先升高后降低的趋势,相同糖浓度组24 h时的FGF21水平升高,而48 h时的FGF21水平较24 h时降低(P<0.05);高糖组(33和45 mmol/L)心肌细胞FGF21 mRNA表达高于对照组,随高糖作用时间延长心肌细胞FGF21 mRNA表达水平先升高后降低(P<0.05)。FGF21-siRNA处理后,高糖诱导的心肌细胞肥大更为显著,ANP、β-MHC表达水平升高(P<0.05)。结论高糖时,内源性FGF21表达水平与糖浓度存在一定的依赖性;FGF21可能参与高糖诱导心肌细胞肥大的过程,起到拮抗心肌细胞肥大的保护性作用。

摘要：目的采用正交实验设计法,优化低频(20 kHz)低功率超声联合微泡诱导人雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞早期凋亡的条件。方法以超声功率、微泡/细胞悬液体积比及超声辐照时间为正交优化的3个因素,每个因素设定3个水平,分别为超声功率60、80、100 mW,微泡/细胞悬液体积比10%、20%、30%,超声辐照时间30、60、90 s,根据三因素三水平设计正交实验表,得到9个实验组,按相应条件采用连续波辐照,辐照后细胞继续培养24 h,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡。应用正交优化得到的最优组合条件超声辐照实验组DU145细胞,对照组细胞不予超声辐照,采用流式细胞术、透射电镜检测、观察实验组及对照组细胞早期凋亡。结果 3个因素对细胞早期凋亡的影响程度为:超声功率>微泡/细胞悬液体积比>超声辐照时间。各个因素不同水平对细胞早期凋亡的影响程度分别为:超声功率:80 mW>60 mW>100 mW,微泡/细胞悬液体积比:20%>30%>10%,超声辐照时间:60 s>90 s>30 s。最优组合条件下,实验组细胞早期凋亡率为10.41%,对照组细胞早期凋亡率为0.94%。透射电镜下可见实验组细胞较对照组细胞的体积变小变圆,空泡增多,可见明显的凋亡小体形成。结论低频超声联合微泡诱导人雄激素非依赖型前列腺癌DU145细胞早期凋亡的最优组合条件为:超声功率80 mW,微泡/细胞悬液体积比20%,超声辐照时间60 s。在此条件下实验组早期细胞凋亡率与对照组相比有明显差异。

摘要：目的采用正交实验设计,探讨超声联合微泡诱导人前列腺癌细胞的凋亡的最优参数组合。方法选定超声功率、辐照时间、微泡/细胞悬液体积比三个因素,又分别按超声功率15、20、25、30 mW/cm2,辐照时间30、60、90、120 s和微泡/细胞悬液体积比10%、20%、30%、40%,每因素四个水平设定正交设计表,按正交设计表进行超声辐照,辐照后细胞继续培养24 h,用流式细胞仪进行细胞凋亡检测。结果对细胞凋亡的影响因素,超声功率>微泡/细胞悬液体积>辐照时间;各因素水平影响:超声功率:15 mW/cm2>25 mW/cm2>20 mW/cm2>30 mW/cm2,辐照时间:30 s>60 s>120 s>90 s,微泡/细胞悬液体积:20%>10%>30%>40%。结论超声联合微泡诱导人前列腺癌细胞凋亡最佳组合为超声功率15 mW/cm2,辐照时间30 s,微泡/细胞悬液体积比20%。

摘要：目的采用正交实验设计法,探究低频超声联合微泡抑制小鼠前列腺癌细胞(RM-1)血管内皮生长因子(VEGF)表达的最优参数组合。方法选定超声功率、超声频率、辐照时间、微泡/细胞悬液体积比为正交优化的4个因素,每个因素设定4个水平,分别为超声频率:20 k Hz、80 k Hz、500 k Hz及800 k Hz;超声功率:100 m W/cm2、180 m W/cm2、270 m W/cm2及360 m W/cm2;辐照时间:30 s、60 s、90 s及120 s;微泡/细胞悬液体积比:10%、20%、30%、40%,按照四因素四水平设计正交实验表,得到16个实验组,各组按相应条件采用连续波辐照后细胞继续培养24 h,定量RT-PCR检测各组VEGF m RNA表达量从而获取最优组合条件。将小鼠RM-1细胞均分4组:对照组不进行任何处理;单独超声组采用正交实验设计法所得最优组合条件辐照细胞,但不加入微泡;单独微泡组仅加入最优百分体积的微泡;低频超声联合微泡组采用正交实验设计法所得最优组合条件辐照并加入最优百分体积微泡。各组处理后,即刻台盼蓝染色观察细胞的损伤情况;培养24 h后,采用Western blot印迹法检测小鼠RM-1细胞中VEGF表达量。结果抑制小鼠RM-1细胞VEGF m RNA表达的影响因素由大到小依次为:超声频率、超声功率、微泡/细胞悬液体积比、辐照时间;各因素不同水平的影响程度由大到小依次为:1超声频率:800 k Hz、500 k Hz、80 k Hz、20 k Hz;2超声功率:360 m W/cm2、180 m W/cm2、270 m W/cm2、100 m W/cm2;3辐照时间:30 s、90 s、120 s、60 s;4微泡/细胞悬液体积比:20%、10%、40%、30%。正交实验设计法所得最优组合条件为:超声频率800 k Hz、超声功率360 m W/cm2、超声辐照时间30 s及微泡/细胞悬液体积比20%。低频超声联合微泡组损伤细胞多于其他各组,单独超声组可见少量损伤细胞,对照组和单独微泡组损伤细胞极少。低频超声联合微泡组VEGF表达量少于其他各组,单独超声组表达量也少于对照组和单独微泡组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论低频超声联合微泡造影剂抑制小鼠RM-1细胞VEGF m RNA表达的最优组合条件为:超声频率800 k Hz,超声功率360 m W/cm2,超声辐照时间30 s,微泡/细胞悬液体积比20%。在此实验条件下可以显著抑制VEGF的最终表达量。