摘要：目的:研制一种基于双波长荧光PCR技术的乙型肝炎病毒DNA超敏定量检测试剂盒,并对其性能进行评价。方法:根据乙型肝炎病毒不同基因型中的保守序列设计特异性引物与TaqMan荧光探针,并设计非竞争性的外源性内参引物与探针,优化确定双波长荧光PCR反应体系和扩增条件;同时根据磁珠法原理,优化确定适合血清、血浆样本的病毒DNA高效提取方法,完成乙型肝炎病毒DNA超敏定量检测试剂盒的研制;最后测试本试剂盒的最低检出限、准确度、线性范围、精密度、基因型覆盖及特异性等性能指标,并完成166例临床样本的对比测试,评价试剂盒的临床应用性能。结果:自主研制的乙型肝炎病毒DNA超敏定量检测试剂盒最低检出限为5 IU/mL,线性范围为20~2.0×109 IU/mL,精密度CV值≤5%、覆盖型别包括A~H八种基因型,对常见的病原体检测无交叉反应。166例临床样本的对比检测结果表明,本试剂盒与已上市流通试剂盒的定性检测结果符合性良好,临床阳性符合率为98.67%(95%置信区间:95.27%,99.84%)、阴性符合率93.75%(95%置信区间:69.77%,99.84%)、总体符合率98.19%(95%置信区间:94.81%,99.63%);同时定量检测结果具有较高相关性(斜率0.99,相关系数|R|=0.982)。结论:自主研制试剂盒可实现乙型肝炎病毒DNA超敏精准定量检测,适合临床推广应用。