摘要：为了观察与猪流行性腹泻病毒(PEDV)NSP12互作蛋白乳酸脱氢酶B(LDHB)的体外表达情况和小RNA干扰效果,构建了真核表达载体pcDNA4.0-LDHB-3*Flag,并在Vero细胞中过表达LDHB,发现在37 kDa处有大小相符的明显条带。设计的2条小干扰RNA能降低LLC-PK1细胞中LDHB的mRNA和蛋白质水平,经one-way ANOVA检验证明干扰实验组2-ΔΔct的平均值显著低于对照组(P<0.05)。该结果为研究LDHB在PEDV感染LLC-PK1和Vero细胞过程中的作用提供了基础数据。

摘要：为了同时检测引起猪关节病的猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)、副猪嗜血杆菌(Haempohlius parasuis,HPS)和猪丹毒丝菌(Erysipelothrix rosenbach),分别设计针对SS2的cps2J基因、HPS和猪丹毒丝菌的16S rRNA基因的3对特异性引物,建立了同时检测以上3种病原的多重PCR方法,并对反应条件进行优化,测试多重PCR方法的特异性和灵敏度。对采自8个规模猪场的猪关节病病料进行检测,从72份猪关节液样品中检出2株猪链球菌2型、1株副猪嗜血杆菌和2株猪丹毒丝菌,结果显示与常规PCR检测结果一致,表明建立的多重PCR方法敏感、特异、快速,可用于猪关节病重要病原体的检测。

摘要：目的:克隆、表达猪链球菌2型菌株ZY05719的膜蛋白二氢硫辛酰胺脱氢酶基因(hm6),分析其重组蛋白的生物学活性。方法:基于GenBank中*** P1/7SSU1634蛋白的基因序列设计引物,克隆ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因并进行序列分析;构建pET28a-hm6原核表达质粒,在大肠杆菌BL21中诱导表达,重组HM6蛋白即二氢硫辛酰胺脱氢酶用His亲和层析镍柱纯化后,通过SDS蛋白电泳鉴定分析并利用新西兰大白兔制备抗血清,研究其酶活性及其在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中的作用。结果:克隆了1 761bp的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,纯化的70kD重组融合蛋白具有良好的酶活性和免疫原性,且在介导猪链球菌粘附HEp-2细胞中具有作用。结论:成功克隆、表达了ZY05719株的二氢硫辛酰胺脱氢酶基因,初步揭示了其生物学活性,为深入研究二氢硫辛酰胺脱氢酶在猪链球菌致病机制中的作用奠定了基础。

摘要：猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由PED病毒(PEDV)引起猪的一种急性高度接触性传染病,其中S糖蛋白携带主要的B淋巴细胞抗原决定簇,能够诱导产生中和抗体和提供免疫保护作用的重要结构蛋白。主要针对PEDV S1蛋白选择九条不同的多肽片段,并利用BALB/C小鼠单克隆抗体制备技术得到识别相应多肽片段的单克隆抗体,针对九条不同多肽表位获得的单克隆抗体与重组原核表达的PEDV S1蛋白识别效果进行对比,最后证实在所选的九条多肽表位片段中,以序列90至102、621至637、718至731这三条多肽的抗原性最好。

摘要：为研究猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)环二腺苷酸(c-di-AMP)水解蛋白GdpP的生化特性,根据已公布的SS2中国强致病株98HAH33全基因组中的gdpP序列信息设计引物,以SS2强致病株HA9801基因组为模板,通过PCR方法克隆获得了SS2的c-di-AMP水解蛋白基因gdpP完整序列,其阅读框由1 965个核苷酸组成,编码654个氨基酸。应用大肠杆菌重组表达系统,表达、纯化了GdpP,进而分析了其体外生物活性,结果显示纯化的重组蛋白可以在体外水解c-di-AMP形成pApA。其水解酶活性在碱性环境条件下(pH 8.0)相对较强,而在酸性环境下(pH 6.0,6.5)未检测到活性;同时,水解酶活性还依赖于二价金属离子Mg2+、Mn2+以及Co2+的存在,且在Mn2+存在的条件下相对活性最强,而在Ca2+、Fe2+和Cu2+存在的条件下则均未表现出活性。上述结果为进一步深入研究c-di-AMP在猪链球菌2型中发挥的生物学功能奠定了基础。

摘要：本研究根据GenBank上猪嵴病毒核苷酸序列设计了一对特异性引物,建立猪嵴病毒的PCR检测方法。该方法特异性强,敏感度高,重复性好。应用该PCR方法对2010年在上海周边地区采集的116份猪粪样品进行检测,结果45份为猪嵴病毒阳性,表明上海地区猪群中猪嵴病毒相当流行。本研究建立的PCR方法可以用于猪嵴病毒的流行病学监测。

摘要：为测定鸡TBK1(chTBK1)基因在家禽抗感染天然免疫中mRNA表达水平变化情况,本研究根据chTBK1序列,设计3对特异性引物,基于chTBK1和β-actin双标准曲线建立了荧光定量PCR(qRT-PCR)检测方法,并测定在禽流感病毒刺激下鸡成纤维细胞(DF-1)中chTBK1表达量的变化情况。结果表明,建立的标准曲线Ct值与模板浓度的对数呈现良好的线性关系(R^2均大于0.99),能特异地检测chTBK1,检测灵敏度可达59拷贝数/μL,且组内及组间变异系数小于2%;chTBK1在DF-1细胞中的mRNA水平在病毒刺激下呈现上升趋势。该qRT-PCR检测方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性,为研究chTBK1在鸡抗病毒感染中的作用提供了有效工具。

摘要：根据GenBank中已登录的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)的序列,利用Primer 5.0设计合成了2对特异性引物。用这2对引物对TGEV、PEDV cDNA模板首先进行单项PCR条件优化,然后采用正交试验设计优化多重RT-PCR反应条件,结果同时扩增到2条与实验设计相符的492bp(PEDV)和211bp(TGEV)特异性条带,建立了能够同时检测2种病毒混合感染的特异、灵敏的多重PCR检测方法,可检测出约11pg的PEDV和13pg的TGEV。

摘要：根据GenBank公布的猪博卡病毒(Porcine Bocavirus,PBoV)序列,在VP1/2基因区域设计引物和TaqMan探针建立实时荧光定量PCR检测方法,对上海市10个区(县)规模场2006～2011年间采集的1800份猪血清、2010年种猪场不同月份采集的45份猪粪便、2010年9个规模场采集的27份猪鼻棉拭以及门诊采集的9份高热病死猪内脏进行检测,阳性率依次为24%、30%、0%、67%。6份PBoV阳性病料进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRSV)、猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)、猪伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)、猪细小病毒(Porcineparvovirus,PPV)检测,阳性率依次为83%、100%、0%、0%。检测结果表明,PBoV感染在上海市普遍存在,猪内脏中检出率较高,且春秋两季高发,仔猪比较易感,并与PRRSV、PCV2存在混合感染。

摘要：近年来犬细小病毒病和犬冠状病毒病门诊量升高,2种病毒感染后临床症状相似,且存在混合感染、难以区别。本试验根据GenBank已发表的序列,应用Primer 5.0软件对CPV-2、CCV保守区设计引物,采用不同条件进行PCR反应,验证引物特异性,确定反应条件,建立了检测CPV和CCV的双重PCR检测方法。采用该方法对部分诊所收集的140份CPV和CCV疑似病例的病料进行病原学检测,将双重PCR检测结果与单个PCR检测和胶体金试纸检测结果进行对比。结果表明,该方法敏感性高于胶体金试纸,特异性高,双重PCR检测结果与单个PCR检测结果一致,可用于CPV和CCV的病原检测。