摘要：目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Real-time PCR和Western blot对HIV-1 vif分别从转录和表达水平进行验证。结果将pEGFP-N1-vif重组载体转染HEK 293T细胞后,结果显示vif蛋白可以在细胞中高水平表达;针对vif设计的3段特异的siRNA可以有效且特异地降低vif蛋白的表达。结论RNAi技术可以下调HIV-1蛋白的表达,此技术可以作为一项新的治疗和预防HIV-1的方法用于进一步的研究。

摘要：目的 建立一种新的、简便的HBV表型耐药分析方法,通过置换完整的反转录酶（RT）区研究药物敏感性.方法 首先全基因扩增未经核苷（酸）类似物治疗患者的HBV DNA,构建含HBV野毒株全基因组表达质粒PHY536207（B基因型）及PHY97（C基因型）,继而在RT区上、下游设计限制酶切位点,改造后的质粒分别命名为mPHY536207及mPHY97.以CHB患者血清中分离到的拉米夫定（LAM）耐药变异株和阿德福韦酯（ADV）耐药变异株为骨架,分别构建LAM耐药株质粒PHY634和ADV耐药株质粒PHY6923,再用耐药株的RT区段取代mPHY536207中的RT区构建重组质粒,命名为RT634（LAM耐药）及RT6923（ADV耐药）.分别用RT区置换前、后的质粒转染Huh7细胞,用ELISA法检测分泌到细胞上清液中的HBsAg水平,用实时PCR和Southern印迹法检测细胞内HBVDNA水平.结果 成功构建B型和C型野毒株表达质粒PHY536207和PHY97,经转染Huh7细胞证实有HBV复制能力,6孔细胞培养板中每孔细胞所抽提的HBV DNA均＞1＆#215;107拷贝/mL;在RT区上游设计的Pst Ⅰ酶切位点不影响HBV的表型（HBsAg的表达及HBV DNA的复制）.在PHY634及RT634转染实验中,HBV DNA水平却并未随LAM浓度的升高而明显下降,50％抑制浓度（IC50）＞100 μmol/L,mPHY536207仅为0.18 μmol/L;PHY6923及RT6923转染实验中,HBV DNA对外加的ADV不敏感,IC50＞100 μmol/L,明显高于mPHY536207（1.2 μmol/L）.结论 本研究建立了一种新的HBV表型耐药分析方法,可通过RT区置换来研究RT区变异对药物敏感性的影响.

摘要：目的:了解上海市公共卫生临床中心潜伏性结核感染(LTBI)比例,评价活化特异结核感染T淋巴细胞斑点试验(***)筛查人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者/获得性免疫缺陷综合征(AIDS)患者、结核病患者、其他疾病就诊患者LTBI的可行性。方法:上海市公共卫生临床中心自2012年7月至2015年12月以来收治7 482例患者,其中HIV感染者/AIDS患者1 837例、结核病患者1 689例、其他疾病就诊患者3 956例,分别进行***,筛查可能的LTBI者,并采用结核分枝杆菌涂片实验和X射线胸部透视(胸透)进一步证实。结果:HIV感染者/AIDS患者、结核病患者和其他疾病就诊患者中***阳性者分别为301例(16.39%)、928例(54.94%)和1 509例(38.14%),并且结核分枝杆菌涂片实验结果均为阴性,而且经胸透结果证实。结论:活化特异***筛查HIV感染者/AIDS患者、结核病患者、其他疾病就诊患者LTBI的方法可行,并且对HIV感染者/AIDS患者开展LTBI的检测非常重要。