摘要：鉴于胰岛素样生长因子Ⅰ号及Ⅱ号的受体 (IGFⅠR ,IGFⅡR)在人原发性肝癌中过量表达 ,以及表皮细胞生长因子受体 (EGFR)在多种人恶性肿瘤过量表达 ,设计和合成了针对IGFⅠR及IGFⅡR的 1 4肽E5和针对EGFR的 1 6肽GE7,以及流感病毒血凝素功能域 2 0肽HA2 0作为内吞小体释放寡肽 (Endosomereleasingoligopeptide,EOP) ,将它们分别与多聚阳离子多肽 (Polycationic polypeptide ,PCP)———多聚赖氨酸 (Polylysine ,PL)或鱼精蛋白 (Protamine,PA)共价连接 ,藉静电效应与DNA形成一个复合体 (E5 PCP/DNA/PCP HA2 0 ,GE7 PCP/DNA/PCP HA2 0 ) ,即构建的新的受体介导的靶向性非病毒型基因导入系统 .体内。

摘要：概述了利用计算机及分子生物学信息资源进行文献检索、序列分析、蛋白质分子结构模建、药物设计等工作的方法。

摘要：本研究旨在检测独立生长因子(Gfi-1)在白血病患者的表达水平并探讨慢病毒介导的gfi-1基因沉默对人白血病细胞株K562增殖的影响。采用荧光实时定量PCR及Westernblot方法检测初治白血病患者gfi-1的表达水平,分析其在各型白血病中的表达情况。设计、合成一对针对gfi-1 mRNA的shRNA序列,退火后连接到pLVTHM干扰载体上,与psPAX2、PDM2G共转HEK293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染K562细胞,建立稳定株。应用实时定量PCR和Western blot方法检测K562细胞gfi-1及baxmRNA和蛋白的表达,并与对照组进行比较.结果表明:慢病毒介导的shgfi-1能明显降低gfi-1的mRNA及蛋白水平,而bax的mRNA及蛋白水平则都上调。CCK-8检测发现,与对照组相比,shgfi-1能明显抑制K562细胞的增殖。结论:gfi-1在初治白血病患者中的高表达可能参与白血病的发生发展。gfi-1特异的shRNA干扰可以有效地下调K562细胞gfi-1基因的表达,抑制K562细胞的增殖,gfi-1基因可能是白血病基因治疗的一个有效靶点。

摘要：【目的】探讨膳食十字花科蔬菜(CV)摄入、尿液异硫氰酸盐(ITC)代谢与男性胃癌发病风险的关系。【方法】以上海男性健康队列为基础,采用巢式病例对照设计,选择诊断时间在2010年12月31日之前的胃癌新发病例291例作为病例组,按照1︰2的比例抽取对照582例。膳食CV摄入量根据食物频率问卷估计,尿液ITC代谢量通过高效液相色谱法测定。采用非条件logistic回归模型分析这两个指标与男性胃癌的关系。【结果】比较病例组和对照组的膳食CV摄入量和尿液ITC代谢量,未发现两组间差异具有统计学意义。尿液ITC代谢量根据对照组划分三组,调整年龄、吸烟、饮酒、慢性胃病等混杂因素后,与最低组相比较,较高组和最高组的OR(95%CI)值分别为0.94(0.66~1.34)、1.01(0.71~1.43),两者关联无统计学意义。采用同样的分析方法,也未发现膳食CV摄入量与胃癌的发病有关。【结论】在上海市男性居民中,十字花科蔬菜摄入、尿中ITC水平与胃癌之间无统计学关联。

摘要：目的:构建慢病毒介导的人孕烷X受体(hPXR)sh-RNA干扰载体及筛选肝癌细胞稳定干扰株。方法:针对hPXR的特异性序列,设计干扰序列,构建重组克隆。转染HEK293T细胞,筛选有效干扰片段。HEK293T包装干扰病毒并转染肝癌HepG2细胞株,200 mmol/L嘌呤霉素筛选2-3周,Western blot检测PXR表达。hPXR激动剂利福平处理PXR sh-RNA稳定干扰肝癌HepG2细胞株和Scramble对照细胞,抽提RNA并鉴定hPXR靶基因细胞色素P450 3A4(CYP3A4)的表达。结果:筛选出了PXR有效干扰片段,并获得了PXR信号通路有效敲低的HepG2慢病毒稳定干扰株。结论:成功构建了慢病毒介导的PXR sh-RNA稳定干扰HepG2细胞株。

摘要：根据传染性法氏囊病病毒 (IBDV)VP2基因cDNA序列 ,在VP2基因高变区设计一对引物 ,用RT_PCR方法扩增IBDV分离株JS3和JS4。将扩增片段克隆后以双脱氧链末端终止法测定核苷酸序列。JS3和JS4的同源性最高达 98% ,与已发表的vvIBDV、IBDV变异株、IBDV经典株及IBDV弱毒株核苷酸序列的同源性在 92 %～ 98%之间。根据IBDV的大ORF推导出该片段编码蛋白的氨基酸序列 ,JS3和JS4的同源性最高达 97% ,与上述其它病毒的同源性在 91 %～ 97%之间 ;七肽区的氨基酸序列 ,在强毒株完全相同 ,而在弱毒株有一个丝氨酸突变成了其它氨基酸。

摘要：根据已报告的传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ） ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列，在病毒 Ｖ Ｐ２ 区域，设计 １ 对引物，并在 ２ 引物上分别加 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ酶切位点。对 ２ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 分离株 Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４，用异硫氰酸胍酚氯仿抽提一步法提取病毒 Ｒ Ｎ Ａ，然后进行逆转录和 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增，将扩增片段经酶切纯化后克隆于 ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中，以双脱氧链末端终止法测定 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列。将测定的分离株与标准对照株（ Ｓ１） Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ Ｖ Ｐ２ 基因片段的核苷酸序列进行计算机分析比较， Ｊ Ｓ３ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ ， Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ ， Ｊ Ｓ３ 与 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９９％ 。推导编码蛋白氨基酸序列， Ｊ Ｓ３ 和 Ｓ１ 的同源性为 ９７％ ， Ｊ Ｓ４ 与 Ｓ１ 的同源性为 ９６％ ， Ｊ Ｓ３ 和 Ｊ Ｓ４ 的同源性为 ９８％ 。这表明在我国流行的 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 毒株与标准毒株相比不仅在免疫学反应上有差异，而且在病毒核酸序列上有变异，这种变异是造成疫苗免疫失败或免疫逃避的分子基础。