摘要：目的建立疟疾消除后高效的蚊媒监测多重PCR方法。方法设计疟原虫属、人血、中华按蚊和蚊通用4对特异性引物,与通用引物(5′-CGAGTCCTGCGGTCTCAAATT-3′)连接后,形成4对嵌合特异性引物。常规PCR确定各引物对的最佳退火温度和引物工作浓度,多重PCR优化4对引物混合后的最佳反应条件,引入模拟风险感染阳性蚊虫样品,建立敏感的多重PCR反应体系。检测4种疟疾(间日疟、卵形疟、恶性疟、三日疟)患者全血样品的原虫密度梯度稀释样品的各基因扩增情况,评估检测灵敏度。用溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫、田鼠巴贝虫、杜氏利什曼原虫、刚地弓形虫、日本血吸虫尾蚴、卫氏并殖吸虫、蛔虫、牛带绦虫、猪带绦虫等11种其他寄生虫虫体DNA或感染样品评价该方法的检测特异性。用畜圈周围采集的野生中华按蚊样品,评价所建PCR方法的应用效果。结果优化后的多重PCR反应体系各组分含量(体积比)为:DNA模板10%、引物Mix10%、三蒸水30%,Taq酶预混液50%。引物Mix中,蚊通用、按蚊、人血和疟原虫引物的用量配比为1∶1.75∶3∶5。反应体系的最佳循环条件为:95℃5 min;94℃15 s,60℃20 s,72℃20 s,循环4次;94℃15 s;64℃20 s,72℃20 s,循环9次;94℃15 s,68℃20 s,72℃24 s,循环25次;72℃3 min;10℃5 min。疟原虫属扩增产物的长度为662~717 bp,人血为519 bp,中华按蚊为432 bp,蚊通用为190~320 bp。4种疟疾患者血样经优化后的多重PCR检测结果显示,该法对间日疟患者血样的灵敏度最高,检出最低原虫密度为10.7个虫/μl血;对三日疟患者血样的灵敏度最低,检出最低原虫密度为133.3个虫/μl血;对卵形疟和恶性疟患者血样的检出最低原虫密度分别为15.0和34.0个虫/μl血;检测灵敏度平均值为48.25个虫/μl血。检测模拟风险感染阳性蚊虫样品结果显示,中华按蚊模拟阳性样品显示为4个条带(662~717、519、432、190~320 bp),吸食人血后的中华按蚊样品为3个条带(519、432、190~320 bp),未吸血或吸食畜血的中华按蚊样品为2个条带(432、190~320 bp),吸人血的非中华按蚊样品为2个条带(519、190~320 bp),未吸血或吸食畜血的非中华按蚊样品为1个条带(190~320 bp)。特异性检测结果显示,11种其他寄生虫DNA样品结果均为阴性;对畜圈周围采集的野生中华按蚊样品和室内吸食人血的蚊虫样品检测结果显示,人血引物的特异性良好。结论本研究建立的疟疾蚊媒多重PCR检测方法,1次检测可同时获取蚊种鉴定、人血指数和疟原虫感染等多方面信息,敏感性高、特异性好。

摘要：目的了解上海市成年人感染性腹泻病例的季节分布等流行特征及病原学特征。方法对2014-2017年22家上海市成人腹泻病监测点医院肠道门诊的腹泻病例进行主动监测,通过访谈形式开展流行病学调查,并间隔抽样采集病例的粪便标本。由监测点医院所在区CDC开展12种细菌和5种病毒的病原学检测。分析感染性腹泻的病原谱特征,采用集中度值及圆分布方法分析不同病原感染性腹泻的季节分布特征。结果2014-2017年,上海市腹泻病综合监测系统共监测≥18岁成年人腹泻病例96067例,共采集9573例病例的粪便标本,标本检测阳性率46.44%。流行特征上,成年人感染性腹泻共有夏、冬季2个发病高峰,夏季以致泻性大肠埃希菌和副溶血性弧菌等细菌感染为主,冬季以诺如病毒等病毒感染为主。细菌感染和病毒感染均有季节集中倾向(雷氏检验P<0.001),细菌感染季节性强于病毒感染。病原学检测显示病毒感染占比达60.19%,病原谱分析显示前5位优势病原依次为诺如病毒、轮状病毒、致泻性大肠埃希菌、副溶血性弧菌和沙门菌。结论上海市成年人感染性腹泻门诊病例以病毒感染为主,主要为诺如病毒,发病具有季节性,呈现夏季的细菌感染高峰和冬季的病毒感染高峰。对腹泻病开展持续监测可掌握流行特征和病原学特征及流行趋势,进而采取针对性防控措施。

摘要：目的建立高效的疟原虫种属特异性检测方法。方法设计疟原虫种(核糖体18S rRNA,4对)和属(线粒体基因,1对)特异性引物,与通用引物(5′-CGAGTCCTGCGGTCTCAAATT-3′)连接后,形成5对嵌合特异性引物。常规PCR确定各对引物的最佳退火温度和引物浓度,多重PCR优化5对引物混合后的最佳反应条件,建立反应体系(命名为P5-mPCR方法)。用P5-mPCR检测不同原虫密度的间日疟原虫(Pv)、三日疟原虫(Pm)、卵形疟原虫(Po)、恶性疟原虫(Pf)感染者血样和模拟混合感染样品,确定P5-mPCR方法的检测灵敏度。用日本血吸虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫、猪囊尾蚴、卫氏并殖吸虫、隐孢子虫等其他寄生虫感染者血样或虫体DNA评价P5-mPCR方法的特异性。用212份疟疾送检血样,与巢式PCR方法比较评价其应用价值。结果优化后的P5-mPCR反应体系各组分含量(体积比)为:DNA模板10%、引物Mix 5%、dd H_2O 35%,Taq酶预混液50%。反应体系的最佳循环条件为:95℃ 5 min;94℃ 15 s,58℃ 20 s,72℃ 20 s,循环5次;94℃ 15 s,62℃ 20 s,72℃ 20 s,循环10次;94℃ 15 s,68℃ 20 s,72℃ 20 s,循环25次;72℃ 3 min;10℃ 5 min。扩增产物的长度分别为:Pv 778 bp,Pm 582 bp,Po 400 bp,Pf 256 bp,疟原虫属334 bp。其检测灵敏度分别为4.49、5.45、6.39、4.07个虫/μl血(种特异性检测平均值为4.85个虫/μl血)和0.10~1.07个虫/μl血(属特异性检测的平均值为0.41个虫/μl血)。P5-mPCR检测含有50~200个虫/μl血的模拟混合样品,各特异性扩增条带均清晰可见;检测日本血吸虫、刚地弓形虫、杜氏利什曼原虫、猪囊尾蚴、卫氏并殖吸虫、隐孢子虫等其他寄生虫样品,结果均为阴性。巢式PCR和P5-mPCR检测212份疟疾送检血样,两种方法检测结果的一致性较高(Kappa=0.866,P<0.01),检出的阳性率分别为75.0%(159/212)和79.7%(169/212),差异具有统计学意义(χ~2=8.100,P<0.01)。从分型诊断来看,两者的差异主要来源于Pf(P<0.01)和Po(P<0.05)样品,对Pv、Pm和混合感染血样的检测结果,两种方法差异无统计学意义。结论建立的P5-mPCR方法具有敏感性高,特异性好,操作简便快速,检测结果易于判断,一次反应即可确定4种人体疟原虫。

摘要：对樟芝菌丝体发酵全液冻干粉进行大鼠90d安全性评估试验,按樟芝菌丝体发酵液冻干粉量与大鼠体重比,设计低、中、高3个剂量(0.5、1.5、4.5g/kg)。结果表明:试验期间所有动物生长良好,无明显掉毛、行动迟缓、不吃不喝等临床症状,血液学、生物化学、尿常规、主要脏体比及组织学检查结果与对照组相比,均无明显差异。樟芝菌丝体发酵全液冻干粉的无观察危害反应剂量为每天4.5g/kg。

摘要：职业肿瘤流行病学是研究职业人群中肿瘤发生和死亡分布规律的一门学科.由于肿瘤病因的复杂性,因此在职业肿瘤流行病学研究设计中除了考虑职业接触因素外,还要考虑其它因素(特别是个人嗜好和生活习惯)可能存在的影响,这些因素就是所谓的混杂因素.

摘要：通过表位作图、表面展示及计算机预测等技术确定抗原表位的序列，再通过基因工程技术将多个表位串联起来形成多表位抗原。目前，有关多表位抗原的研究已取得长足进步，该文对特异性表位的选择和鉴定、多表位抗原基因的分子设计和合成等方面的研究进展进行了综述。

摘要：目的对棘球蚴AgB抗原家族的不同亚单位基因进行克隆,并对序列进行生物信息学分析和抗原表位预测分析。方法根据GenBank中的参考序列设计特异性引物,以我国新疆、甘肃和四川来源的细粒棘球蚴(Eg)和多房棘球蚴(Em)虫体DNA为模板扩增目的基因,将PCR产物克隆到TA载体中测序。用Bioedit分析软件和Blastn、NPS@和IEDB等在线分析系统对序列进行分析。结果分别从细粒棘球蚴和多房棘球蚴中克隆获得AgB抗原的全部5个亚单位基因,经测序确定为正确的目的序列;序列比对分析表明,EmAgB的5个亚单位基因序列高度保守,而EgAgB的亚单位基因变异性较大。细粒棘球蚴和多房棘球蚴种间差异分析显示,相同亚单位基因的序列一致性为87.69%～100%。AgB各亚单位抗原主要的二级结构包括α-螺旋、β-折叠和无规卷曲等3个类型。其中,AgB1、AgB2和AgB4等3个亚单位抗原中无规卷曲所占比例较高。AgB各亚单位抗原预测表位区共10个,分别是AgB1:1～7和21～27,AgB2:1～7和29～36,AgB3:1～11和18～28,AgB4:1～13、27～37和39～60,AgB5:1～11。结论 EgAgB和EmAgB亚单位抗原表位区的大部分序列一致或相似,预测的10个表位区主要位于序列N端。在5个亚单位抗原中,AgB1、AgB2和AgB4的抗原性较高。

摘要：近年卫生信息化建设情况,总结构建顶层设计、统一规划、统一标准,形成以个体为核心的电子健康档案信息系统成为卫生信息化发展的可行之道。分析电子健康档案数据模型,研究依据该数据模型设计信息系统在工程实践中的困难。重点阐述了"1+NX"模型的局限性,并针对性地提出对"1+NX"模型进行扩展,形成能更精确表达业务领域特征的"1+N(A+X)"模型。

摘要：[目的]探索利用卫星遥感数据建立符合上海市实际情况的近地面空气PM_(2.5)质量浓度的估算模型,并对模型进行检验和评价,为解决目前PM_(2.5)对人群健康慢性影响研究中存在历史数据缺乏和现实数据时空局限性提供有效的方法支撑。[方法]利用美国航天局(NASA)发布的中分辨率成像光谱仪(moderate-resolution imaging spectroradiometer,MODIS)L1B1KM卫星遥感数据,采用V5.2算法,推算气溶胶光学厚度(aerosol optical depth,AOD),并对其进行垂直和湿度校正,计算近地面干消光系数(Edry),引入日均温度、日均气压、日均风速等与气溶胶扩散密切相关的气象因子,建立不同季节估算PM_(2.5)质量浓度的多元线性回归模型,用实测值对模型进行验证,并与已有文献的建模方法进行比较。[结果]上海市春夏秋冬四季AOD均值分别为0.57、0.48、0.41、0.72,季节变化明显,冬春两季较高;空间分布上市区高于郊区。将AOD进行垂直校正和湿度校正,得到Edry,按照四季分别建立了由Edry估算PM_(2.5)质量浓度的多元线性回归模型,结果显示Edry与PM_(2.5)浓度四季均呈正相关,日均气压、日均风速与PM_(2.5)浓度均呈负相关,日均温度冬春季与PM_(2.5)浓度呈正相关,夏秋季与PM_(2.5)浓度呈负相关;按照现有文献方法,发现不引入气象因素模型的拟合精度和预测精度分别在50%左右,本研究建立的包含气象因素的模型四季的拟合精度和预测精度均较高,分别达到80.74%~90.83%和70.58%~77.79%,优于已有文献的建模方法。[结论]本研究基于卫星遥感数据构建的PM_(2.5)质量浓度推算模型拟合精度和预测精度都较高,经比较评价优于已有文献的建模方法,可以用于上海市近地面空气PM_(2.5)质量浓度的估算,以解决目前上海市PM_(2.5)质量浓度监测与人群慢性健康危害研究中存在的PM_(2.5)质量浓度历史数据缺乏和现实存在的监测站点少,分布不均等导致监测数据时空局限性的问题。

摘要：目的对细粒棘球蚴抗原B(EgAgB)的3个亚单位(EgAgB1、EgAgB2和EgAgB4)的反应性表位的结构进行预测分析并进行基因重组,鉴定构建的多表位重组抗原的反应性。方法用Bioedit和Discovery Studio Visualizer分析软件和I-TASSER在线服务器对EgAgB1、EgAgB2和EgAgB4等3个亚单位抗原序列及其不同组合方式的组合序列进行分析和结构预测。选择结构预测评分较高的表位或亚单位组合方式进行基因重组。设计特异性重叠引物,用重叠延伸PCR技术扩增目标序列。将目标序列克隆至pET32a(+)载体中构建表达质粒表达重组蛋白,表达产物经纯化后即为多表位重组抗原。采用蛋白质印迹(Western blotting)分析鉴定多表位重组抗原的反应性。结果结构预测显示,EgAgB1、EgAgB2和EgAgB4等3个亚单位的主要表位均呈"Z"字型结构,且主要表位区域亦均位于序列的中部;对拟进行组合的3个EgAgB亚单位和4个主要表位(KK36、RK30、B4-2和B4-3)的57种不同的组合方式进行了结构预测,选择6种组合方式进行重组表达。对6个多表位重组抗原(MEA-8、MEA-20、MEA-26、MEA-36、MEA-49和MEA-52)进行的Western blotting分析显示,多表位重组抗原与细粒棘球蚴病患者血清的反应条带明显强于AgB亚单位抗原。结论构建的6个多表位重组抗原与细粒棘球蚴病患者血清的反应性明显强于EgAgB亚单位抗原。