摘要：目的探讨影响青葙SRAP(sequence-related amplified polymorphism)扩增的各种因素,建立并优化青葙SRAP反应体系,为分子水平鉴定青葙子及其伪品,探讨青葙不同种质间的亲缘关系奠定基础。方法用CTAB法提取青葙DAN,设计Taq酶浓度(0.02、0.04、0.06U/μL)、dNTP浓度(0.10、0.20、0.30mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3水平3因素试验和Mg2+浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mmol/L)8水平单因素试验。在25μL体系中加入模板DNA20ng,对体系进行优化,用琼脂糖进行检测。结果建立了适合青葙的SRAP体系,在25μL体系中,DNA为20ng,Taq酶浓度为0.04U/μL,dNTP浓度为0.30mmol/L,Primer浓度为0.30μmol/L,Mg2+浓度为2.5mmol/L,优化后的体系目标条带增多,且比较稳定,重现性好,得到了较好的扩增效果。结论本研究建立的反应体系适合青葙SRAP的研究。为从分子水平鉴定青葙子正品与伪品以及鉴定青葙不同种质资源奠定了基础。

摘要：目的:考察不同因素对红花随机扩增多态性DNA反应体系的影响,建立并优化反应体系。方法:提取红花基因组DNA,分别设计Taq酶浓度(三水平:0.02、0.04、0.06 U/μL)、dNTP浓度(三水平:0.10、0.20、0.30 mmol/L)和引物(primer)浓度(三水平:0.16、0.32、0.48 pmol/L)的三因素实验,进行PCR扩增。根据PCR产物的琼脂糖凝胶电泳图确定最优的Taq酶浓度、dNTP浓度和引物浓度。进一步设计Mg2+浓度(三水平:1.0、1.5、2.0 mmol/L)和模板浓度(四水平:1.00、1.25、1.50、1.75 mg/L)的两因素实验,进行PCR扩增,确定最佳Mg2+浓度和模板浓度。结果:三因素实验中,第17条组合泳道和两因素实验中第6条组合泳道扩增主带稳定、均匀、清晰,条带数目多。结论:确定红花随机扩增多态性DNA反应25μL反应体系中最佳组合为:Taq酶0.04 U/μL、dNTP 0.30 mmol/L、引物0.32 pmol/L、Mg2+1.5 mmol/L、模板浓度1.00 mg/L。

摘要：目的:依据蔓荆子中有效成分的理化性质,优选蔓荆子的提取工艺条件。方法:采用L9(34)正交试验设计,以药材中总黄酮和紫花牡荆素的提取率作为考察指标,采用UV法和HPLC法测定,所得结果进行方差分析,综合两个指标结果确定最佳工艺。结果:蔓荆子药材粗粉,用20倍量的95％乙醇作提取溶剂,回流提取3次,每次1 h为最佳工艺。结论:优选出的工艺稳定,方法可行。

摘要：目的探讨二仙汤抗骨质疏松有效组分对维甲酸致骨质疏松大鼠的影响。方法将60只雌性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、戊酸雌二醇(0.2 mg/kg,阳性对照)组和二仙汤抗骨质疏松有效组分低、中、高剂量(50、100、200 mg/kg)组。除空白对照组外,各组大鼠连续14 d灌胃给予维甲酸[70 mg/(kg·d)]诱导骨质疏松症。造模结束后,按分组设计方案对各组大鼠每天灌胃给药(10 m L/kg),连续28 d。用ELISA试剂盒检测大鼠血清和尿液的生物化学指标,显微CT分析股骨远端骨密度和骨小梁微结构的变化。结果二仙汤抗骨质疏松有效组分可降低维甲酸致骨质疏松大鼠尿液钙的含量,以及血清碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶的活性(P<0.05或P<0.01),增加骨密度(高剂量组P<0.05),改善骨小梁微结构的退化。结论二仙汤抗骨质疏松有效组分可减少维甲酸致骨质疏松大鼠的骨丢失和骨组织微结构的退化。

摘要：目的:探讨影响红花SRAP扩增的各种因素,建立能够稳定扩增红花基因组的体系,为研究红花重要性状的遗传基础及建立分子辅助标记育种的技术平台奠定基础。方法:用CTAB法提取红花DNA,设计Taq酶浓度(0.02、0.040、.06 U/μl)、dNTP浓度(0.15、0.25、0.30 mmol/L)、Primer浓度(0.15、0.30、0.45μmol/L)3因素3水平27次实验和Mg2+浓度(0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mmol/L)8水平单因素实验。在25μl体系中加入模板DNA 20 ng。对体系进行优化,用琼脂糖进行检测。结果:本研究建立了适合红花的SRAP体系,Taq酶浓度为0.02 U/μl,dNTP浓度为0.25 mmol/L,Primer浓度为0.30μmol/L,Mg2+的浓度为3.0 mmol/L,优化后的体系目标条带增多,重现性好,得到了较好的扩增效果。结论:本研究建立的反应体系适合红花SRAP的研究。

摘要：目的优选啤酒花总黄酮的提取工艺。方法采用正交实验设计,设定总黄酮转移率、黄腐酚转移率、干膏得率指标,采用多指标综合评分法进行数据分析,优选提取参数。结果啤酒花黄酮类成分的最佳工艺:以12倍量70%乙醇作为提取溶剂,回流提取3次,每次提取2 h。结论优选出的工艺稳定,方法可行,提取效果好。

摘要：本文在简要介绍药物高通量筛选体系的基础上,就组建高效能的高通量筛选体系需要关注的因素,如作用靶点、测试方法、检测方法与作用靶点的匹配、关键参数、效能评价等进行了重点阐述,为高通量筛选体系的设计和实施提供了有益的借鉴。

摘要：目的:研究草乌煎煮时间、给药剂量与抗炎镇痛功效的相关性,确定药物发挥功效的最佳煎煮时间和给药剂量。方法:根据草乌祛风除湿止痛的功效,选择热板痛证模型、扭体痛证模型、急性炎证模型、亚急性炎症模型等,运用均匀设计和回归分析方法,确定药物不同功效的最佳煎煮时间和最佳给药剂量。结果:草乌能明显抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿胀;显著对抗鸡蛋清所致大鼠足跖肿胀;抑制巴豆油所致大鼠炎性肉芽肿的增生,减少炎性渗出液。显著减少醋酸所致小鼠扭体次数,延长小鼠扭体潜伏期;明显延长热板刺激小鼠添足潜伏期,提高热板小鼠痛阀值。草乌发挥抗炎功效的最佳煎煮时间为6 h,最佳给药剂量为2.4 g/kg;镇痛功效的最佳煎煮时间为6 h,最佳给药剂量为2.4 g/kg。结论:草乌具有明显的抗炎作用和中枢镇痛作用;煎煮时间、给药剂量与抗炎镇痛功效显著相关。发挥抗炎镇痛功效的最佳煎煮时间和剂量为6 h和2.4 g/kg。

摘要：目的：优选马齿苋提取物的制备工艺条件。方法：采用L9（3^4）正交试验设计，以药材中α-亚麻酸转移率、浸膏得率和浸膏中α-亚麻酸的含量作为考察指标，采用HPLC法测定α-亚麻酸含量，并对所得结果进行方差分析，综合3个指标结果确定最佳工艺。结果：优选出的最佳工艺条件为将马齿苋提取液回收至无乙醇，加水至0．5g／mL，用10％的NaOH溶液调pH为7．5～8．0，5000r／min离心1min，沉淀加水至1g／mL，超声10min，5000r／min离心1min。结论：优选出的制备工艺稳定可靠，简便可行。

摘要：目的:建立一种适合以红花cDNA为模板进行相关序列扩增多态性(SRAP)扩增的体系,筛选最佳的SRAP-PCR反应条件。方法:提取红花RNA并反转录成cDNA,以此为模板,使用正交设计表设计PCR反应中的3个重要因素Taq酶、三磷酸脱氧核苷(dNTPs)、引物的反应浓度。随后设计Mg2+的反应浓度以及模板含量,分别进行单因素试验。结果:本研究建立的红花cDNA-SRAP扩增条件为:25μL反应体系中含模板cDNA 20 ng,1×PCR缓冲液2.5 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,Taq DNA聚合酶0.04 U/μL,dNTPs 0.2 mmol/L,引物0.2μmol/L。优化后扩增结果稳定性好,条带清晰,多态性好。结论:该体系为红花功能基因的研究奠定了基础。