摘要：随着检验医学的发展,循证检验医学日渐成为国际关注的热点。为了帮助学生了解和认识循证检验医学,本文探讨了在医学检验系本科教育中开设循证检验医学课程的作用和意义,提出了课程教学目标和教学内容,并积极探索一种研究型、设计型、开放式的教学方式,以更好地促进临床检验医学的发展和检验地位的提高。

摘要：目的探讨细胞内La蛋白对HBV蛋白质表达的影响。方法针对人La蛋白序列设计特异性的小分子干扰RNA（siRNA），通过体外转录的方法合成双链siRNA，并转染进入稳定表达HBV的HepG2．2．15细胞，实时荧光定量基因扩增技术测定HepG2．2．15细胞中的La蛋白mRNA变化水平；电化学发光分析技术检测HepG2．2．15细胞分泌的HBsAg和HBeAg变化情况。所得数据进行配对假设检验的统计学分析。结果特异性siRNA干扰La蛋白mRNA的表达，使La蛋白在HepG2．2．15细胞中的表达降低；HepG2．2．15细胞分泌在培养上清液中的HBsAg和HBeAg表达显著下降，相关性分析显示，HBsAg、HBeAg变化水平与La蛋白mRNA变化水平呈正相关，相关系数分别为0．938和0．899。结论特异性siRNA能够抑制细胞内La蛋白mRNA的表达，La蛋白可通过某种方式影响HBV蛋白质的表达。

摘要：临床细菌学诊断的一个重要问题就是结果的可靠性.影响细菌学检验结果可靠性的因素很多,包括标本的采集与运送、标本是否合格、标本是否及时接种、分离培养的方法以及鉴定手段等,以往人们往往只重视菌种鉴定方法,而忽视了以上其他一些重要的因素.在细菌学鉴定过程中,如何操作、如何鉴定还缺乏规范,即使是也没有具体方案可供参考.为了提高细菌检验结果的准确性和可靠性,在分离培养临床微生物标本中,应该填写好每份标本细菌学检验程序记录单.但目前各医院使用的检验程序记录单各异,很多单位采用的记录单版面纸张大,需填写文字多,费时,在标本多的情况下往往不能坚持填写程序记录单.为了改变这一现状,作者根据多年来的工作经验,设计了一种临床细菌学检验程序记录单(简称"记录单"),对规范细菌的鉴定程序可能有一定的帮助.

摘要：科研设计是目前检验医学一个明显的薄弱环节,随着医学科学的发展和检验医学的确立,以往那种从属和被动局面应在我们努力之下予以改观.我们应站在主持和主动位置参与科研课题的设计和实施.为参与或主持设计,一些科研思路的建立必须掌握.为此,在多年的科研活动中,有关课题设计思路的一些个人经验体会简述如下,供同道参考.

摘要：目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定MP98的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽5(436-444aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体者PBMC增殖,并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽5GMFDGLSGV(436-444aa)是MP98上HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。

摘要：目的研究建立实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测人B细胞激活因子受体(BAFF-R)含量的方法,及探讨其在外周血单个核细胞(PBMC)中BAFF-R mRNA表达的检测价值.方法在BAFF-R基因高保守区设计特异性引物和荧光探针,用逆转录(RT-PCR)扩增目的片段实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BAFF-R mRNA含量,并以 BAFF-R mRNA和β2M mRNA含量的比值进行BAFF-R表达水平评价.结果 RFQ -PCR检测BAFF-R含量的线性范围为109 ～101 pg/ml,低浓度样本批内和批间变异系数(CV)分别为12.5%和11.9%,高浓度样本批内和批间CV分别为8.3%和9.3%.30名健康献血员样本的PBMC中,83%(25/30)有BAFF-R mRNA表达,范围为0.14～1.03.结论 RFQ -PCR检测BAFF-R mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性.

摘要：目的鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Rv0173中的HLA-A*0201限制性CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测结核杆菌Rv0173中可能存在的HLA-A*0201限制性CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位。结果位于Rv0173氨基酸序列肽3(21-30aa)和抗原肽7(161-170aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMCs增殖,并诱导产生特异性杀伤活性。结论肽3(RLSQSADQYL)(21-30aa)和肽7(LLRGGGLVNL)(161-170aa)是抗原Rv0173上HLA-A*0201限制性CTL的优势表位,可作为结核疫苗设计的候选表位。

摘要：目的　建立一种敏感、特异和精确的乙型肝炎病毒基因PCR及其产物酶联杂交定量分析技术。方法　制备了一种与野生扩增片段等长的PCR内参照 ;设计了一对HBV基因组S区基因扩增引物 ,上游引物的 5′ 端用生物素修饰 ,可同时扩增长为 319bp的野生和内参照片段。两套捕获探针可分别与竞争PCR产物中的野生片段和突变片段杂交。在同一反应管内 ,加入已知量内参照及待测HBVDNA标本 ,进行PCR扩增 ,然后用酶联杂交法进行产物分析。根据Clementi等介绍的公式计算待测标本中的HBVDNA含量。结果　灵敏度达到 10 -3fmol/L。在该法中 ,由于有PCR过程中的特异引物及酶联杂交过程的特异探针两个环节的限制 ,因此具有很高的特异性。结论　竞争PCR及其产物酶联杂交定量法是一种相对精确、灵敏度很高和特异性较强的HBV基因全定量测定技术 ,优于外参照法及其它产物定量法。

摘要：目的鉴定隐球菌抗原MP98中的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。方法应用数据库SYFPEITHI预测隐球菌MP98中可能存在的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定MP98的HLA-A*0201限制性CD8+CTL表位。结果位于MP98氨基酸序列肽3(93-102aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMC增殖,并诱导产生具有特异性杀伤活性的CTL。结论肽3 QLFATINSTL(93-102aa)是抗原MP98上HLA-A*0201限制性CD8+CTL的优势表位,可作为隐球菌疫苗设计的候选表位。

摘要：目的:建立实时荧光定量PCR(RFQPCR)检测人B细胞激活因子受体TACImRNA含量的方法,初步探讨健康献血员外周血单个核细胞(PBMC)中TACImRNA表达水平。方法:在TACI基因高保守区设计特异性的引物和荧光探针,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中TACImRNA准确含量,并以TACImRNA和β2MmRNA含量的比值作为评价TACI表达水平的指标。结果:本法检测TACImRNA含量的线性范围为109～101pg/ml,批内和批间重复性测定的CV分别为2.97%～9.32%和5.86%～10.29%。40例健康献血员样本的PBMC中35例(87.5%)检出有TACImRNA表达,范围为0.02～2.11。结论:成功建立RFQPCR检测TACImRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性,为进一步探讨TACImRNA表达水平与自身免疫性疾病发病机制之间的关系奠定了基础。