摘要：在利用建立的聚合酶链反应（PCR）技术测定尿中人巨细胞病毒（HCMV）的方法中,自行设计并合成了两对HCMV的DNA引物。经实验证明,这两对引物是HCMV特异和保守的顺序,对正常人基因组DNA和其它疱疹病毒无交叉反应。本方法可测出少至1015g（1 fg）的病毒DNA。对47例疑为HCMV感染患儿的检测结果和病毒分离法测定结果相比较,其中31例两者皆为阳性;12例皆为阴性,4例本方法狲定阳性,病毒分离法为阴性,但同时测定血清HCMV-1gM呈阳性反应,支持本方法的结果。以上结果表明,本方法的特异性和敏感性都不低于病毒分离法,并具有操作简便、反应周期短、对长期保存并已消失感染性的样品也有效等优点,适于临床推广。

摘要：从弓形虫(ZS_2株)基因组文库中筛选出了一个弓形虫特异DNA片段的克隆,对克隆的片段进行了部分顺序分析。根据所得DNA顺序,自行设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立了体外扩增弓形虫特异DNA顺序的聚合酶链反应(PCR)方法。4种不同来源的弓形虫株DNA、人工感染弓形虫的三头幼猪白细胞和胸腺DNA经过PCR扩增,均出现特异的扩增条带;而正常人、正常幼猪外围血白细胞、正常小鼠脾脏、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、溶组织内阿米巴和人巨细胞病毒DNA均不出现特异的扩增条带。对扩增产物进行了Southern印迹和限制性内切酶图谱分析,证明该PCR产物是弓形虫DNA特异的顺序。该方法可测出少至1pg的弓形虫DNA或1个弓形虫体的裂解液。本文分析的DNA顺序和设计合成的引物顺序数据,经电脑DNA数据库检索,证明无相同的顺序。本方法并具有简便、快速等优点,便于推广应用。

摘要：由于大多数肿瘤相关抗原是自身抗原 ,且免疫耐受通常保护个体避免发生自身免疫反应 ,所以用肿瘤相关抗原在体内刺激抗肿瘤T细胞反应时 ,免疫耐受是很难克服的障碍之一。一般认为 ,免疫耐受主要针对肿瘤的一些明显表位 ,而与HLA低亲和力的潜在表位则可能不受免疫耐受的影响。基于这一假设 ,我们设计合成了三条人端粒酶逆转录酶 (hTERT )相关的抗原肽 ,p5 72 (RLFFYRKSV )、pY5 72 (YLFFYRKSV )和pF5 72 (FLFFYRKSV ) ,p5 72是近期研究较多的一条与HLA A2 1分子低亲和力的 9肽 ,pY5 72和pF5 72是我们根据 9肽氨基酸位置特点突变合成 ,理论上它们与HLA A2 1分子的亲和力要高于p5 72 ,用T2细胞模型检测证实了这一点。DC细胞是最强的抗原提呈细胞 ,我们在试验中用DC细胞负载不同的肽在体外刺激特异性CTL的分化。

摘要：目的：评价不同透析膜血液透析的生物相容性。方法：定量反转录多聚酶链反应、细胞原位杂交技术和酶联免疫吸附方法。结果：在分组设计与拉丁交叉设计中，ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α及ＩＬ－６血浆水平无论铜仿膜、聚甲基丙烯酸甲酯膜（ＰＭＭＡ）或聚砜膜血透时各组间差异不明显（Ｐ值均＞０．０５）；ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α与ＩＬ－６ｍＲＮＡ在正常人外周血单个核细胞中无表达，而尿毒症未透析患者和血透患者外周血单个核细胞中均有表达，其中血透者的表达水平明显高于尿毒症未透析患者。反转录多聚酶链反应和细胞原位杂交检测发现铜仿膜血透时各细胞因子基因表达水平均显著高于ＰＭＭＡ与聚砜膜（Ｐ＜０．００１），而ＰＭＭＡ与聚砜膜间无差异（Ｐ＞０．０５）。结论：尿毒症（未透析）及血透均可激活外周血单个核细胞。从细胞因子基因表达水平看，铜仿膜生物相容性较ＰＭＭＡ与聚砜膜差。作者认为这一方法在评价透析膜的生物相容性上优于血浆水平测定。

摘要：本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体系，在ＨＳＶ－Ⅰ产生５４３ｂｐ条带，ＨＳＶ－Ⅱ产生３７２ｂｐ条带，据此在基因水平上对ＨＳＶ进行分型。５株不同来源的ＨＳＶ（２株Ⅰ型，３株Ⅱ型）分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该反应体系与其它来源的ＤＮＡ不产生特异反应，敏感性可达１ｆｇ。应用该法对１５１份临床可疑ＨＳＶ感染的标本进行检测并分型，结果与免疫学方法完全一致。

摘要：由于线粒体DNA(mtDNA)具有进化速度快,群体内变异大,分子结构简单而易于分析等特点,近年来已广泛用于群体遗传学的研究。目前,对人mtDNA的提取都采用新鲜组织。在方法学上国外一般采用氯化铯超速离心法,国内则采用柱层析法、透析法。用上述方法抽提mtDNA的得率本身就较低,加之冰冻组织的线粒体由于冻融损伤。得率更是微乎甚微。本文参考有关文献,设计一种更简易方便的方法,提取mtDNA的得率及纯度都较高,经处理能满足限制酶分析的要求,可用于冰冻组织线粒体DNA的抽提。

摘要：根据本实验室筛选出的弓形虫(ZS_2株)特异DNA克隆片段的部分顺序分析的数据,设计并合成特异的寡核苷酸引物对,建立多聚酶链反应诊断弓形虫病的方法。不同来源的弓形虫株和7例畸形胎儿DNA经体外基因扩增,扩增产物经电泳检测,均出现特异的扩增条带。对42例肝炎综合症的婴儿和33例不良生育史的孕妇的外周血白细胞DNA检测,分别为6例和4例阳性。50例正常人外周血白细胞DNA检测均为阴性。对扩增产物进行Southern印迹分析,以^(32)P标记克隆的弓形虫特异DNA片段为探针,能与阳性病例特异的扩增条带杂交,而不与阴性样品的扩增产物杂交。本法并与其它检测方法的结果相比较,具高度特异、敏感且快速的优点。

摘要：我室应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术，采用自行设计和合成的三条引物（一条为两型共同引物，两条为两型特异引物）组成一个反应扩增体系，对６３例羊水或绒毛、１４例畸胎组织、１００例宫颈分泌物及５０例宫颈石蜡包埋切片进行单纯疱疹病毒Ⅰ型和Ⅱ型的检测，其阳性率分别为４．８％，１４．３％，１６％及１０％。阳性标本中９０％是ＨＳＶ－Ⅱ，１０％为ＨＳＶⅠ型或Ⅰ＋Ⅱ型混合感染。提示：ＨＳＶ－Ⅱ感染与胎儿先天性畸形有关，与宫颈组织炎性浸润、细胞过度增生也有关系。

摘要：已知巨细胞病毒是婴儿肝炎综合征的常见病原之一,但临床生存诊断困难,且没有确切感染率的报道。根本原因在于,过去没有一种迅速、准确的辅助诊断方法。我们利用基因数据库资料,设计了两对引物,并建立了聚合酶链反应法检测巨细胞病毒技术。该技术反应时间短,结果准确可靠,无交叉反应。我们检测了138例临床诊断为婴儿肝炎综合征的患儿,其中75例检出尿中带病毒,阳性率为66.96％。对照组正常婴儿34名,仅5名尿中查到病毒,阳率性为14.70％。具显著差异(P<0.01)。实验证明,聚合酶链反应法辅助诊断巨细胞病毒感染性婴儿肝炎综合征可靠、可行。数据表明,巨细胞病毒感染在婴儿肝炎综合征中占首要地位。

摘要：用ＰＣＲ方法检测人骨髓细胞微小病毒Ｂ１９ＤＮＡ。设计了二对特异引物，ＰＣＲ反应后，出现期望６９９ｂｎ及３１５ｂｐ条带。并用Ｂ１９特异探针确认其特异性；套式ＰＣＲ灵敏度可达１ｆｇ。１％ＮＰ－４０法处理样品简便实用。分析５０例选择性临床血液病患者骨髓涂片，发现有明显贫血症状的血液病存在较高的Ｂ１９感染率。