摘要：　　通过抑制消减杂交技术,比较问号钩体黄疸出血群赖型赖株与双曲钩端螺旋体57001株之间基因组的差异,筛选致病钩体特有的基因片段.主要方法为以问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株为tester,非致病性双曲钩端螺旋体57001株为driver,培养后分别抽提基因组DNA,经Alu Ⅰ酶切后连接特殊设计的adaptor进行消减杂交和PCR,获得的消减混合物经T/A克隆后,转化入pMD18中建立消减杂交文库.经PCR和dot blot筛选鉴定阳性克隆,并进行测序及同源分析.结果显示在随机挑取的188个克隆中,有35个含有tester特异的DNA序列.特异性片段测序后进行生物信息学分析,发现.本研究筛选并分析了可能与钩体毒力相关的基因.为进一步探讨该基因地生物学功能及阐明问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株致病分子机制打下了基础.……

摘要：目的　应用生物信息学方法预测钩体外膜蛋白OmpL1的表位 ,结合基因工程手段进行表位重组、表达和分离纯化。方法　用预测程序ProPred和ANTIGENIC预测OmpL1的表位 ,PCR合成重组表位基因片段 ,克隆PCR产物构建表达质粒 pGEX/Omp Omp ,测序验证。对含有该质粒的大肠杆菌BL2 1(DE3)进行诱导表达 ,表达产物westernblot分析并纯化融合蛋白。结果　预测到 2个既具有MHC结合肽特性又具有B细胞表位特征的肽段。重组表位基因序列与理论设计完全一致。IPTG诱导BL2 1(DE3)中高效表达Mr约 30 0 0 0的融合蛋白 ,纯化后蛋白纯度 >90 %。结论　成功构建原核表达质粒pGEX/Omp Omp ,并进行含重组表位的GST融合蛋白的分离纯化 ,为OmpL1的表位研究和应用于亚单位疫苗奠定了基础。

摘要：目的 亚克隆和表达日本血吸虫钙结合蛋白SjE16的编码基因,初步研究其免疫反应性。方法 根据表达序列标签(ESTs)测序的结果设计引物,从含有钙结合蛋白基因片段的克隆中扩增得到该编码基因,亚克隆人原核表达载体pGEX4T-1中表达,然后用ELISA方法初步检测重组蛋白的免疫反应性。结果 成功克隆和表达了日本血吸虫SjE16基因,该重组蛋白用于血吸虫病免抗体ELISA检测,其特异性和敏感性分别为94.1％(16/17)和88.2％(15/17)。非治疗组在感染后9～11wk抗体水平升高,并在感染后21wk仍维持高水平,而治疗组血清抗SjE16抗体水平在治疗后11wk下降至感染前水平。SjE16用于检测血吸虫病患者血清中的抗体,其特异性为98.3％(57/58),急性患者和慢性患者的敏感性分别为85.5％(53/62)和70.2％(40/57)。结论 获得了SjE16的重组蛋白,该蛋白能被日本血吸虫病患者的血清所识别,且在病兔药物治疗后迅速下降。SjE16重组蛋白具有诊断现感染和疗效考核的潜能。

摘要：目的　克隆和表达日本血吸虫免疫素 Sjp5 0的编码基因 ,初步研究其免疫反应性。方法　根据 EST测序的结果设计引物 ,从含有免疫素基因片段的克隆中扩增得到该编码基因 ,亚克隆入原核表达载体 p GEX4 T- 1中表达 ,然后用 EL ISA方法初步检测重组蛋白的免疫反应性。结果　成功克隆和表达了日本血吸虫 Sjp5 0基因。该重组蛋白用于血吸虫抗体的 EL ISA检测 ,在动物实验中检测特异性和敏感性分别为 94 .12 %和 76 .6 7% ,非治疗组兔体内的抗体在感染后 9- 11周上升到高水平 ,并在感染后 2 1周仍维持在高水平 ,而治疗组兔血清中抗 Sj Fp5 0抗体水平在治疗后 11周迅速下降至感染前抗体水平。用于血吸虫病人血清中的抗体检测的特异性为 98.30 % ,急性病人和慢性病人检测的敏感性分别为 95 .2 0 %和 6 3.2 0 %。结论　获得了 Sjp5 0的重组蛋白 ,该蛋白能被日本血吸虫病人的血清所识别 ,且在动物实验中其抗体水平在药物治疗后 11周降至感染前的水平 ,具有诊断现症感染病人和疗效考核的潜能。