摘要：目的 采用成簇的规律性间隔的短回文重复序列(CRISPR)/Cas9系统对斑马鱼胱硫醚-β-合成酶b基因(cbsb)进行编辑,并制备稳定的斑马鱼cbsb敲除品系。方法 使用ClustalX软件分析斑马鱼cbsb编码蛋白(Cbsb)的保守结构域,利用生物信息学选取向导RNA(gRNA)靶点,体外合成并纯化gRNA和密码子优化的Cas9 mRNA,在刚受精的斑马鱼胚胎(1-cell期)中显微注射混合的gRNA和Cas9 mRNA,提取受精后3 d的斑马鱼幼鱼基因组,通过PCR扩增并测序分析靶点的切割效率,通过基因组扩增和测序筛选并获得cbsb敲除的稳定品系。结果 斑马鱼Cbsb与人、小鼠胱硫醚-β-合成酶(CBS)高度同源。在斑马鱼Cbsb保守结构域的编码序列处设计4个靶点,其中4#靶点具有高效的切割效率,利用该靶点制备并筛选获得多个cbsb敲除斑马鱼,选取-3+13 bps和-228 bps移码突变的两种品系,进一步筛选获得稳定的cbsb敲除品系。结论 利用CRISPR/Cas9系统成功制备了两种斑马鱼cbsb敲除的稳定品系,为进一步在斑马鱼活体中研究Cbsb的功能奠定了基础。

摘要：介绍自1990年6月以来的4例低压回肠代膀胱以及作者自行设计的3例回肠折叠包埋式输尿管抗反流术的手术方法。此手术的优点是经尿道排尿而可随意控制,再植的输尿管无一例反流和有临床意义的梗阻。用无水酒精处理回肠袋粘膜,使水、电解质早期即可处于稳定。4例中1例因癌肿晚期未能达到自控排尿的功能。

摘要：目的　设计控制可靠、导尿容易、并发症少的可控性膀胱输出道的手术方法。　方法　对 8条成年杂种狗采用经裁剪后缩小管腔直径的回肠作为输出管 ,用宽 1.5cm的涤纶带以 40 0 g的拉力将输出管固定于腹直肌上。术后 12周作尿动力学和X线检查。　结果　 8条狗的腹壁造口可容易地插入 14F导管。尿动力学检查示膀胱输出管最大闭合压为 117～ 15 7cmH2 O ,平均 137cmH2 O。腹壁造口逆行造影示输出管被固定在腹壁下 ,无狭窄 ,膀胱造影示输出管内无造影剂。

摘要：目的　设计一种控尿可靠、导尿容易、并发症少且操作简单的可控性膀胱输出道的手术方法。方法　 2 0例需行可控性尿流改道的患者采用输出道悬吊的手术方法进行治疗。患者中 14例为膀胱恶性肿瘤 ,2例为已行回肠膀胱术 (bricker术 )者 ,3例为重症神经源性膀胱 ,1例为膀胱阴道瘘。结果　术后随访 3～ 2 4个月 ,平均 14 .4个月 ,所有患者的腹壁造口均可容易地插入 16F导管。术后仅 1例控制尿不完全 ,其余患者均控制尿完全。 16例术后 3～ 12个月行尿动力学检查 ,膀胱充盈时输出管最大内压为 64～ 13 4cmH2 O( 1cmH2 O =0 .0 98kPa) ,平均为 86cmH2 O。腹壁造口逆行造影示输出管被固定在腹壁下 ,无狭窄。结论　输出管悬吊能明显增强缩窄回肠的控制机制 。

摘要：背景:膀胱脱细胞基质因其制作工序简单,具有良好的生物相容性及细胞黏附性,越来越多的被应用在组织工程生物支架方面。目的:验证冷冻后真空抽干的膀胱脱细胞基质的生物学特性。设计、时间及地点:生物材料相容性实验,于2008-05/11在上海组织工程研究与开发中心实验室及上海第六人民医院实验动物房完成。材料:取2只新西兰大白兔,制备膀胱脱细胞基质。方法:正中切开兔膀胱,仔细剥下膀胱黏膜层,置入三蒸水中浸泡24h。放入含0.1%的聚乙二醇辛基苯基醚及0.15%氨水的脱细胞液中,定期更换脱细胞液,浸泡14d。对照组为直接体积分数为75%的乙醇浸泡保存,实验组为-80℃冷冻24h后真空抽干24h,体积分数为75%的乙醇浸泡保存。主要观察指标:分别通过苏木精-伊红染色、Masson染色、扫描电镜及力学测定研究其理化性质;采用兔膀胱平滑肌细胞作为种子细胞,通过细胞黏附实验、细胞活力测定(MTT法)、皮下埋植实验对2种膀胱脱细胞基质的各种生物学特性进行评价比较。结果:苏木精-伊红染色及Mason染色显示2种膀胱脱细胞基质无细胞成分残留,保持较完整的胶原成分;电镜扫描表面均呈裂隙状结构,以胶原为主,适合细胞黏附;力学检测实验组膀胱脱细胞基质保持了原来膀胱脱细胞基质的力学特征,且具有更好的拉伸率;MTT法测定细胞毒性均为0级;与膀胱平滑肌细胞均有良好的黏附性;兔皮下埋植1个月,均与皮下组织黏附良好,有肌肉黏附及血管增生。结论:经冻干后真空抽干的膀胱脱细胞基质具有良好可操作性及拉伸率,且保持了原有的生物相容性,制作简单,是理想的组织工程生物支架。

摘要：目的 加强静脉输液系统化管理,规范静脉输液用药行为,促进合理用药。方法 从组织构建、信息化建设、全程精细化管理、质量评价及改进4个部分建立输液管理模式。通过整合部门、知识、数据资源,建设信息系统,组织医护培训及患者宣教,建立泌尿外科试点积极开展输液管理工作。结果 构建形成多部门联动的静脉输液系统化管理模式,多数部门对安全合理输液重视度明显加强。泌尿外科试点工作效果显著。2021年6-12月份数据显示,较6月份,12月份泌尿外科住院患者抗菌药物使用强度下降87.0%,住院患者抗菌药物静脉输液使用率下降18.7%,住院患者静脉输液天数占比下降21.2%,住院患者平均每床日使用体积下降27.3%,住院患者平均每床日使用袋数下降17.4%。指标数据的下降证明了管理模式的有效性。另外,临床医师按照路径合理开具抗菌药物,抗菌药物使用更加规范化。结论 依照系统化管理模式,以信息系统为依托,关注重点监控药品,从试点科室入手有利于逐步加强静脉输液管理,提高用药合理性。

摘要：背景:脂肪干细胞是目前组织工程研究中的热点种子细胞,但由于其缺乏特异性的表面标记,故目前尚缺乏有效的纯化方法。通过纯化取材的脂肪来提高干细胞纯度是一种简单可行的方法。目的:分析在原代培养脂肪干细胞前,如何对取材的脂肪组织进行纯化。设计、时间及地点:观察对比动物实验,于2007-12/2008-03在上海市第六人民医院上海市实验医学动物中心完成。材料:选用4周龄SD大鼠,用于获得腹股沟处的脂肪组织。方法:解剖SD大鼠腹股沟处取材的脂肪组织,游离出其表面血管及内部的血管分支。剔除内部血管的同时将分布在血管周围的椭圆形结节组织一并切除。主要观察指标:对椭圆性结节行苏木精-伊红染色,显微镜下观察以确定其组织类型。分别对经过纯化处理和未纯化处理的脂肪组织行苏木精-伊红染色,显微镜下观察其组织结构上的差异。结果:①椭圆性小结节经苏木精-伊红染色后在显微镜下观察证实为淋巴组织。②纯化的脂肪组织结构一致,细胞成分单一;未纯化的脂肪组织结构紊乱,细胞种类多样、成分复杂。结论:脂肪干细胞原代培养所用的脂肪组织中含有多种组织成分,在剔除脂肪组织表面的血管、皮肤和肌肉组织的同时应一并剔除组织内的血管及其周围淋巴结。

摘要：背景:绿色荧光蛋白作为细胞示踪标记已得到广泛应用,作者所查尚未见到以增强型绿色荧光蛋白作为标记方法用于研究脂肪干细胞与膀胱脱细胞基质复合后体外生长特性的报道。目的:利用绿色荧光蛋白标记兔来源的脂肪干细胞,观察其作为种子细胞复合膀胱脱细胞基质体外培养的生长特性,为复合物回植体内时间提供参考。设计、时间及地点:细胞标记示踪实验,于2009-01/05在上海组织工程研究与开发中心及上海第六人民医院实验动物房完成。材料:取2只新西兰大白兔,制备膀胱脱细胞基质。取2只新西兰大白兔脂肪分离脂肪干细胞。方法:体外培养增殖后脂肪干细胞转染增强型的绿色荧光蛋白,转染前后根据增殖速度,绘制生长曲线。然后将增强型绿色荧光蛋白转染的第3代脂肪干细胞以30×106的浓度接种于1cm×1cm大小的膀胱脱细胞基质支架材料上培养。主要观察指标:观察细胞转染后的生长特性,检测复合后的细胞总数,荧光显微镜观察复合后细胞形态。结果:脂肪干细胞经转染后生长增殖速度未受明显影响。细胞DNA检测示复合培养7d细胞增殖状态最佳。荧光显微镜观察显示培养7d细胞增殖良好,10d后呈现老化形态。结论:增强型的绿色荧光蛋白转染不影响脂肪干细胞传代、增殖。脂肪干细胞-膀胱脱细胞基质复合物体外培养7d左右回植较合适。

摘要：背景:从以往的文献来看,阴茎海绵体平滑肌细胞的原代培养存在着制作时间长,纯度不高以及易被成纤维细胞污染等诸多缺点。目的:探索兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯化培养技术及纯度鉴定方法。设计、时间及地点:对照实验,于2007-10/2008-03在上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科,上海市组织工程研究与开发中心完成。材料:成熟的雄性新西兰大白兔5只,体质量2.5～2.8kg。方法:取雄性新西兰兔新鲜的阴茎组织,利用高浓度的胶原酶消化法结合差速贴壁技术对海绵体平滑肌细胞进行纯化培养。以同期兔成纤维细胞作为对照参考。主要观察指标:以四甲基偶氮唑盐分析细胞生长特性;以平滑肌肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白免疫荧光鉴定海绵体平滑肌细胞;以流式细胞仪检测P2及P5代细胞α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白阳性率变化情况。结果:培养细胞四甲基偶氮唑盐显示细胞指数增长期为6d左右,随后进入平台期。α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白均呈阳性反应,同期成纤维细胞仅α-肌动蛋白显示阳性结果。第2代细胞表达α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白阳性率分别65.3%,42.2%,62.3%。经过反复多次的纯化技术至第5代时,上述指标阳性表达率分别上升为92.8%,72.7%,78.1%。结论:通过高浓度的酶消化法及差速贴壁技术可获得高纯度的阴茎海绵体平滑肌细胞,肌球蛋白、结蛋白相对于α-肌动蛋白可以成为鉴定海绵体平滑肌细胞的特异性指标。

摘要：目的人工合成与微小RNA（miRNA，TniR）-1236所作用的p21基因启动子靶序列完全互补配对的4对小分子双链RNA（dsRNA）：dsP21-242、dsP21-243、dsP21-244和dsP21-245（dsP21-243序列配对程度最高），分别观察其与miR-1236在激活人膀胱癌细胞株T24和EJ细胞中抑癌基因p21表达能力的差异。方法参照小激活RNA（saRNA）的设计原则设计合成4对dsRNA。分别转染阴性对照组（dsContr01）、阳性对照组（miR-1236）和实验组（dsRNA）至T24和EJ细胞，通过实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）、反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westernblot分别检测p21mRNA和蛋白表达的水平。结果FQ-PCR检测结果显示实验组中仅dsP21-245能明显促进两种细胞中p21mRNA水平的升高；且与阴性对照组比较，dsP21-245分别上调T24和EJ细胞中p21mRNA的表达至2．32倍（P〈0.01）和2．84倍（P〈0．01）；与阳性对照组比较，两种细胞株中p21mRNA的表达差异均没有统计学意义（P〉0．05）。RT-PCR检测结果证实了p21mRNA表达变化的趋势。Westernblot结果显示在两种细胞株中p21蛋白表达水平的升高与p21mRNA水平的上调一致。其余3对dsRNA均未能显著上调两种细胞株中p21基因的表达（P〉0．05）。结论人工合成的dsP21-245能显著促进膀胱癌细胞中p21的高表达，且与miR-1236激活p21表达的能力差异无统计学意义。