摘要：应用两个RNA干扰实验技术网络的RNA设计软件,模拟SD大鼠晚期糖基化终产物受体(RAGE) mRNA的二级结构,设计针对RAGE mRNA417、221和534位点的3对小干扰RNA(siRNA)序列(21nt),再转化为能表达其小发夹结构RNA(shRNA)的寡核苷酸序列,分别将其克隆于pGCsi-U6/Neo/GFP载体,利用酶切和序列分析鉴定克隆的正确性。将RAGE特异性siRNA表达克隆转染肝星状细胞(HSC)-T6细胞系,以空白及转染非特异性siRNA表达克隆作为对照,分别以实时荧光定量PCR和Western印迹法检测各组HSC-T6细胞RAGE基因和蛋白质的表达。结果显示:成功构建了RAGE特异性siRNA重组表达载体pGCsi-R1、pGCsi-R2、pGCsi-R3和非特异性siRNA重组表达载体pGCsi-C,与对照组相比,转染特异性siRNA重组表达载体的HSC-T6细胞的RAGE mRNA表达受到明显抑制,在0.25～1.0nmol/L范围内,RAGE mRNA下调幅度呈浓度依赖性增加,以1.0nmol/LpGCsi-R1最显著,转染pGCsi-C的HSC-T6细胞的RAGE mRNA表达水平无明显变化。转染pGCsi-R1的HSC-T6细胞24、48和72h表达的RAGE mRNA分别较空白对照组下调(79.65±8.88)%、(78.96±7.94)%和(73.11±6.89)%(F=71.397,61.824,61.98,P均<0.01),在72h范围内,RAGE mRNA下调幅度呈时间依赖性降低。同时,转染pGCsi-R1的HSC-T6细胞50kDa和46kDa的RAGE、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA及蛋白质的表达也明显下调,分别为空白对照组的(43.91±1.18)%(F=386.19,P<0.01)、(36.33±0.78)%(F=386.07,P<0.01)、(57.53±3.25)%(F=20.91,P<0.05)和(58.48±3.08)%(F=56.59,P<0.05)。结果表明:pGCsi-R1表达的特异性siRNA可高效抑制HSC-T6细胞中RAGE基因和蛋白质的表达及肝星状细胞的激活。

摘要：目的通过动物实验探讨新型可降解防移位食管支架的安全性、降解性能及设计策略。方法采用医用聚对二氧环己酮[poly(p-dioxanone),PPDO]编制有"倒刺结"结构(实验组)和无"倒刺结"结构(对照组)的全覆膜分段式食管支架,分别植入巴马猪食管。术后每周1次胃镜检查,直至支架降解滑落。胃镜下观察支架移位、支架降解和食管黏膜增生情况。结果实验组(n=9)、对照组(n=9)实验猪分别植入有"倒刺结"、无"倒刺结"食管支架各9枚,手术均获成功。未出现食管破裂出血、生命体征异常等并发症。术后1、2、4周两组支架移位程度评分差异有统计学意义(P0.05)。结论新型可降解防移位食管支架植入安全,未发生严重并发症。早期(1~4周内)防移位效果显著,不影响支架降解,不增加食管黏膜增生,有一定的临床应用前景。

摘要：脂质体(liposome)特别是阳离子脂质体(cationic liposome)作为一种基因转运工具得到了广泛的应用。与其它非病毒基因转运系统一样，它具有生产简便、毒性低、无感染危险等优点［1］。脂质体介导的转染技术已被广泛应用于将外源性基因导入哺乳动物细胞的研究中。本文就近年来脂质体在真核细胞和真核生物中转基因应用的研究进展做一回顾。　　一、在治疗肿瘤方面的应用：脂质体作为一种转基因的载体，被人们纷纷应用于通过转移不同的外源基因来达到治疗各种肿瘤的目的。Meye等［2］用阳离子脂质体将表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的外源基因转入自行建立的两种肉瘤细胞株(L MS6-93，US8-93)中，转染后24小时，高达37%的细胞表达GFP，24～48小时转染效率最高，72小时后GFP表达下降。该实验表明，对于粘附生长的肿瘤细胞用脂质体转染是一种有效的转基因手段。Kurane等［3］针对腺癌设计了一种高度特异的转基因方法：他们用抗Lewis Y抗原(Lewis Ya ntigen,LYA)的单克隆抗体与含有嵌合的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)启动子的质粒和阳离子脂质体的复合物，转染能产生CEA且LYA阳性的腺癌细胞株，结果获得的转基因表达比不产生CEA且LYA阴性的腺癌细胞株高200倍。更有意义的是，Li等［4］发现即便不用脂质体转运外源基因而单独用脂质体处理细胞后，即可明显诱导内源性干扰素刺激基因(Interferon-stimulated genes,ISGs)产生干扰素。脂质体在宿主细胞内诱导干扰素合成的这种能力，对肿瘤性疾病的基因治疗是非常有用的。