摘要：背景:移植物抗宿主病是导致异基因外周血造血干细胞移植失败的主要原因,口服耐受是研究治疗移植物抗宿主病的新模式。目的:探讨骨髓移植前供鼠经口服受鼠脾淋巴细胞诱导耐受是否能增加异基因骨髓移植后受鼠对供者移植物的免疫耐受,从而减轻移植物抗宿主病,并与目前常用于预防移植物抗宿主病的免疫抑制药物比较作用效果。设计、时间及地点:随机分组设计,对比观察,于2008-12在东南大学医学院中心实验室完成。材料:供鼠为雄性纯种近交系小鼠C57BL/6J(H-2b),受鼠为雌性纯种近交系小鼠BALB/c(H-2d)。方法:用主要组织相容性抗原完全不合的纯种近交系小鼠建立异基因骨髓移植/移植物抗宿主病动物模型,小鼠共分5组,分别给予不同的急性移植物抗宿主病预防方案:①口服耐受组:移植前口服受鼠脾淋巴细胞相当于10μg蛋白,隔天1次,共3次。②雷帕霉素组:1.5mg/(kg?d)灌胃,从移植后第1天(+1d)开始用药。③环孢素A+甲氨蝶呤组:环孢素A1.5mg/(kg?d)腹腔注射,从移植后+1d开始用药,当小鼠的胃肠功能逐渐恢复后,改为环孢素A5mg/(kg?d)灌胃,甲氨蝶呤0.4mg/(kg?d)腹腔注射,移植后+1,+3,+6,+11d用药。④空白对照组:移植后未用药。⑤辐照不移植组:照射后未予骨髓移植。主要观察指标:各组小鼠骨髓移植后移植物抗宿主病的出现情况及免疫耐受指标差异。结果:移植后小鼠出现典型的移植物抗宿主病症状,空白对照组小鼠死亡高峰在移植后第14～18天,死亡率接近100%。口服耐受组、雷帕霉素组和环孢素A+甲氨蝶呤组小鼠急性移植物抗宿主病症状明显减轻,平均生存时间较空白对照组显著延长(P<0.05);小鼠急性移植物抗宿主病病理表现减轻,口服耐受组病理变化少于其他各组;流式细胞仪监测CD4+/CD8+比值增加,CD4+CD25+细胞增加,口服耐受组增加明显;ELISA检测移植物抗宿主病产生相应细胞因子减低,且口服耐受组明显减轻。MTT结果显示,口服耐受组免疫耐受显著增强,淋巴细胞增殖明显降低。结论:口服耐受可以显著抑制体外T淋巴细胞增殖效应,增强小鼠对骨髓移植的免疫耐受,减轻移植物抗宿主病症状和病理损害程度,延长平均生存时间;与目前常用于预防移植物抗宿主病的免疫抑制药物比较,减轻移植物抗宿主病的作用更强。

摘要：目的利用微阵列定量检测急性白血病患者E-cadherin基因启动子区CpG岛的甲基化改变，初步探讨基因芯片在肿瘤甲基化检测中的作用。方法用亚硫酸氢盐处理基因组DNA，并以此为模板进行PCR扩增。目的序列中未甲基化的CpG位点被翻转成TpG，而甲基化的CpG位点保持不变。设计5组探针构建一种检测急性白血病E—cadherin基因甲基化改变的微阵列。通过绘制标准曲线，定量检测样本的甲基化改变。结果利用微阵列定量检测了5例急性白血病患者的样本***基因的甲基化改变，5个检测区域不同程度发生了甲基化，且发生高甲基化的区域一致。检测结果经过基因测序验证。结论基因芯片能够作为一种定量检测基因甲基化改变的有效工具，可用于白血病甲基化的定量研究。其较基因测序省时省力，且能实现定量和高通量检测。

摘要：本研究旨在检测白血病细胞株及其耐药株中两种药物代谢相关基因的单核苷酸多态性。培养白血病细胞株K562及其耐药株K562/A02,采用QIAamp DNA Blood Minikit试剂盒提取基因组DNA,设计引物,应用PCR技术扩增相应目的片段;采用基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术检测mthfr基因rs1801131、rs1801133、rs2274976及dpyd基因rs1801159、rs1801160、rs17376848的单核苷酸多态性。结果表明,在K562和K562/A02两种细胞中,mthfr基因rs1801131基因型均为CA、rs1801133均为CC、rs2274976均为GG;dpyd基因rs1801159基因型均为GG、rs1801160均为GG、rs17376848均为AA。结论:mthfr、dpyd基因上述位点在K562和K562/A02两种细胞中基因表达无差别。

摘要：帕金森病(PD)是与衰老相关的常见的神经退行性疾病。近年来,有关PD的动物模型研究和对来自PD患者的脑标本的分析发现多巴胺能神经元中非受体酪氨酸激酶Abelson(c-Abl)的水平和活性增加。c-Abl具有蛋白质底物磷酸化活性,可使α-突触核蛋白和E3泛素连接酶Parkin磷酸化。临床上用于治疗白血病的c-Abl激酶抑制剂,在PD的细胞和动物模型均中显示出神经保护作用,这为临床上使用c-Abl抑制剂治疗PD患者提供了良好的应用前景。文章就c-Abl及其与PD发生发展的病理生理过程的关系进行综述,并对目前c-Abl抑制剂的药理学和安全性相关的问题进行了讨论。c-Abl抑制剂是否能够真正用于临床治疗PD使更多患者受益,仍需要更严格控制、设计良好的试验做进一步的研究。

摘要：目的 探索七年制临床医学专业学生电子病历书写能力培养方法并检验其效果.方法 选择东南大学附属中大医院2007级七年制临床医学专业108名学生为研究对象,将其分为对照组和实验组,每组50名学生.对实验组学生进行培训及考核,实习开始及实习结束时评价两组学生病历书写情况并进行分析.结果 实验组学生的病历书写水平明显高于对照组学生,而且大多数学生认可此培训考核体系.结论 中大医院设计的电子病历培训考核体系可以有效提高学生书病历书写水平和临床思维能力.

摘要：骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一种源于造血干/祖细胞水平损伤而产生的克隆增生性疾病,以无效造血和向白血病高倾向性发展为特征。目前在染色体、基因、细胞因子及生化等方面的实验研究为MDS发病机制的研究提供了新的手段。这些研究有利于早期评估患者的预后,最终有可能为此病设计出更为有效的预防策略和治疗方法。本文参考2007年的美国血液学会(ASH)年会论文摘要资料,就该病染色体、基因、细胞因子和生化等方面的实验研究进展作一综述。

摘要：目的:检测5种白血病细胞株中脱氧胞苷激酶(deoxycytidine kinase,DCK)和胞苷脱氨酶(cytidine deaminase,CDA)基因的单核苷酸多态性。方法:培养人红白血病细胞株K562,人慢性粒细胞白血病细胞株Ka,人急性髓系白血病细胞株HL-60、U937,人Burkkit淋巴瘤细胞株Raji。采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取基因组DNA,设计引物,PCR扩增相应目的片段,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOFMS)检测DCK基因A674G(rs111454937)、C1644T(rs72552079),CDA基因A79C(rs2072671)、G208A(rs60369023)的单核苷酸多态性。结果:5种细胞株DCK基因A674G(rs111454937)均为A/A纯合子型,C1644T(rs72552079)均为C/C纯合子型。HL-60、U937、Raji细胞株CDA基因A79C(rs2072671)为A/A纯合子,K562、Ka细胞株为C/A杂合子;5种细胞株CDA基因G208A(rs60369023)均为G/G纯合子型。结论:CDA基因的A79C(rs2072671)SNPs位点基因型在5株血液系统肿瘤细胞株中不尽相同,余所测3个SNPs位点基因型在各细胞株中均相同。

摘要：本研究构建并鉴定靶向mdr-1基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体。根据Genbank数据库提供的mRNA序列,选择设计3个能转录短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,体外分别合成3对互补并编码mRNA基因的特异性shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BamHI和HindⅢ双酶切线性化的pGCsilencer人U6启动子质粒载体中;为了确定利用酶切和测序鉴定所构建的重组载体是否正确,采用脂质体转染的方法将构建好的3个重组载体(pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3)导入慢性髓系白血病耐药细胞株K562/A02,采用实时PCR方法检测转染细胞的mdr-1基因表达,Western-blot检测P-gp表达量的变化。结果表明:应用PCR电泳图谱和测序证实了克隆RNAi打靶序列完全正确,而且该载体又同时表达GFP标记基因,用于测定转染效率。分别转染pGY1-1,pGY1-2,pGY1-3后K562/A02细胞的mdr-1基因表达和P-gp表达水平下降,证明shRNA可以特异性沉默mdr-1基因。结论:靶向mdr-1基因shRNA真核表达载体构建成功,为进一步研究mdr-1基因在K562/A02细胞中的作用奠定了实验基础。

摘要：本研究探讨异硫氰酸苯己酯对p16基因高甲基化的多发性骨髓瘤U266细胞株是否有去甲基化的作用。用异硫氰酸苯己酯0、5、10μmol/L孵育U266细胞株,提取DNA备用。用亚硫酸氢盐处理正常人基因组DNA,并以此为模板进行PCR扩增。设计1组特殊荧光标记探针以构建1种检测p16基因启动子区3个CpG位点甲基化改变的芯片,特殊荧光标记探针包括1对非甲基化探针和甲基化探针,检测相邻的3个CpG位点甲基化的程度。采用基因芯片的方法,将完全未甲基化的DNA和完全甲基化的DNA混合后制成标准曲线,将U266细胞株样本处理后点在芯片上与标准曲线进行比较后得出定量检测的结果。结果表明:芯片上探针的可重复性和精确性很好,0、5、10μmol/L异硫氰酸苯己酯处理后的U266细胞株p16基因的甲基化程度分别为78.2%、61.7%、54.8%。结论:异硫氰酸苯己酯可以降低U266细胞株p16基因甲基化的程度。