摘要：目的建立甲型肝炎病毒(hepatitis A virus,HAV)实时逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测方法。方法通过反应引物的筛选、检测温度的优化、灵敏度和特异性研究、模拟样品检测应用,进行甲型肝炎病毒实时RT-LAMP法检测体系建立。结果针对甲型肝炎病毒特异性基因,通过设计筛选出最佳实时RT-LAMP引物组,并使用该组引物特异、灵敏、快速地检测到甲型肝炎病毒。最佳检测温度为63℃,最小检测限为10拷贝/μL,且只对甲型肝炎病毒靶基因特异,检测应用结果可靠。结论实时RT-LAMP技术可以用于食品中甲型肝炎病毒的高效特异性检测,为食品中甲型肝炎病毒的检测工作提供更加有效的技术保障。

摘要：目的建立实时逆转录环介导等温扩增法(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)快速检测GI型诺如病毒的分析方法。方法通过反应引物的筛选、检测温度的优化、灵敏度和特异性研究、样品检测应用等,进行GI型诺如病毒实时RT-LAPM法检测关键技术的研究。结果针对GI型诺如病毒特异性基因,通过设计筛选出最佳实时RT-LAMP引物组,并使用该组引物特异、灵敏、快速地检测到GI型诺如病毒。最佳检测温度为65℃,最小检测限为22.6拷贝/µL,且只对GI型诺如病毒靶基因特异,检测应用结果可靠。结论本研究建立了GI型诺如病毒的实时RT-LAMP检测方法,可用于GI型诺如病毒的样品检测。

摘要：目的对筛选的甲型肝炎病毒特异性基因进行生物信息学分析,为核酸扩增引物的设计提供理论基础,保证分子生物学检测方法的特异性。方法选择甲型肝炎病毒中的VP1基因序列,应用多种生物信息学数据库和软件,对VP1基因编码蛋白的性质、结构、功能和进化关系进行分析。结果对甲型肝炎病毒VP1基因编码的氨基酸序列组成成分、理化性质、疏水性/亲水性、二级结构、跨膜结构域、磷酸化位点、亚细胞定位、信号肽以及蛋白功能的预测与分析,分析与其他肝炎病毒VP1蛋白的进化关系,从而推测甲型肝炎病毒VP1蛋白的功能及特异性。结论推断该基因具有高度保守性,可进行后续扩增引物的设计和筛选,用于分子生物学特异性检测方法的研究。