摘要：目的分析沈阳和甘肃发病猪场的2株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5基因和Nsp2基因变异情况。方法采用RT-PCR方法,对ORF5基因序列和Nsp2基因部分序列进行扩增、克隆并测序。并用DNAStar软件将测序结果与国内外发表的10株参考毒株进行比对分析。结果 2株分离株ORF5基因与国内外其它美洲型分离株核苷酸的同源性为88.6%～98.7%,推导的氨基酸的同源性为86.6%～98.0%;Nsp2基因的核苷酸同源性为73.4%～99.8%,推导的氨基酸的同源性为68.6%～99.5%,且该基因与国内其他变异株有完全一致的缺失特征。结论这两株分离株均属于PRRSV美洲型变异株,为该病的防治及疫苗的设计奠定理论基础。

摘要：目的建立一种能检测猪繁殖与呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)的TaqMan探针荧光定量PCR方法。方法根据PRRSV的ORF7基因保守区的核苷酸序列设计引物和TaqMan探针,通过探针浓度的优化,建立检测PRRSV的TaqMan探针荧光定量PCR方法。用该方法对30份临床疑似病料进行检测,并与常规RT-PCR方法和病毒分离方法进行比较。结果 TaqMan荧光PCR检测PRRSV的最佳探针浓度为0.4μmol,检测灵敏度可达3.51拷贝/μL。检测的30份样品与病毒分离结果的符合率为100%,与普通PCR的检测结果(25/30)比较,本方法对临床样品的检出率(28/30)更高。结论建立的方法特异性强、敏感性高、重复性好,可用于临床样品的检测。

摘要：为建立一种快速检测猪瘟(CSF)疫苗中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)污染的方法,试验根据GenBank上登录的BVDV 5’端非编码区基因组序列设计1对引物,经一步法RT-PCR反应条件的优化,建立了检测猪瘟疫苗中BVDV污染的一步法RT-PCR。结果表明:该方法对猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒的扩增结果均为阴性,对BVDV基因组RNA的检测灵敏度达0.1 ng,与细胞培养法的符合率达100%。应用该方法对猪瘟疫苗、牛血清等138份样品进行BVDV污染的检测,阳性污染率达11.59%。该一步法RT-PCR具有良好的特异性、敏感性、准确性和适用性,可用于猪瘟疫苗生产中血清、细胞、毒种、半成品等的质量控制及猪瘟疫苗临床应用中的质量检验。

摘要：为建立一种快速检测兽用生物制品中支原体污染的方法,试验根据GenBank上登录的支原体16S rRNA种属保守区序列设计1对引物,经PCR条件优化,建立了检测兽用生物制品中支原体污染的PCR方法。结果表明：该方法对大肠杆菌、沙门氏杆菌、巴氏杆菌、猪链球菌、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒、猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、新城疫病毒的扩增结果均为阴性;对鸡毒支原体、猪肺炎支原体、禽滑液支原体基因组DNA的检测灵敏度分别达到0.13,0.88,0.14 ng,与培养法的符合率达98.84%;应用该方法对鸡胚、血清、细胞等140份临床样品进行支原体污染的检测,阳性污染率达6.43%。表明PCR方法检测具有良好的特异性、敏感性、准确性和适用性,可用于兽用生物制品生产中鸡胚、血清、细胞、疫苗半成品等的质量控制和疫苗的质量检验。

摘要：猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病。现已遍及世界各主要养猪国家和地区,成为危害养猪业最严重的传染病之一。作者就猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机理方面的研究情况作一综述,为诊断技术、免疫机理研究、疫苗设计和疫病防制提供借鉴。

摘要：为提高口蹄疫(FMD)抗原和疫苗的稳定性,采用正交试验设计L18(37),以溶液pH值和氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钠、葡萄糖、精氨酸和氯化钙6种组分的质量浓度作为考察因素,以口蹄疫抗原或疫苗在37℃条件下146S抗原降解为0时保存的时间作为评价指标,以PBS(pH值8.0)作为对照,筛选对FMD146S抗原具有热稳定性作用的化学试剂。结果显示:在4℃条件下,用研制的缓冲液重悬的抗原和配制的疫苗可长期保存;在37℃条件下,与PBS比较,FMDV/OM抗原可保存63 d,FMDV/AF-72抗原可保存84 d,疫苗分别可以保存56和96 d,说明该缓冲液对FMDV抗原和疫苗具有很好的热稳定性。另外,该缓冲液配制方法简单,化学试剂易溶解,可用于大规模生产。研制的缓冲液能提高FMD抗原和疫苗在运输和保存过程中的稳定性,为保证FMD灭活疫苗质量提供了技术支撑。

摘要：做好三级生物实验室的环境指标控制是保证实验室安全的重要保障。三级生物安全实验室研究的大多是传染性病毒,一旦在实验室设计上存在任何问题,都会导致感染事件的发生,造成不可挽回的后果。因此,针对三级生物实验室环境指标的自动化控制进行了探究,并提出了几点实用型建议,以期三级生物实验室的安全发展。

摘要：印刷技术是我国古代四大发明之一,具有几千年的历史,在我国应用非常广泛。随着人民生活水平逐渐提高,大家对包装设计要求越来越高。包装印刷在生活中非常重要,它能够表明产品的各种信息,使人们深入了解产品功能和特点,方便人们做出选择。数字印刷技术作为包装印刷的重要组成部分,能够有效提高印刷效果和包装实用性。以数字印刷技术为研究对象,分析了数字印刷在包装印刷过程中的应用流程,希望能够为相关专业提供可以参考的理论依据。

摘要：企业竞争的本质在于人才的竞争,只有发挥人才的能力,才能够帮助企业在竞争中立于不败之地,而企业内部激励机制体系设计的情况则会影响到企业员工的具体工作行为。如果企业内部激励机制较为完善,那么企业员工在工作中也就没有后顾之忧,自然会全身心地投入到工作中,保证工作完成的质量。据此,文章对企业内部激励机制体系设计问题进行研究,希望能够为企业内部激励机制的完善提供一定的理论基础。

摘要：根据已经发表的猪流行性腹泻病毒N基因序列(GenBank:KX016034.1),设计1对特异性引物(上、下游分别插入Bam HⅠ和XhoⅠ酶切位点),通过RT-PCR技术扩增N基因,在测序鉴定正确后经Bam HⅠ和XhoⅠ双酶切,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,获得重组表达质粒pET32a-N。表达的蛋白质经纯化后进行Western blotting鉴定分析。以表达的PEDV-N蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选及亚克隆,获2株PEDV-N特异性单克隆抗体。对获得的单抗进行Western blotting鉴定和间接免疫荧光试验(IFA)分析,结果显示2株单抗均能与PEDV-N蛋白特异性结合和识别。以上结果表明PEDV-N蛋白在大肠杆菌中成功表达,且成功制备了2株具有生物学活性的特异单抗,为建立PEDV金标试纸诊断方法奠定了基础。