摘要：目的:构建针对IL-1α基因的shRNA表达载体,筛选能够抑制Hela229细胞内源性IL-1α表达的shRNA,建立无内源性IL-1α表达的Hela229稳定细胞系。方法:根据shRNA的设计原则,以IL-1αcDNA oligo为模板设计一段21 bp核苷酸目标序列,构建成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo中,获得靶向抑制IL-1α基因的重组shRNA质粒,转染Hela229细胞,经G418筛选后获得单克隆稳定细胞株,用ELISA方法在蛋白水平上检测IL-1α基因的沉默效果。结果:经酶切鉴定和测序分析确定IL-1α-shRNA重组质粒构建正确,ELISA筛选出能够显著抑制内源性IL-1α表达的shRNA,获得沉默内源性IL-1α表达的单克隆稳定的Hela229细胞株。结论:靶向IL-1α基因的重组shRNA表达质粒可显著抑制Hela229细胞内源性IL-1α的表达,成功构建靶向IL-1α基因沉默的Hela229稳定细胞系。

摘要：成人教育不是缩水的学历教育，不应简单地将课时压缩和单纯削减内容。应该根据成教学生的特点制定相应的教学措施。我们实施了三项改革措施：一是理论讲授重新设计，突出了重点、难点和学科更新的知识；二是充分发挥了学生的自学能力，制定自学提纲、编写详细的讲义，为学生达到本科水平提供了有力的保障；三是考核方法多样化，改革考试构成，降低期末考试成绩所占比例，有利于调动学生的主观能动性，提高素质培养。

摘要：目的:为了检测信号转导和转录活化蛋白2(signal transducer and activator of transcription factor 2,STAT2)基因的rs12422499和rs2066807两个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP),建立一种简单、可靠的多聚酶链式反应-引物介导的限制性分析法(polymerase chain reaction-primer introduced restriction analysis,PCR-PIRA)。方法:微量盐析法提取外周静脉全血DNA,设计引物扩增STAT2基因的rs2066807及rs12422499位点所在的基因片段,采用限制性内切酶PsyI及BseDI分别酶切相应PCR产物,凝胶电泳方法观察酶切结果。同时将PCR产物进行DNA测序。结果:PCR扩增rs2066807基因片段,长度为469bp,经PsyI酶切后电泳,根据酶切产物片段大小判断rs2066807的C/C(469 bp)、G/G(262 bp、207 bp)、C/G(469 bp、262 bp及207bp)三种基因型;PCR扩增rs12422499基因片段,长度为189 bp,经BseDI酶切后电泳,根据酶切产物片段大小判断rs12422499的C/C(189 bp)、G/G(134 bp、55 bp)、C/G(189 bp、134 bp及55 bp)三种基因型。将PCR产物直接进行DNA测序,SNP测序结果与PCR-PIRA方法获得的结果一致。结论:成功建立了一种检测STAT2基因SNPs的PCR-PIRA法,该方法只需简单的PCR扩增和酶切消化,因此操作简单、方便;通过与直接测序结果比较,显示该方法可信。PCR-RIPA方法不仅为检测STAT2基因多态性提供了实验手段,也为检测其他基因点突变提供了实验方法。