摘要：背景:为了提高人类同种胰岛移植的临床疗效,于临床前研究设计良好大型动物模型如猪或灵长类动物是至关重要的。目的:评价不同剂量链脲酶素诱导非人类灵长类1型糖尿病模型的效能。设计、时间及地点:对比观察动物实验,于2007-10/2008-12在中南大学湘雅三医院细胞移植与基因治疗中心完成。材料:成年健康雄性恒河猴21只分为:125mg/kg链脲酶素组(n=5)、75mg/kg链脲酶素组(n=5)、50mg/kg链脲酶素组(n=11)。方法:根据动物体质量,称取一定量链脲酶素,用预先配制好的缓冲液,配制为25g/L,过滤消毒。将新鲜配置的链脲酶素按125,75,50mg/kg剂量分别注入3组实验猴静脉内,药物注射时间为1～5min。主要观察指标:观察用药后1～16周动物的肝、肾功能,葡萄糖代谢和组织形态学变化。结果:在125mg/kg剂量下,由于胰腺β细胞严重受损,2只恒河猴在给予链脲菌素后8h因严重低血糖死亡;该组恒河猴给药1周出现肝脏转氨酶及血肌酐、尿素氮的显著升高,2～4周达峰值,1只恒河猴于链脲酶素给药后由于内源性胰岛素严重不足,外源性胰岛素不能纠正其高血糖状态,最终发生严重的糖代谢紊乱、酮症酸中毒、肝肾功能衰竭于第13天死亡,存活2只恒河猴在观察期间内肝脏转氨酶及血尿素氮、血肌酐均维持在较高水平;在75mg/kg剂量下,恒河猴在链脲酶素给药一两周出现肝脏转氨酶及血肌酐、尿素氮的显著升高,4周后肝肾功能仍表现为不同程度的异常,其中1只恒河猴于注入链脲酶素后出现肾功能损害及机体抵抗力低下,出现眼睑肿胀、全身浮肿及臀部感染不愈,于链脲酶素给药后5周而死亡,1只动物于注入链脲酶素后出现持续高血糖状态不能纠正、食欲不振,体质量显著下降,因全身衰竭而于注药后第9周死亡;在给予50mg/kg的剂量,肝肾功能的影响较小,表现为一过性轻度升高,4周后基本可恢复正常范围,该组仅3只动物注药后1～4周出现眼睑水肿,随后水肿消退。结论:低剂量50mg/kg链脲酶素可能是构建多数恒河猴糖尿病模型的最佳剂量。

摘要：背景:胰岛移植中,胰岛移植物的早期大量丢失是由于立即经血液介导的炎症反应损伤所致。要深入研究立即经血液介导的炎症反应的机制和抑制方法,稳定和标准化的立即经血液介导的炎症反应体外模型是不可或缺的研究平台。目的:观察成体猪胰岛移植物在异种移植体外模型中激活立即经血液介导炎症反应的表现,探索一种异种细胞移植立即经血液介导的炎症反应体外模型的稳定建模方法。设计、时间及地点:体外对比观察实验,于2008-01/11在中南大学湘雅三医院细胞移植与基因治疗中心实验室完成。材料:新鲜全血来源于体检血型为O型的健康志愿者,分为空白组、对照组、实验组。湖南沙子岭猪由中南大学湘雅医学院动物部提供。方法:以酶消化法结合密度梯度离心法分离纯化胰岛细胞。将5000胰岛当量和10000胰岛当量成年猪胰岛分别与实验组人新鲜全血混合加入肝素化的管道,使Loops管内新鲜血液中肝素的最终质量浓度分别为0.001,0.01,0.02g/L。Loops管固定于钟摆式摇床中摇摆5,10,60min模拟血液在体内血管的流动。空白组健康人新鲜全血抽出后立即作检测,对照组健康人新鲜全血7mL混合100μL培养液摇摆60min。主要观察指标:检测血常规、血液中人补体片段、人末端补体复合物、凝血酶抗凝血酶复合物、血小板球蛋白的变化,称凝血块的质量,并对其行苏木精-伊红染色病理检测。结果:TubingLoops内肝素质量浓度为0.001g/L时对新鲜全血的正常生理功能影响最小,可以长时间模拟体内血液生理功能不变。血液样本加入成体猪胰岛以后,10000胰岛当量实验组于10min开始出现了血凝块,随时间的延长,凝血块逐渐增大,TubingLoops管中血液的血小板数量随时间延长而减少,血小板球蛋白、凝血酶抗凝血酶复合物、血浆中人补体片段、人末端补体复合物明显增加,淋巴细胞、单核细胞被大量消耗,较5000胰岛当量实验组变化明显。血凝块病理学检测显示,胰岛细胞周围被血栓包围,其周边及血栓内均可见中性白细胞浸润,胰岛移植物表面包膜被破坏,出现裂解征象。结论:采用10000胰岛当量成年猪胰岛加至健康人新鲜全血的内表面0.001g/L肝素化管道,固定于钟摆式摇床中可以建立稳定、标准化的立即经血液介导的炎症反应体外模型。

摘要：背景:肝脏缺血再灌注损伤后肝细胞受到增殖和凋亡的双重调控。肝大部切除后,余肝经历缺血再灌注损伤,其肝再生受到明显抑制,缺血预处理可减轻此损伤,促进肝再生,其机制是否也与这有关,目前未见相关报道。目的:探讨缺血预处理对大鼠自体肝移植后余肝肝细胞凋亡和增殖的影响。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-09/2007-07在中南大学湘雅医学院实验动物中心完成。材料:雄性SD大鼠144只,随机分为3组:单纯肝叶切除组、自体肝移植组、缺血预处理组,48只/组。方法:单纯肝叶切除组大鼠只行肝左、中叶切除,不阻断肝右、尾叶血流。自体肝移植组大鼠结扎切断肝后与食管腹段之间的静脉交通支,游离liberate尾状叶,游离第一肝门、肝上及肝下下腔静脉后,阻断并经门静脉持续低温灌注保存液,同时进行无血肝切除(切除肝左、中叶),肝脏在体持续低温灌洗15min。解除肝门阻断,完全恢复肝脏血流。快速复温肝脏表面,并冲洗腹腔,缝合关腹。缺血预处理组大鼠在门静脉灌注前先阻断肝右、尾叶血流10min,然后开放血流10min,余步骤同自体肝移植组。各组大鼠分别于肝叶切除后0,1,3,6,12,24,48,72h时取材。主要观察指标:生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶及天冬氨酸氨基转移酶的水平,流式细胞仪检测肝细胞凋亡指数,通过Ki-67抗原的表达检测肝细胞增殖情况。结果:与自体肝移植组比较,除肝叶切除后0h外,其余各时间点单纯肝叶切除组、缺血预处理组血清丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶水平均明显降低(P<0.05)。各组在肝叶切除后0h(即正常肝组织)基本不存在凋亡细胞;单纯肝叶切除组肝大部切除后余肝肝细胞凋亡指数稍有升高;自体肝移植组复灌注后肝细胞凋亡指数急剧升高,约在12h达到高峰,而后逐渐下降;与自体肝移植组比较,缺血预处理组肝细胞凋亡指数明显降低(P<0.05)。各组Ki-67表达率在肝叶切除后均明显升高,约在24h达高峰,而后逐渐下降。与单纯肝叶切除组比较,自体肝移植组Ki-67表达率明显降低(P<0.05);与自体肝移植组比较,缺血预处理组Ki-67表达率明显增高(P<0.05)。结论:缺血预处理可减轻自体肝移植后肝缺血再灌注损伤所致肝细胞凋亡,促进肝细胞增殖,这可能是其促进肝再生的机制之一。

摘要：目的为了便于活体肾移植供者的管理,设计并应用了活体肾移植供者信息管理系统。方法系统采用三层架构作为系统框架、B/S结构作为系统网络结构,选取Java作为开发语言,Java EE作为开发平台,采用SQL Server 2014进行数据库管理,本系统包括患者信息管理、术前评估管理、围术期信息管理、随访管理、健康教育管理、统计查询以及系统管理七个模块。结果系统运行稳定、可靠,输入数据简单、快捷,查询、统计方便。结论通过系统对供者信息进行有效管理和规划,保障了供者近期和远期安全,提高了临床工作效率。

摘要：背景:进口人工肾价钱昂贵,且存在设计方面的不足,如在滤除水分的同时也丢失了各种中小分子如电解质及葡萄糖等。目的:探讨国产人工肾-聚砜膜透析器应用于心脏体外循环手术的可能性。方法:选择的17例患者中瓣膜置换术9例,冠脉搭桥5例,法乐氏四联症2例,右窒双出口1例。于常规的体外循环受过程中,在体外循环动脉端安装微栓过滤器,其顶端三通出口分别连接泵压表、聚砜膜透析器入血口和经硅胶管接贮血瓶与氧合器相连,通过调节动脉泵的流量确保动脉压和中心静脉压。以常规体外循环中使用过滤器联合利尿合剂治疗18例为对照。体外循环前后按常规计算预冲液量,并与麻醉师共同维持患者体外循环前后平均动脉压、中心静脉压的稳定。观察体外循环前后患者电解质、葡萄糖及渗透压的变化。结果与结论:聚砜膜透析器在体外循环手术中滤水作用十分明显,效果明显优于对照组,肾透析液中的电解质、尿素氮、葡萄糖和渗透压与使用人工肾前血液中的值无显著差别。提示国产聚砜膜透析器能够代替超滤器应用于体外循环手术中,且效果更理想,为术后心功能恢复和防止其他并发症的发生有良好作用,为一些重症心功能不全、转流时间长、婴幼儿、液体进入体内多而排出尿少等患者提供了另一条出路。

摘要：目的 观察微小RNA（miRNA,miR）-202是否通过转录后下调癌基因低密度脂蛋白受体相关蛋白6（LRP6）的表达而抑制人肝癌细胞（HCC）的增殖.方法 培养HCC细胞株QGY-7703、HepG2;采用实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测细胞周期蛋白（Cyclin） D1、MYC和LEF1 mRNA的表达;Western blot检测LRP6、Cyclin D1、MYC、β-连环蛋白（β-catenin）和磷酸化Rb蛋白的表达;通过转染小干扰RNA （siRNA）抑制肝细胞癌（HCC）细胞LRP6的表达;构建pGL3-LRP6-3＇端非编码区域（3＇-UTR）-荧光素酶质粒转染HCC细胞作荧光素酶检测;采用噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验及贴壁不依赖性生长能力测定法检测HCC细胞的增殖能力.结果 在QGY-7703、HepG2两种细胞株均显示,过表达miR-202可以下调LRP6的表达,而抑制miR-202可以上调LRP6的表达（P＜0.05）;miR-202的过表达可以降低pGL3-LRP6-3＇-UTR-荧光素酶报告基因中荧光素酶的活性,而抑制miR-202则可以增加其荧光素酶的活性（P＜0.05）;miR-202可以显著下调受Wnt/β-catenin调控的下游基因Cyclin D1、MYC和LEF1的表达,抑制miR-202则可以显著上调这些基因的表达（P＜0.05）;在miR-202过表达的HCC细胞,Cyclin D1、MYC、LEF1和磷酸化Rb蛋白的表达也显著下调,而抑制miR-202的表达,则可以上调这些蛋白的表达（P＜0.05）;miR-202的表达与LRP6蛋白的表达水平呈显著负相关（r =0.575,P＜0.05）;通过MTT法和克隆形成实验结果表明,沉默miR-202抑制组或阴性对照转染组细胞的LRP6,可以降低HCC细胞的生长速度和增殖（P＜0.05）;贴壁不依赖性生长能力测定也显示,LRP6抑制对miR-202抑制组HCC细胞的增殖具有显著抑制作用（P＜0.05）.结论 在HCC细胞,LRP6mRNA是miR-202的直接作用靶点;在miR-202发挥抑制HCC细胞增殖的作用中,LRP6抑制是必不可少的;LRP6可以作为HCC的潜在治疗靶点.

摘要：目的建立稳定的兔脑死亡模型，检测脑死亡后不同时间点肝脏形态及功能变化，评估脑死亡者供肝进行移植手术的可行性。方法健康新西兰兔40只，随机分为假手术组（n=20）和脑死亡组（n=20）。各组再根据脑死亡后时间分为2、4、6及8h四个亚组。分别于实验结束后，留取血液及肝脏组织，用全自动生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）水平，HE染色法观察肝脏的形态学改变，原位末端标记法检测肝脏细胞的凋亡情况；并用竞争抑制ELISA法检测血清中白介素（IL）-1β、IL-6、IL8、肿瘤坏死因子（TNF）-α的水平。结果脑死亡后2、4、6及8h血清中ALT与AST均有所升高，且以脑死亡后8h最高，与6h相比，差异有统计学意义（P=0．0021，P=0．0086）。光镜下，脑死亡后2、4h肝脏无明显改变；而在脑死亡后8h，肝细胞变性明显，肝索结构消失，部分肝细胞灶状坏死。该形态学变化与凋亡指数的变化趋势一致。血清IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平均随着脑死亡时间延长而增加。结论脑死亡可以导致肝脏功能及形态学改变，且随脑死亡时间的延长其改变更加明显。该现象可能与炎症介质的释放有关。脑死亡状态维持8h以上，肝脏的形态及功能将发生明显改变。

摘要：目的探讨半离体或离体肝切除联合自体肝移植的适应证及相关问题。方法回顾性分析2005年10月至2011年12月武汉大学中南医院和中南大学湘雅三医院收治的36例行半离体或离体肝切除联合自体肝移植病人的临床资料,按疾病及解剖适应证进行分类整理。结果术中2例病人在开放IVC血流后并发心跳骤停,经处理后恢复心跳,其余34例病人手术过程顺利。截至2013年5月,术后34例病人获得随访,随访时间为4.0（2~8）年。13例良性疾病病人术后复发1例（肝包虫病）,行射频消融（RFA）治疗,仍带病存活。23例恶性病变病人中失访2例,术后复发10例,存活13例,最长存活时间为7.5年。结论当肿块位于以下5种解剖结构时可考虑行半离体或离体肝切除联合自体肝移植：（1）肝右静脉、肝中静脉与肝后下腔静脉构成的三角区;（2）肝左静脉、肝中静脉与肝后下腔静脉构成的三角区;（3）肝尾状叶及肝段Ⅳ;（4）门静脉左支、肝中静脉主干与肝后下腔静脉构成的三角区;（5）门静脉右支、肝中静脉主干与肝后下腔静脉构成的三角区。

摘要：背景:移植后急性排斥反应是制约国内肝移植发展的主要障碍之一。目的:探索同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型的建立方法。设计、时间及地点:病理学水平的实验方法改进,于2007-06/2008-11在中南大学实验动物学部完成。材料:供体选用SD大鼠,雌雄不拘;受体选用雄性Lewis大鼠,供受体各120只。方法:采用改良Kamada’s二袖套法,并在此基础上加以改良:肝上下腔静脉重建采用改良连续缝合;支架法重建肝动脉,肝脏灌注采用全自动静脉输液泵控制,建立同种异基因大鼠肝移植急性排斥反应模型。共实施大鼠肝移植120例,其中定型手术80例。主要观察指标:移植手术时间,移植成功率,大鼠精神状态,对刺激的反应,活动及进食情况,急性排斥反应Banff评分。结果:80例定型手术中,供肝热缺血时间为0～2min,冷缺血时间为80min,无肝期平均为16～21min,手术成功率为85%(68/80)。急性排斥反应出现于移植后第3天,表现为食欲不佳、精神萎靡;移植后第5天出现局部黄染;移植后第7天黄疽进行性加重,并出现明显腹水和死亡。移植后第3,5,7天的急性排斥反应Banff评分分别为3.98,4.96及6.03。结论:同种异基因大鼠采用改良Kamada’s二袖套法、重建肝动脉、改进肝上下腔静脉缝合及肝脏灌注方法可建立稳定的大鼠肝移植急性排斥反应模型。

摘要：背景:心脏移植术后支气管软化导致狭窄引起的呼吸功能障碍是一种临床急重症,严重危及移植心脏的功能,高风险多并症心脏移植并支气管支架置入术有待临床观察。目的:报告极高风险原位心脏移植术后因左主支气管软化狭窄塌陷急诊支架置入1例。设计:病例分析。单位:中南大学湘雅三医院-卫生部移植医学工程技术研究中心,厦门大学附属中山医院心脏外科。对象:选择于2005-04在厦门大学附属中山医院心脏外科施行同种异体原位心脏移植术的渐进性扩张型心肌病合并中-重度肺动脉高压患者,女,18岁,渐进性扩张型心肌病病史15年,中-重度肺动脉高压:肺动脉平均压50～51mmHg,同时伴有左主支气管软化塌陷狭窄、混合性(中枢性为主)呼吸睡眠暂停综合征、左下肺不张、右侧肺气肿、类风湿性关节炎等合并症半年。方法:患者心脏移植术后,支气管炎症充血水肿加重了气管软化塌陷狭窄程度,管腔狭窄至4/5,导致阻塞性通气障碍,并发室上性心动过速、室性早搏,移植心脏舒张功能减退(E峰A峰、EF70%、FS41%),心率波动于100～110次/min。②术后肺部胸片和CT观察左主支气管狭窄解除。患者通气功能改善,逐步降低呼吸机参数,撤除呼吸机予低流量吸氧治疗,未再出现阻塞性通气障碍表现,患者睡眠呼吸暂停综合症得以纠正。结论:原位心脏移植术后支气管软化塌陷狭窄的急诊支架置入治疗可改善支气管软化狭窄所致通气功能障碍,提高心脏移植成活率。