摘要：目的　观察晚发型脊柱骨骺发育不良伴进行性骨关节病 (SEDT PA)患者的X线及磁共振成像特点、关节软骨病理特点 ,筛查CCN6基因突变位点 ,探讨SEDT PA的发病机制。方法　应用放射学、磁共振成像方法分析汉族家系中两例SEDT PA患者骨骼及软骨等结构特点 ;应用HE和甲苯胺蓝染色法对关节软骨进行组织病理学特点观察 ;用电子显微镜观察关节软骨组织和细胞的超微结构 ;设计引物对CCN6基因外显子进行扩增和测序分析 ;应用突变CCN6蛋白质三维结构预测等方法研究SEDT PA的发病机制。结果　病理检查发现汉族家系中一例SEDT PA关节软骨细胞增生活跃伴成熟障碍 ,而基质胶原纤维大小和密度明显下降。突变筛查提示两患者在CCN6基因 8号外显子存在两种突变类型 ,其中的替换突变 (10 0 0T→C ,Ser334Pro)来自父方 ;而缺失突变(84 0delT)来自母方 ,导致其编码的氨基酸序列移码突变 ,在下游 31个氨基酸残基后提前出现终止密码子 ,导致蛋白质被截短 4 3个氨基酸残基。蛋白质三维结构预测结果显示 84 0delT截短突变蛋白质与野生型蛋白质相比 ,从信号肽至第一个结构域 (IGFBP)起始的 2 4个氨基酸残基区域由一个单一环变成两个小的交叉环 ,而且伴C末端明显缩短 ,而Ser334Pro蛋白质仅有C末端的延伸方向与野生型蛋白质相反 ,其余?

摘要：目的 :观察复方尼尔雌醇片 (CNT)对大鼠骨质疏松的作用 ,并与其组分进行比较。方法 :1 4 4只 7月龄雌性SD大鼠随机分为 1 2组 ,每组 1 2只 ;另外 1 2 0只 4月龄雌性SD大鼠随机分为 1 2组 ,每组 1 0只。采用随机区组设计分别比较CNT(每日 0 .0 39,0 .1 1 7,0 .39mg/kg体重 )及其组分 (尼尔雌醇 0 .30 ,0 .0 9,0 .0 3mg/kg体重或左炔诺孕酮 0 .0 9,0 .0 2 7,0 .0 0 9mg/kg体重 ) 3种剂量水平对维甲酸和去卵巢所致骨质疏松SD大鼠的作用。测定大鼠血钙、磷、甘油三酯 (TG)、总胆固醇 (TC)、碱性磷酸酶 (ALP)、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL C)、全身骨密度 (BMD)、离体左股骨BMD及股骨灰化后的钙、磷含量。结果 :①用每日 70mg/kg体重的维甲酸灌胃或去卵巢均可成功制备大鼠骨质疏松模型。②CNT及其组分有抗两种大鼠模型的骨丢失作用 ;③CNT的作用强于同剂量的尼尔雌醇和左炔诺孕酮 ,且呈剂量依赖性。④在多数观察指标中 ,CNT大、中剂量水平的作用类似 ,故以中等剂量水平 (0 .1 1 7mg/kg)为优选。结论 :CNT可阻止维甲酸和去卵巢所致SD大鼠的骨丢失 。

摘要：背景：成骨细胞分泌的核核因子κB受体活化素配体的主要作用为保持破骨细胞的分化和活性，抑制破骨细胞的凋亡。目的：观察脂联素对成骨细胞核因子κB受体活化素配体表达的影响，拟进一步探讨其对破骨细胞生成的作用。设计、时间及地点：单一样本观察，于2005-08/2006-03在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所完成。材料：外科手术中弃之5份取正常成人（35～55岁）髂前上棘松质骨由供者自愿提供；人重组脂联素蛋白购自Calbiochem公司。方法：正常成人髂前上棘松质骨体外培养成骨细胞。分别用0，3，10和30mg／L脂联素干预人成骨细胞48h。成骨细胞和CD14＋外周血单核细胞共培养14d，用30mg／L脂联素干预14d，以25μg／L巨噬细胞集落刺激因子＋50μg/L核因子κB受体活化素配体干预14d作为诱导破骨细胞阳性对照。主要观察指标：分别采用荧光定量聚合酶链反应和酶联接免疫吸附剂测定的方法检测核因子κB受体活化素配体的表达；并用脂联素蛋白干预成骨细胞与外周血单核细胞共同培养系统，观察对破骨细胞生成的作用。结果：①脂联素呈剂量和时间依赖性促进人成骨细胞核因子κB受体活化素配体的表达。②脂联素呈时间和剂量依赖性促进人成骨细胞可溶性破骨细胞异化因子蛋白的分泌。③脂联素干预成骨细胞与CD14＋外周血单核细胞共同培养系统可诱导破骨细胞生成。结论：脂联素可通过诱导成骨细胞核因子κB受体活化素配体表达，诱导破骨细胞生成。

摘要：背景:前期研究表明膜型基质金属蛋白酶1在骨重建过程中可调节骨形成与骨吸收。目的:探讨女性血清可溶性膜型基质金属蛋白酶1水平年龄变化及膜型基质金属蛋白酶1与骨密度﹑骨转换生化指标的关系。设计、时间及地点:横断面调查,于2006-01/2007-10在中南大学湘雅二医院完成。对象:长沙地区304名20～80岁的女性志愿者,平均年龄(49.6±14.1)岁,体质量指数(23.3±3.4)kg/m2。方法:培养正常成人成骨细胞。留取受试者空腹静脉血,Westernblot、ELISA检测血清膜型基质金属蛋白酶1可溶性蛋白水平,ELISA检测血清Ⅰ型胶原N-末端交联肽﹑骨钙素水平。测量受试者腰椎及左侧股骨颈骨密度。用重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白干预人成骨细胞。主要观察指标:①人成骨细胞基质金属蛋白酶1蛋白表达。②人血清可溶性膜型基质金属蛋白酶1浓度与年龄、骨密度、骨钙素、Ⅰ型胶原N-末端交联肽的关系。③人成骨细胞鉴定。④细胞凋亡检测结果。⑤重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白诱导人成骨细胞凋亡的作用。⑥型胶原N-末端交联肽检测结果。⑧重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白对人成骨细胞黏附功能的影响。结果:Westernblot检测到血清含有丰富的可溶性膜型基质金属蛋白酶1,血清可溶性膜型基质金属蛋白酶1与骨密度﹑Ⅰ型胶原N-末端交联肽﹑骨钙素呈负相关。重组可溶性膜型基质金属蛋白酶1蛋白促进细胞凋亡的作用呈剂量依赖性,且此作用可被乙二胺四乙酸阻断。重组可溶性活性膜型基质金属蛋白酶1蛋白抑制人成骨细胞在Ⅰ型胶原上的黏附。结论:女性血清可溶性活性膜型基质金属蛋白酶1与骨密度﹑Ⅰ型胶原N-末端交联肽﹑骨钙素有明显相关性。重组可溶性活性膜型基质金属蛋白酶1蛋白可通过降解骨基质蛋白,诱导人成骨细胞凋亡。

摘要：为探讨力学刺激对成骨细胞增殖分化的影响,应用根据四点弯曲原理设计的加力装置对MG-63成骨样细胞进行力学刺激,观察不同大小和作用时间的机械应变对成骨细胞增殖分化的影响。本研究中蛋白表达、碱性磷酸酶(ALP)活性测定分别采用Western blot、α-磷酸奈酚法,采用茜素红染色观察矿化结节的形成。结果发现:⑴与对照组相比,加力组增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达、ALP活性均明显增加,但这种作用并不随着力刺激大小的增加而增加。⑵在适宜的力刺激(2 000μstrain)下,随着加力时间的增加,PCNA、Ⅰ型胶原(COLⅠ)蛋白表达及ALP活性逐渐增加,并且适宜的力刺激也促进了矿化结节的形成。该结果提示适宜的力学刺激能够促进成骨细胞的增殖分化。

摘要：目的探讨四种干预方案对新诊断2型糖尿病(T2DM)亚临床动脉粥样硬化(AS)的影响。方法采用前瞻性、病例对照研究设计,将170例(156例完成随访)无AS的新诊断T2DM患者随机分为四组:A组(强化降糖+降压治疗)、B组(强化降糖+降压+调脂治疗)、C组(在B组基础上加服维生素E0·2g/d)及D组(在B组基础上加服复方丹参滴丸30丸/d)。多因素干预2年,随访观察四组亚临床AS的发生情况及其代谢的控制情况。结果B组、C组、D组亚临床AS发生率均显著低于A组;TC和LDL-C水平较基线下降,均显著低于A组,达标率亦显著高于A组;但B、C、D组间差异无统计学意义;分析显示亚临床AS的发生与干预方案有关。结论在强化降糖、降压基础上加用调脂治疗更有利于减少新诊断T2DM患者亚临床AS的发生,口服维生素E或复方丹参滴丸对其亚临床AS的发生无保护作用。

摘要：背景:建立基质细胞与骨髓细胞共培养模型能诱导破骨样细胞产生,但这种培养体系存在细胞不单纯,不适合基因转染等缺点。目的:建立基质细胞MBA-1细胞与破骨前体细胞RAW264.7共培养形成不混杂基质细胞的成熟多核破骨细胞的新方法。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2007-03在南华大学附属第一医院临床研究所实验室完成。材料:小鼠源性破骨前体细胞RAW264.7细胞从ATCC引进,基质细胞MBA-1细胞由周厚德博士惠赠。方法:RAW264.7细胞以1×104/孔接种于Transwell三维培养板下层,将聚碳酸酯膜孔径0.4μm的培养板上层先取出接种MBA-1细胞,待细胞贴壁胞体伸展后,将其重新与下层联合共培养,共培养体系细胞每3d换液1次。主要观察指标:①抗酒石酸酸性磷酸酶染色法观察染色阳性的破骨细胞形态特点。②扫描电镜观察骨吸收陷窝形态,评价共培养形成的破骨样细胞骨吸收活性。结果:共培养体系中的RAW264.7细胞,第9天可见较多TRAP阳性单核细胞,出现TRAP阳性多核破骨样细胞。共培养14d后,已分化成熟的破骨细胞,能形成骨吸收陷窝。结论:MBA-1细胞与破骨前体细胞RAW264.7分层共培养可形成成熟的、有骨吸收功能的多核破骨细胞,且这种破骨细胞中不混杂基质细胞。

摘要：背景: 护骨素是一种由成骨细胞表达的蛋白, 可抑制破骨细胞分化和活化。目的: 观察比较 17 β- 雌二醇与孕激素对人成骨细胞护骨素基因表达的调控作用。设计: 对比观察。单位: 中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所。材料: Ⅳ型胶原酶( Sigma 公司), 胎牛血清(Gibico 公司), MEM(Sigma公司), 骨钙素放射免疫法测定试剂盒(Dia2Sorin 公司)。方法: 实验于 2003- 01/2006- 03 在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所完成。采用正常人髂前上棘松质骨进行成骨细胞的提取和培养, 人成骨细胞用 17β- 雌二醇与孕酮干预, 采用 Northern 杂交检测护骨素mRNA 表达及酶联免疫吸附法检测护骨素蛋白质表达。主要观察指标: ①人成骨细胞鉴定。②Northern 杂交分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素 mRNA 表达的影响。③酶联免疫吸附分析17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响。结果: ①人成骨细胞鉴定: 人成骨细胞分泌的碱性磷酸酶活性为(74.3±4.7) U/g; 培养上清液中骨钙素浓度为(3.84±0.39) μg/L。表明分离培养的人成骨细胞具有成骨细胞的特性。②Northern 杂交分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素 mRNA 表达的影响: 人成骨细胞对照组护骨素 mRNA 表达条带弱, 与对照组相比, 1×10-10, 1×10-9, 1×10-8 mol/L17β- 雌二醇干预组护骨素 mRNA 表达条带逐渐增强; 与 0 h 相比, 干预12, 24 及 48 h 护骨素 mRNA 表达逐渐增强; 孕酮对人成骨细胞护骨素mRNA表达无影响。③酶联免疫吸附分析 17β- 雌二醇、孕酮对人成骨细胞护骨素蛋白质分泌的影响: 与对照组比较, 1×10 -10, 1×10-9, 1×10-8 mol/L雌二醇组护骨素蛋白质分泌增加[(0.64 ±0.14), (1.27±0.26), (2.34±0.35),(3.62 ±0.23) μg/ L, P 0.05)。结论:17β- 雌二醇促进人成骨细胞护骨素基因表达, 孕酮对其无影响,表明雌激素与孕激素对骨代谢有不同的调节机制。

摘要：背景：研究表明，脂联素参与骨代谢调节，但具体作用途径尚不明确。目的：实验拟验证脂联素在成骨细胞分化中的作用。设计、时间及地点：对比观察实验，于2006—01／2007—06在中南大学湘雅二医院代谢内分泌研究所实验室完成。材料：正常成人（35—55岁）髂前上棘松质骨用于细胞培养，由湘雅医院和湘雅二医院提供。方法：外科手术取正常成人髂前上棘松质骨进行细胞培养。用3，10，30mg／L脂联索干预48h，或用30mg／L脂联素干预12～18h。主要观察指标：反转录-聚合酶链反应及免疫印迹检测体外培养成骨细胞脂联素受体的表达。放射免疫测定法测定碱性磷酸酶及骨钙索的表达。茜素红染色后显微镜下观察培养16，22d矿化结节形成。结果：①成骨细胞在mRNA及蛋白水平均检测到脂联紊受体1表达。②脂联素能够促进碱性磷酸酶活性增高及骨钙素的分泌，并呈时间剂量依赖性。脂联素诱导骨钙索分泌呈剂量与时间依赖性。③脂联索干预可促进人成骨细胞矿化结节生成，与16d相比，22d矿化结节增多，颜色加深。结论：脂联素可诱导人成骨细胞分化，该作用具有时间和剂量依赖性。

摘要：背景:软骨细胞在体外单层培养的去分化改变及其来源困难是目前软骨细胞研究领域中的两大难题,目前关于SW1353人软骨瘤细胞表型和生物学特点及三维培养的相关报道较少。目的:观察SW1353人软骨瘤细胞在海藻酸钠三维培养体系中表型标志物Ⅱ型胶原的生物动力学及超微定位特点。设计、时间及地点:材料-细胞学体外观察,于2004-08/2006-01在中南大学湘雅医学院完成。材料:SW1353人软骨瘤细胞株由ATCC公司提供。方法:细胞复苏后接种,加入含胎牛血清、维生素C的DMEM培养基进行单层贴壁培养。离心后将细胞团块悬浮于低黏性海藻酸钠溶液中,细胞终浓度为2×109L-1,滴入凝胶溶液,聚化获得细胞凝珠,每个凝珠约含20000个细胞。藻酸盐凝胶三维体系培养8周后,柠檬酸钠分解凝胶,收获培养的软骨细胞及上清,并与单层培养的细胞进行比较。主要观察指标:细胞形态及表型变化,细胞生长曲线,细胞上清和海藻酸钠基质中Ⅱ型胶原的表达,细胞超微结构及Ⅱ型胶原的定位,同位素脉冲追踪活细胞Ⅱ型胶原的合成分泌。结果:①单层培养时,细胞由1周时的多角形变为8周后的条梭状或不规则形,三维培养条件下细胞形态始终以多角形为主。甲苯胺蓝及II型胶原免疫组化染色结果显示,单层培养1周时均呈强阳性表达,8周后转为弱阳性,而三维培养8周后仍均呈强阳性表达。②三维培养条件下细胞生长曲线无明显增殖高峰,单层培养的细胞第8～10天达增殖高峰。③ELISA检测结果显示,单层培养8周后细胞上清中II型胶原的表达明显高于第1周(P<0.05),同时也明显高于三维培养条件下细胞上清及海藻酸钠基质中II型胶原的表达(P<0.05)。④透射电镜下细胞超微结构基本正常,免疫电镜下可见细胞内II型胶原主要定位于粗面内质网膜内,少数分布在线粒体。⑤14C标记的脯氨酸干预后180min,是细胞内合成及向细胞外分泌II型胶原的高峰期。结论:SW1353人软骨瘤细胞在体外长期单层培养会发生细胞表型改变,其在藻酸盐凝胶三维培养体系中生长状态良好,细胞内软骨细胞标志物II型胶原表达丰富,提示SW1353可以作为软骨细胞功能研究的良好模型。