摘要：目的探讨日本血吸虫童虫细胞体外培养条件。方法选取转铁蛋白、核苷酸、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、黄体酮以及非必需氨基酸与维生素组合等5种促进细胞增殖的因子作为考察因素,每种因素选取添加与不添加两个水平,采用正交设计,以RPMI-1640为基础培养液,配制16种条件培养基对日本血吸虫童虫细胞进行体外培养,通过动态观察和AKP组化染色法及直观法分析法获得不同培养条件影响细胞增殖和细胞活力的结果。结果第2,4,9,13,14孔中的组织出现明显的细胞增殖现象,其细胞AKP检测值也相应较高,各孔中培养细胞的AKP值经直观分析表明促进细胞增殖最佳因素组合为C1B1A1,即转铁蛋白、核苷酸、bFGF。结论转铁蛋白、核苷酸、bFGF对日本血吸虫童虫细胞增殖具有明显促进作用。

摘要：目的构建日本血吸虫铁蛋白proVAX/GMCSF-SjFerDNA疫苗,观察其诱导小鼠产生抗攻击感染的免疫保护性效果。方法小量制备pGMC/SjFer重组质粒DNA,PCR扩增GMCSF-SjFer基因,将此目的片段亚克隆到真核表达载体proVAX中,构建重组真核表达质粒proVAX/GMCSF-SjFer。雌性昆明鼠随机分为对照组、免疫组和空质粒组。空质粒组小鼠股四头肌注射proVAX,免疫组同法注射重组质粒proVAX/GMCSF-SjFer,对照组注射生理盐水。按0、2、6周设计接种3次。末次接种后第2周,感染血吸虫尾蚴(40±2)条/鼠。感染后第42d剖杀小鼠,灌注法冲虫,计数虫荷和克肝卵数。免疫前和免疫后2周留取小鼠血清,用ELISA法检测抗血吸虫成虫抗体水平。结果经PCR和双酶切鉴定,获得1条约为960bp的目的片段和2条酶切片段。免疫组小鼠的减虫率及减卵率分别为22.46%和29.40%,空质粒对照组分别为3.11%和7.79%,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测免疫组小鼠血清特异性IgG抗体水平增高。结论构建的DNA疫苗proVAX/GMCSF-SjFer能诱导小鼠产生一定水平的保护性免疫。