摘要：目的探究lycosin-Ⅰ体外抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的活性及体外联合8种常用抗菌药物对MRSA的抗菌作用。方法本研究遵循了随机对照试验的设计原则。收集中南大学湘雅二医院2021年9至11月临床分离的MRSA 10株,采用微量肉汤稀释法测定lycosin-Ⅰ体外抗MRSA的最低抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)和杀菌动力学试验;采用微量肉汤棋盘式稀释法检测lycosin-Ⅰ与青霉素、红霉素、左氧氟沙星、庆大霉素、利福平、米诺环素、万古霉素及利奈唑胺共8种常见抗菌药物的体外联合抑菌效果。结果lycosin-Ⅰ体外抗MRSA的MIC范围为4~8 mg/L,MIC50和MIC90分别为4和8 mg/L;MBC范围为4~8 mg/L,其比值MBC/MIC为1~2;杀菌动力学试验结果显示,lycosin-Ⅰ浓度为1/2 MIC或MIC时,MRSA临床分离株和标准菌株均在短时间存活菌数下降而后出现恢复繁殖的现象,而浓度为2 MIC或4 MIC时存活细菌载量则呈现逐渐减少直至杀灭的趋势。lycosin-Ⅰ与庆大霉素体外联用时以协同作用为主而与其他抗菌药物联用主要表现为相加作用。此外,lycosin-Ⅰ与抗菌药物体外联用后可显著降低抗菌药物的MIC50和MIC90。结论lycosin-Ⅰ在体外对MRSA具有较好的抑菌和杀菌活性且杀菌快速、彻底,同时与其他抗菌药物体外联合抗MRSA时,能起到协同或相加作用。

摘要：对溴甲酚绿(BCG)法测量血清白蛋白(ALB)进行评价以及探讨其在不同疾病中发生偏倚的影响因素。本研究为横断面研究,以2021年7月在中南大学湘雅三医院肾内科、普外科、感染科等科室的128例住院患者作为研究对象,根据疾病类型分成慢性肾脏病组(47例)、肝病组(40例)、其他疾病组(41例),同时用BCG法和免疫比浊法检测患者血清ALB,所得结果分别用ALBBCG和ALBI表示。根据ALBI结果将各组再分成白蛋白相对高值、相对中间值、相对低值三个亚组,对所有组和亚组中的ALBI与ALBBCG进行配对T检验。用Passing-Bablok回归和Bland-Altman图评估ALBBCG在各组中的应用。以免疫比浊法为参考方法评估BCG法的偏倚,ALBI与ALBBCG的差异表示如下:ΔALB=ALBBCG-ALBI,分别用Pearson相关分析和多元线性回归分析评估各组中ΔALB与ALB自身浓度(ALBI)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β1-球蛋白、β2-球蛋白、γ-球蛋白、肌酐(Cr)、尿素(UN)、尿酸(UA)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)、C反应蛋白(CRP)水平的相关性。结果显示,在总患者组、慢性肾脏病组、肝病组、其他疾病组的相对低值亚组中,ALBBCG均高于ALBI,差异具有统计学意义(t值分别为8.025,6.878,2.628,4.915,P均<0.05)。在相对高值亚组中,ALBBCG均低于ALBI,其中,在总患者组、肝病组、其他疾病组的相对高值亚组中,差异具有统计学意义(t值分别为-4.388,-2.927,-3.979,P均<0.05)。Passing-Bablok回归和Bland-Altman分析显示BCG方法存在比例偏倚。在慢性肾脏病组中,ALBI和Cr浓度对BCG方法偏倚影响最大,回归模型方程为ΔALB=5.437-0.146×ALBI-0.001×Cr,R2=0.505。在肝病组中,ALBI、α1-球蛋白和β1-球蛋白浓度对BCG方法偏倚影响最大,回归模型方程为ΔALB=3.652-0.230×ALBI+0.398×α1-球蛋白+1.171×β1-球蛋白,R2=0.658。在其他疾病组中,ALBI和α2-球蛋白浓度对BCG方法偏倚影响最大,回归模型方程为ΔALB=5.558-0.225×ALBI+0.281×α2-球蛋白,R2=0.646。综上,BCG法存在比例误差,其偏倚会导致不可接受的差异,BCG法检测ALB的偏倚主要受ALB自身浓度的影响,其他还受α1-球蛋白、α2-球蛋白、β1-球蛋白、Cr的影响。

摘要：目的:构建髓系触发受体-1(TREM-1)基因RNAi慢病毒载体,探讨TREM-1在脆弱类杆菌所致炎症反应中的作用。方法:根据小鼠TREM-1 mRNA序列选择4个靶序列并设计合成4对双链DNAoligo,其两端含酶切位点黏端,同时合成1对阴性对照双链DNA oligo;将以上5对双链DNA oligo退火后连入pGCSIL-GFP载体,经PCR及测序鉴定后,将以上质粒分别与包装质粒混合物共转染293T细胞,包装产生病毒颗粒。各组病毒载体转染Raw264.7细胞后,运用real-time PCR和ELISA检测TREM-1 mR-NA和蛋白表达水平。实时定量PCR和ELISA观察干扰TREM-1后脆弱杆菌内毒素引发的Raw264.7细胞内毒素血症模型中TREM-1的表达变化。结果:PCR和测序证实目的双链DNA oligo片段已被准确克隆到pGCSIL-GFP载体;各质粒与包装质粒共转染293T细胞后产生了高滴度的慢病毒颗粒;各组慢病毒感染Raw264.7细胞后均可以显著抑制TREM-1的表达,以pGCSIL-GFP/Lenti-1组效果最明显。在脆弱杆菌内毒素引发的体外细胞内毒素血症模型中TREM-1表达明显增高,实时定量PCR表明慢病毒干扰载体能显著抑制模型中TREM-1的表达。结论:成功构建了小鼠TREM-1基因RNAi慢病毒载体,所构建的慢病毒载体能够抑制脆弱类杆菌内毒素所诱导的TREM-1的表达。

摘要：目的:应用半巢氏聚合酶链式反应(PCR)技术检测临床分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)主动外排系统qac基因,了解qac基因的存在状况。方法:根据MRSA主动外排系统qacA和qacB基因序列设计引物,采用半巢氏PCR法对中南大学3所附属医院2006年8月至2008年3月临床分离的80株MRSA分别扩增qacA/B和qacB基因,并进行序列分析。结果:在80株受检MRSA中,检出qacA/B基因19株,检出率23.75%;qacB基因18株,检出率22.5%。序列分析显示,qac基因与qacA的参考序列(X56628)98%相同,与参考序列qacB(AF535087)97%相同。结论:半巢氏PCR法可成功检测MRSA的主动外排系统qac基因。qac基因阳性株在临床分离的MRSA中占有较高的比例,可能与其多重耐药有关。

摘要：目的调查大肠埃希菌中质粒头孢菌素酶(AmpC酶)的基因型分布以及耐药性。方法收集对头孢西丁耐药的24株大肠埃希菌,根据头孢菌素酶和超广谱内酰胺酶(ESBLs)各种已知基因序列设计引物,进行聚合酶链反应(PCR)及序列分析确定AmpC酶基因以及ESBLs的基因型分布;接合试验证实质粒ampC基因有无可转移性。结果24株耐头孢西丁的大肠埃希菌中13株产CMY型类似AmpC酶,1株产DHA-1型AmpC酶;PCR检测发现ESBLsTEM型15株,CTX-M型2株,SHV型1株。结论耐头孢西丁的大肠埃希菌中发现CMY型类似AmpC酶和DHA-1型AmpC酶。药敏结果对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感。

摘要：目的制备可检测全长SUN5的特异性抗体,并用该抗体检测SUN5蛋白在人类生殖细胞中的表达。方法通过生物信息学比较SUN5与新剪切体SUN5β之间的差异,在差异区域设计合成短肽,制备SUN5多克隆抗体并纯化。用新制备的SUN5抗体对Ntera-2细胞中的SUN5蛋白进行Western blotting和免疫荧光检测,验证抗体的特异性;最后,用该抗体对人睾丸细胞涂片进行检测,观察SUN5蛋白在人生殖细胞中的表达。结果成功合成了SUN5短肽,而且用该短肽制备了SUN5多克隆抗体。Western blot结果显示,新制备的SUN5特异性抗体可检测到全长SUN5蛋白。免疫荧光实验结果表明,在Ntera-2细胞中SUN5蛋白定位在核膜和胞浆。通过对人睾丸细胞涂片的检测发现,SUN5在睾丸精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达。结论成功制备了SUN5特异性抗体,该特异性抗体的制备对于深入研究SUN5的功能具有重要的意义。此外,发现SUN5蛋白在精母细胞、圆形精子细胞及精子中均有表达,提示SUN5蛋白可能在精子发生中发挥着重要的生理功能。

摘要：探讨红细胞碎片计数(FRCs)、红细胞碎片比例(FRC%)对脓毒症预后的诊断效能。采用前瞻性研究,选取2022年6月1日至2023年1月10日在中南大学湘雅三医院重症医学科收治的符合要求的101例脓毒症患者作为研究对象,根据患者30 d结局分为生存组和死亡组。比较脓毒症生存组与死亡组的临床资料和FRCs、FRC%、血小板(PLT)等实验室指标。以是否发生死亡为因变量,将脓毒症患者的病例资料和实验室指标先进行单因素logistic回归,后进行多因素logistic回归分析以分析影响预后的因素,对纳入模型的各参数绘制受试者工作特征曲线(ROC)并计算曲线下面积(AUC),评价单独使用和联合使用各参数对脓毒症患者死亡的预测效能。结果显示,脓毒症死亡组的FRCs、FRC%、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、D二聚体要明显高于生存组,PLT明显低于生存组(Z或t值分别为-3.712,-3.793,-2.119,-2.007,-2.209,均P<0.05),FRCs或FRC%、PLT可能是脓毒症患者30 d死亡的风险预测指标。PLT预测脓毒症患者死亡的AUC为0.727(95%CI 0.629~0.811,P<0.01),最佳截断值为137×10^(9)/L,敏感度为83.87%,特异度为57.14%。FRCs预测脓毒症患者死亡的AUC为0.732(95%CI 0.635~0.815,P<0.01),最佳截断值为10.1×10^(9)/L,敏感度为77.42%,特异度为67.14%。FRC%预测脓毒症患者死亡的AUC为0.737(95%CI 0.640~0.820,P<0.01),最佳截断值为0.34%,敏感度为77.42%,特异度为65.71%。综上,PLT、FRCs、FRC%在脓毒症的预后中具有较大的应用价值。当脓毒症患者PLT、FRCs、FRC%检查结果分别大于137×10^(9)/L、10.1×10^(9)/L、0.34%时,需要及时对病情进行全面综合考虑,尽早采取必要合理的临床干预措施以预防患者死亡。

摘要：目的研究湖南地区产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出和耐药情况,确定其基因型并对其流行病学特征进行研究。方法采用头孢西丁纸片扩散法进行肺炎克雷伯菌AmpC酶表型初筛,提取质粒采用多重PCR技术检测质粒介导AmpC酶基因,设计引物进行结构基因的全长扩增和测序;并应用重复一致序列聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行菌株同源性分析,用琼脂倍比稀释法检测产酶菌的药物敏感性。结果产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌的检出率为19.1%,均为DHA-1型质粒介导AmpC酶;ERIC-PCR结果显示,21株肺炎克雷伯菌有6种图谱类型,产质粒介导AmpC酶菌株呈多药耐药,但对亚胺培南的敏感率为100.0%。结论湖南地区产质粒介导AmpC酶肺炎克雷伯菌检测率高,其质粒介导的ampC耐药基因为DHA-1型基因,产酶菌株存在质粒传播和克隆传播,治疗相关感染以碳青酶烯类抗菌药物为首选药物。

摘要：目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况。方法根据Genbank的序列设计合成金黄色葡萄球菌肠毒素基因A-F的引物,采用聚合酶链反应方法对随机收集的124株金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行检测,并进行序列分析。结果在124株受检的金黄色葡萄球菌中,116株检出肠毒素基因,检出率为93.5%,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为84.7%、6.5%、61.3%、4.8%和24.2%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株(67.2%),以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%、7.8%和13.8%。序列分析显示所检出的肠毒素基因与Genbank上登陆的参考序列的同源性为97%～100%。结论金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因携带率高,其中以携带SEA、SEC、SEF基因为主。

摘要：目的探讨头孢他啶、美罗培南、加替沙星、环丙沙星、左氧氟沙星、丁胺卡那体外联合应用对多重耐药铜绿假单胞菌的抗菌效应,为临床用药提供实验依据。方法采用棋盘法设计,微量肉汤稀释法测定,计算FIC指数,判定联合效应。结果头孢他啶、美罗培南和左氧氟沙星联合应用对铜绿假单胞菌的体外抗菌协同作用分别为25%和18.8%,相加作用分别为59.4%和59.4%,无关作用分别为15.6%和21.8%,无拮抗效应,其他组合均不理想。结论所有组合中,头孢他啶、美罗培南与左氧氟沙星联合应用,有显著效果,且它们联合应用,对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抗菌作用以协同和相加作用为主,无关作用较少,无拮抗效应。