摘要：[背景]颈肩痛是护理人员常有不适症状之一,多由于工作量繁重、工作空间限制、长时间姿势不良等引起。[目的]了解湖南省三级综合医院护理人员颈肩痛的发生情况,并分析工作负荷相关因素。[方法]2018年10—12月,采用多阶段分层随机整群抽样法,选取湖南省5个地理分区的6所三级综合医院中符合纳入排除标准的1200名护理人员为研究对象。采用自行设计的一般资料问卷收集护理人员的一般人口学特征和近1个月颈肩痛发生情况,采用中文版颈椎功能障碍指数量表评估颈痛对日常生活的影响,颈椎功能受损指数进行功能障碍分级;采用自行设计并经基于德尔菲法的专家函询构建的问卷收集工作负荷相关因素(工作时长、姿势负荷和用力负荷3个维度)。回收有效问卷1161份,运用χ^(2)检验和logistic回归模型探究颈肩痛的影响因素。[结果]过去1个月颈肩痛发生率为87.5%(1016/1161),不同特征的护理人员颈肩痛发生率介于76.9%~91.2%。颈椎功能障碍指数量表10个条目的得分从0~5分均有,但大部分集中在0、1和2分,在颈痛对日常生活影响的10个方面中,颈痛对睡眠影响最大[(1.30±1.21)分],对个人护理影响最小[(0.35±0.65)分];颈椎功能受损指数显示大部分(65.4%)护理人员的颈椎处于轻度功能障碍,30.1%处于中度功能障碍。单因素分析显示31条工作负荷相关影响因素中,有24个条目差异有统计学意义;多因素分析显示有3个变量进入回归模型。在同等条件下,每班次做手术/伤口换药/输液等需低头操作累计时长5 h以上者颈肩痛发生风险是1 h以下者的3.03倍;“有时”和“经常”颈部后仰并长时间保持这种姿势者颈肩痛发生风险是“偶尔或从来不”的2.36倍和2.94倍;工作时因姿势不自然很难用得上劲“有时”和“经常”发生者颈肩痛发生概率是“偶尔或从来不”发生者的2.78倍和7.08倍。[结论]湖南省三级综合医院护理人员颈肩痛报告率较高,但多为轻度功能障碍。工作时长、姿势负荷可能与颈肩痛发病有关。

摘要：目的 了解各地区关于腹膜透析医保报销及诊疗收费项目的情况,推动腹膜透析诊疗标准化收费和完善患者医保报销细则,减少患者负担并促进腹膜透析的发展。方法 采用自行设计的腹膜透析项目及医保情况问卷,对除中国香港特别行政区、中国澳门特别行政区、西藏自治区外中国内地30个省、自治区或直辖市的137家开设腹膜透析中心的医院进行问卷调查。对数据进行描述性统计分析,采用KruskalWallis秩和H检验分析各组间差异。结果 30个省、自治区或直辖市的居民、城镇职工、退休职工腹膜透析报销比例的中位数分别为80.0%(70.0%,85.0%),85.0%(80.0%,90.0%),90.0%(80.0%,90.0%)。每月持续性不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)透析总费用低于自动化腹膜透析(automated peritoneal dialysis,APD)(H=26.717,P<0.001)。随着每月CAPD或APD的总费用增高,每月可报销费用增高(H=58.367,P<0.001)。腹膜透析费用存在较大的地区差异性。部分地区未设立出口处肉芽切除、废液袋项目、腹膜透析内涤纶套剥除项目、腹膜透析导管相关性隧道炎治疗等项目(地区比例分别为63%,60%,50%,47%)。常用的如敷贴、废液袋、消毒用品等保障腹膜透析治疗安全的一次性无菌用品,在77%的省市均无报销。结论 本研究分析了目前腹膜透析管理存在的问题,并建议:(1)持续加强基本医保管理体制和运行机制研究,完善对腹膜透析医疗服务的激励机制;(2)完善腹膜透析诊疗收费项目,提高医疗机构提供腹膜透析治疗的积极性;(3)增加可医保报销的腹膜透析诊疗项目,保障患者腹膜透析的安全及质量。

摘要：目的观察pRetw—Super（PRS）反转录病毒载体介导的表达人结缔组织生长因子（CTGF）小分子干扰RNA（siRNA）对体外培养的人腹膜间皮细胞（HPMC）细胞外基质和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法根据siRNA靶序列要求及PRS反转录病毒载体特点分别设计4对寡核苷酸，构建表达人CTGF基因siRNA的PRS—CTGF—siRNA1-4重组反转录病毒载体。以脂质体2000将重组反转录病毒载体转染PT67包装细胞，继而感染HPMC。采用RT—PCR法检测mRNA表达及Western印迹法检测蛋白质表达。结果5μg／L外源性转化生长因子β1（TGF—β1）刺激可诱导HPMC表达CTGF、纤连蛋白（FN）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）、层粘连蛋白（LN）和VEGF明显增高；而PRS—CTGF—siRNA 1～4组与TGF—β1刺激组比较，HPMC细胞内CTGF、FN、ColⅠ、LNmRNA和蛋白表达和VEGF mRNA表达明显较低（P〈0．01），各干扰组对CTGF mRNA抑制率分别为69．3％、22．2％、27．4％和38-8％，其中以PRS-CTGF—siRNA 1组最为明显；同时PRS-CTGF-siRNA 1组相对于TGF—β1刺激组，VEGF蛋白表达也明显较低（P〈0．01）；而PRS空载体组与TGF-β1刺激组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PRS—CTGF—siRNA重组反转录病毒载体可明显抑制TGF-β1诱导的细胞外基质及VEGF表达的增加。

摘要：目的研究RNA干扰对系统性硬化病(SS)皮肤成纤维细胞结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达水平的影响。方法设计4个针对CTGF的特异性小干扰RNA(siRNA)及一个非特异性siRNA。体外转录获得siRNA,将siRNA用6-羧基荧光素(FAM)标记后瞬时转染至原代培养的SS患者皮肤成纤维细胞;转染48h后,以RT-PCR及蛋白印迹法分别检测CTGFmRNA及蛋白量的变化。结果转染了4个特异性siRNA的成纤维细胞中CTGFmRNA水平均有不同程度下调(PsiRNA828>siRNA578>siRNA948。蛋白印迹则显示有3个siRNA能使CTGF蛋白表达水平不同程度下调(P<0.001),其中siRNA742的抑制效应最强。结论RNA干扰能显著抑制SS成纤维细胞CTGF的表达。

摘要：目的检测临床分离的金黄色葡萄球菌肠毒素基因,了解肠毒素基因的携带情况。方法根据Genbank的序列设计合成金黄色葡萄球菌肠毒素基因A-F的引物,采用聚合酶链反应方法对随机收集的124株金黄色葡萄球菌肠毒素基因进行检测,并进行序列分析。结果在124株受检的金黄色葡萄球菌中,116株检出肠毒素基因,检出率为93.5%,其中SEA、SEB、SEC、SED和SEF的检出率分别为84.7%、6.5%、61.3%、4.8%和24.2%,未检测出SEE基因。同时检出2种及2种以上的肠毒素基因的菌株有78株(67.2%),以携带SEA+SEC、SEA+SEF和SEA+SEC+SEF基因为主,检出率分别为33.6%、7.8%和13.8%。序列分析显示所检出的肠毒素基因与Genbank上登陆的参考序列的同源性为97%～100%。结论金黄色葡萄球菌临床分离株肠毒素基因携带率高,其中以携带SEA、SEC、SEF基因为主。

摘要：B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)是一种重要的抗凋亡蛋白质,在多种人类肿瘤中普遍过表达。甘氨鹅脱氧胆酸钠(GCDA)与消化道肿瘤的发生发展密切相关,并能介导肝癌细胞对化疗药物的抵抗。本文旨在探讨在GCDA介导的人肝细胞癌(HCC)耐药性中Bcl-2的作用及其机制。本研究以肝癌细胞系为研究对象,Western印迹结果显示,Bcl-2在多种肝癌细胞系中均有表达。设计靶向Bcl-2的siRNA沉默HCC细胞系内源性Bcl-2的表达,发现Bcl-2沉默之后促进了化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡。机制上,GCDA可介导Bcl-2在Ser70位点的磷酸化,而Ser70位点的磷酸化能够被PD98059(MAPK/ERK1/2抑制剂)所抑制。构建huBcl2-WT和huBcl2-S70A真核表达载体,脂质体转染HCC细胞系。用Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测凋亡细胞。结果显示,huBcl2-WT过表达能抑制5-FU介导的凋亡,S70位点失活突变成A后,Bcl-2的过表达不能抑制5-FU介导的凋亡。本研究提示,GCDA通过MAPK/ERK1/2通路介导的Bcl-2 Ser70位点的磷酸化,在肝癌细胞的存活和抗药中发挥重要作用。抑制Bcl-2能够促进化疗药物5-FU介导的HCC细胞凋亡,该结果为治疗GCDA介导的耐药性肝癌提供新的思路。

摘要：目的用PRS逆转录病毒载体构建介导人结缔组织生长因子(CTGF)小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达的PRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体,并建立高效、稳定表达CTGF-SiRNA的包装细胞株。方法根据siRNA靶序列设计要求及PRS逆转录病毒载体特点分别设计含64bp DNA序列的4对寡核苷酸,并在体外合成。PRS载体用BglII、HindIII双酶切完全后,分别与退火的4对寡核苷酸进行连接,构建成表达CTGF小分子干扰RNA的PRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体。用脂质体2000介导转染PT67包装细胞,经抗性筛选,挑单克隆,扩大培养,用NIH3T3细胞测定病毒滴度,筛选出高效产毒细胞株。结果经酶切、连接后构建成的质粒称之为PRS-CTGF-SiRNA1～4,经酶切与测序证实构建成功,无任何碱基突变。经脂质体介导转染包装细胞、抗性筛选和NIH3T3测定病毒滴度,筛选出具有高病毒滴度的细胞集落,扩大培养后建立CTGF-SiRNA高效表达的包装细胞株。结论成功构建了能表达CTGFsiRNA的PRS-CTGF-SiRNA逆转录病毒载体,并建立了稳定、高效生产有活性的的CTGF-SiRNA产毒包装细胞株。

摘要：目的研究CTGF-siRNA的体外转录合成及使用专门转染试剂盒将其转染至硬皮病皮肤成纤维细胞的转染效率,为将RNA干扰技术深入应用到硬皮病治疗做铺垫。方法体外培养硬皮病皮肤成纤维细胞;设计CTGF的siRNA;通过体外转录获得siRNA;将siRNA以SilencerTMsiRNALabelingKit标记;用siPORTTMAmine转染至成纤维细胞;荧光显微镜观察转染情况。结果转染率可高达85.32%。结论该方法操作简便,且可达到理想的转染率。

摘要：目的 :构建人转化生长因子beta 1(TGFβ1)正、反义基因真核表达载体。方法 :从人胎脑的cDNA文库中扩增出TGFβ1共 12 84bp长的DNA片段后 ,与T载体直接进行高效连接 ,并测序证实无突变。接着利用TGFβ1引物两端所设计的酶切位点将目的片段定向亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1( )。构建的正反义表达重组体 (pcDNA3.1 TGFβ1和pcDNA3.1 antiTGFβ1)经限制性内切酶消化证实其中有目的片段完整插入。结果 :本实验成功构建了人正、反义TGFβ1基因真核表达载体。结论 :人正、反义TGFβ1基因真核表达载体的构建 ,为今后研究腹膜纤维化的防治奠定了实验基础。

摘要：目的研究G9PAMAM纳米载体介导的结缔组织生长因子(CTGF)短发夹RNA(shRNA)质粒(pCTGF-shRNA)对小鼠腹膜间皮细胞CTGF表达的影响。方法设计并构建质粒pCTGF1-shRNA、pCTGF2-shRNA和阴性对照pHK-shRNA;应用G9PAMAM将质粒分别转染4.25%葡萄糖刺激下的第3代小鼠腹膜间皮细胞;采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)检测细胞CTGFmRNA水平,采用WesternBlot检测CTGF蛋白含量。结果4.25%葡萄糖可刺激小鼠腹膜间皮细胞CTGF的mRNA和蛋白表达明显上调。pCTGF1-shRNA转染组和pCTGF2-shRNA转染组的CTGF表达较高糖组明显下调(P0.05)。结论G9PAMAM纳米载体可介导pCTGF-shRNA转染原代小鼠腹膜间皮细胞,并能抑制高糖诱导的CTGF表达上调,提示PAMAM介导的pCTGF-shRNA可有效地用于腹膜纤维化的基因治疗。