摘要：目的Survivin是近年来发现的凋亡抑制蛋白家族新成员,在多数恶性肿瘤组织中丰富表达。因此,观察Survivin反义寡核苷酸(ASODN)转染对人膀胱移行细胞癌T24细胞凋亡、增殖、细胞对化疗药物敏感性的影响。方法设计合成针对SurvivnmRNA特异性的ASODN,透射电镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测各组细胞增殖指数(proliferativeindex,PI)和凋亡指数(apoptoticindex,AI),RT-PCR法分析转染后Sur-vivnmRNA及Caspase-3mRNA的变化,WesternBlot法检测各组Survivn蛋白表达情况,荧光分光光度法测定Caspase-3的活性水平;MTT实验测定T24细胞对丝裂霉素(mitomycin,MMC)的敏感性。结果A-SODN转染组透射电镜下观察到凋亡的征象,而各对照组未见凋亡证据;各转染组细胞AI明显高于各对照组,PI明显低于各对照组(P0.05);各转染组细胞SurvivinmRNA、Survivin的表达较各对照组明显下调(P0.05);Caspase-3mRNA的表达在各组细胞间差异无显著性(P>0.05);各转染组细胞Caspase-3活化水平较各对照组明显提高(P0.05);MTT实验显示,转染组MMC半数抑制浓度(IC50)较对照组明显下降,ASODN可提高T24细胞对MMC的敏感性。结论SurvivinASODN转染T24细胞后可特异性封闭Survivin的表达,对Caspase-3mRNA的表达无明显作用,能激活Caspase-3无活性前体,从而诱导T24细胞凋亡,抑制细胞增殖,提高T24细胞对化疗药物MMC的敏感性。

摘要：目的构建针对人抑凋亡基因Livin的小干扰RNA(siRNA)重组表达质粒载体。方法通过分子克隆技术,设计并合成具有基因特异性的3组寡核苷酸片段,克隆到pmU6质粒载体,并经菌落PCR鉴定及测序鉴定,Livin的siRNA序列成功克隆到重组表达质粒载体中。结果经菌落PCR鉴定及测序鉴定证实,人Livin的siRNA序列成功克隆到表达载体中,插入序列正确。结论成功构建了Livin siRNA质粒表达载体,为后续研究降低或沉默Livin基因表达后能否有效抑制膀胱癌细胞增殖和促进细胞凋亡奠定了基础。