摘要：【目的】研究外源激素处理油茶接穗后进行高接换冠对嫁接成活率及生长的影响,探索提高油茶高接换冠成活率和促进新梢生长的方法。【方法】以海南本地实生油茶苗造林的8年生油茶树为砧木,选用3种外源激素(NAA、IAA、GA3)的3种质量浓度(50、150、250 mg/L)和3种处理方式(速蘸1~2 s、接后喷施、浸泡15 min),采用正交设计L9(34)进行高接换冠试验,以不做任何处理为对照(CK)。嫁接后调查接口愈伤组织形成率、嫁接成活率、接穗抽梢率和枝条生长量,并测定新梢叶片的生理特性等指标。【结果】3种外源激素对油茶的嫁接均有促进作用,不同外源激素的最适浓度不同,最优处理为50 mg/L NAA速蘸接穗。在最优处理中,嫁接40 d时愈伤组织形成率为97.89%,比对照高10.11百分点;嫁接成活率为97.78%,比对照高12.22百分点;抽梢率为92.22%,比对照高26.67百分点。枝条生长量也显著高于其他处理,嫁接60 d时的枝条长度为12.51 cm,粗度为3.30 mm,嫁接120 d时的枝条长度为64.56 cm,粗度为6.35 mm。使用适当浓度的外源激素处理的接穗进行嫁接能增加叶片中可溶性糖和可溶性蛋白的含量,并提高SOD、POD、CAT的活性,说明在进行油茶高接换冠时使用适宜浓度的外源激素处理接穗可以提高新梢叶片的生理抗性,为枝条的生长提供了有利条件。【结论】在进行海南油茶的高接换冠时,使用适当浓度的外源激素处理接穗,可加快接口愈伤组织形成,提高嫁接成活率,促进接穗萌芽和枝条生长,但在选择不同外源激素处理接穗辅助嫁接时,需要控制处理浓度和处理时间。

摘要：为研究寡核苷酸芯片在确定梨品种S基因型中的应用价值,根据梨自交不亲和基因的结构特点设计了部分S基因的检测探针,并制成寡核苷酸芯片;采用引物Cy3荧光标记法标记检测样品的PCR产物并进行杂交,以检测不同样品的S基因型。结果表明:通过对不同杂交温度、杂交时间等的探索获得了较好的反应条件并用制备的芯片检测了已知S基因型的梨样品,检测结果与各品种的已知基因型相符。证明寡核苷酸芯片检测梨品种的S基因型是一种切实可行的检测方法,若对芯片进一步完善,则在今后梨自交不亲和性状的机理研究及梨自交不亲和性状的利用等方面将有着广阔的应用前景。

摘要：利用油体蛋白表达系统生产活性蛋白,是一种利用生物反应器生产高纯度无污染活性肽的新方法。为给后期油茶油体蛋白表达系统的开发应用提供依据,分别以油茶油体蛋白基因和油茶金属硫蛋白基因为模板设计引物,PCR扩增获得CDS片段,通过酶切连接构建p ET30a重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),成功表达,在此基础上将两者二次重组,成功构建油茶油体蛋白金属硫基因表达载体。

摘要：以油茶转录组数据为基础,采用RT-PCR和RACE技术,根据Unigene序列设计油茶甘油二酯激酶基因(Co DGK)RACE引物,分离克隆了DGK基因全长c DNA序列,命名为Co DGK3(Gene Bank登录号:KM068056),基因全长1 568 bp,开放阅读框1 455 bp,编码485个氨基酸;氨基酸同源比对及序列分析表明油茶与其它物种的DGK氨基酸序列具有较高的相似性,其中与麻风树和毛果杨相似性最高,达到78%;利用生物学软件对蛋白质进行生物信息学分析,获得其结构特点及理化性质;分析转录组数据中DGK相关的Unigene序列RTKM值和对Co DGK3基因实施实时荧光定量PCR,结果表明Co DGK3在油茶种子发育各时期表达量变化差异不大,并且发现转录组数据分析和实时荧光定量分析的结果变化规律一致,证明了转录组测序的有效性。

摘要：根据东方梨中已鉴定的46个S基因序列和S基因的结构特点,设计了86条寡核苷酸探针并制备成S基因寡核苷酸检测芯片,采用Cy3荧光修饰引物标记被检测品种的PCR产物并与芯片杂交,以检测不同品种的S基因型。结果表明:利用芯片与华梨2号、秀玉和德胜香等已知S基因型的品种杂交,杂交信号显示与各品种已知基因型相符合。利用芯片鉴定了丽江黄酸梨等27个未知S基因型的梨品种,获得了各品种的S基因型,随机选取部分品种进行DNA测序和序列分析,结果与芯片杂交结果完全一致,证明利用S基因寡核苷酸芯片鉴定梨品种S基因型结果准确可靠。

摘要：为得到高质量的油茶总RNA及稳定的内参基因，以油茶良种‘华硕’为试验材料，采用ambion试剂盒结合CTAB法进行总RNA提取。获得的总RNA完整性好，纯度高；从前期构建的油茶转录组数据中选取ACT（肌动蛋白基因）等14个基因作为候选内参基因，共设计22对引物，通过RT-PCR反应体系的优化及琼脂糖凝胶电泳检测，快速筛选出了适合油茶不同组织（器官）的内参基因。ALB（清蛋白基因），EF1α（延伸因子基因），ETIF3H（启动因子基因），UBC2（泛素结合酶基因）可以作为油茶果实初选内参基因，EF1α可以作为油茶根、茎、花及果实内参基因，ETIF3H可以作为油茶根、茎、叶、花瓣的内参基因。

摘要：杜仲富含萜类物质,MVA途径是萜类物质合成的重要途径之一。从杜仲果实转录组数据KEGG中杜仲MVA途径共被注释30条Unigene,根据NCBI中的BLAST比较,分别鉴定了乙酰COA酰基转移酶,羟甲基戊二酰辅酶a合成酶,羟甲基戊二酰辅酶a还原酶,甲羟戊酸激酶,磷酸甲羟戊酸激酶,二磷酸甲羟戊酸脱羧酶基因,被注释7条,3条,11条,2条,2条,5条。表达差异分析表明,以上基因中分别为5条,3条,4条,1条,5条为幼果和成熟果实差异表达基因。对差异表达基因序列进行软件设计、引物特异性分析和实验验证,最终筛选出10对适合杜仲MVA途径SYBR GreenI荧光定量PCR的引物,为MVA途径基因表达差异研究及萜类物质积累的分子机理研究提供重要依据。

摘要：【目的】山苍子Litsea cubeba是我国特有的木本香料树种,其用途广泛,经济价值较高。本试验通过研究不同基质配方对山苍子容器苗生长的影响,筛选出山苍子最适宜的栽培基质,为山苍子容器育苗提供理论和参考依据。【方法】以山苍子1年生苗为试验材料,以泥炭、珍珠岩、锯末、黄心土为基质原料,采用单形重心混料试验设计方法,共设计9种基质配方,通过对不同基质配比下山苍子容器苗的物理性质、生长指标、叶片生物量、根系形态指标的测定分析,揭示不同基质配比对山苍子生长的影响。【结果】9种不同基质配方的物理性质存在显著性差异。其中T3处理下土壤密度最大,为0.73 g/cm^3,T2处理下土壤密度最小,为0.54 g/cm^3,两者之间存在显著性差异。土壤含水率最高达到37.36%。总孔隙度最大的为T2(61.56),最小的为T1(48.70),两者之间差异性显著。CK的pH值最小(5.08);不同基质配比对山苍子容器苗的苗高差异不显著。CK的地径(0.52 cm)是T2、T3和T8的2.08倍,显著高于这3个处理;高径比最小值为CK(66.97);不同基质配比对山苍子容器苗的叶片数量差异不显著,而不同基质配比对山苍子容器苗的叶片面积、叶片鲜质量、叶片干质量、叶片含水量差异达显著性水平;9种不同基质配方的根系形态指标也存在显著性差异。其中T8的主根长最大(12.6 cm),T1的主根长最小(5.8 cm),两者差异显著。【结论】通过主成分分析进行综合评定,结果表明:处理T2即V(黄心土)∶V(锯末)∶V(泥炭土)∶V(珍珠岩)=0.6∶0.4∶0∶0为山苍子容器苗最佳基质配方。

摘要：为鉴定中国梨S-RNase基因及其S基因型,根据日本梨S-RNase基因保守区设计引物,对13个中国梨品种进行基因组PCR特异扩增,并对PCR产物克隆、测序、序列分析.结果鉴定出13个S等位基因,其中11个S基因与GenBank中已知的S1,S7,S12,S15,S16,S18,S19,S22,S27,S29,S34-RNases相同,另外2个则为新的S-RNase基因,命名为S37-RNase和S38-RNase,GenBank接受号分别为DQ839238、DQ839239.13个S等位基因中,在推导氨基酸水平上,S18与S27相似性最低,为58%,S7与S27,S12与S19,S15与S37及S15与S38间相似性最高,为94%.经分析,S19为中国梨中出现频率最高的等位基因,对其DNA序列进行限制性酶切位点分析,建立了一种快速、经济鉴定S19的方法,该方法无需测序而仅使用特异的限制性内切酶AflⅡ对PCR产物进行酶切消化.根据分子鉴定结果,13个中国梨品种S基因型被确定为:冰糖(S16S19),六棱(S16S19),锦香(S34S37),鹅酥(S15S38),蜜梨(S19S29),甜橙子(S7S12),大青皮(S19S34),秋白(S19S34),紫酥(S19S34),花长把(S19S22),灌阳雪梨(S18S27),早蜜(S19S29),青面(S1S18).

摘要：以云实当年生嫩叶为试材,设计正交试验优化脱分化和再分化培养基配方,获得体细胞胚并诱导不定芽;筛选最佳生根培养基,获得完整无菌植株并移栽成活。试验结果表明,最佳诱导愈伤组织培养基为:1/2MS+TDZ 0.5 mg.L-1+IBA0.3 mg.L-1,且该培养基也适合云实叶片愈伤组织再分化出芽;添加0.1%活性碳能抑制褐化,同时促进体细胞胚发生和不定芽产生;1/2MS+NAA 0.1 mg.L-1最适宜云实无菌苗生根,其根系数量质量均优于其他生根培养基组合;移栽采用蛭石∶珍珠岩∶草炭灰(1∶1∶1)基质,成活率达85%。