摘要：一个物种的内源特异参照基因是该物种区别其它物种的特异性标志之一。本研究通过对GeneBank中花生基因信息的检索分析,筛选出花生几丁质酶基因chi2.2作为该物种内源特异参照基因的候选基因。通过对该基因的特定区域设计引物,建立了花生产品特异性定性PCR检测方法。利用该方法分别对16个花生品种的DNA进行PCR扩增,均能扩增出81bp的片段。利用相同引物分别对其他油料作物、粮食作物和蔬菜等(油菜,大豆,芝麻,向日葵,油棕,棉花,水稻,玉米,长豆角,豌豆,土豆,萝卜,辣椒,茄子,拟南芥,烟草)的DNA进行PCR扩增,均未发现特异性扩增产物。结果表明,本研究建立的花生产品检测方法具有很好的物种特异性,且其灵敏度达到0.05ng基因组DNA。该方法可用于花生源成分鉴定,如确定食品中是否含有花生源成分,本研究为识别掺假使杂和保障食品安全提供有效手段。

摘要：在具有众多学生的实验教学中,合理设计分配实验目标,科学安排实验内容,可以达到既对科研有益的结果,又提高加深学生对实验的认识和理解,增强学生实验的积极性。本文介绍了将一个研究发育中种子中表达转录因子DOF基因项目的两个基因在不同花生品种中的克隆安排在分子生物学实验技术的实验教学课程"基因工程"中,按照研究所用技术,次序进行DNA提取、PCR、琼脂糖凝胶电泳和特异DNA从凝胶中的回收、PCR产物与T载体的连接、感受态细胞的制备、重组载体的转化、重组菌的筛选和鉴定一系列相互联系的实验,使分离的实验技术形成了完整的体系。使整个实验课程即具有技术教学的特点,又具有科学研究的整体意义,前后结果相互联系,使学生兴趣盎然,教学效果大幅度提高。

摘要：[目的]探讨甘蓝型油菜EIN3(BnEIN3)基因与菌核病抗性的关系。[方法]根据GenBank中已公布的拟南芥EIN3基因的保守区及甘蓝型油菜EST序列,设计特异性引物,分别进行基因组PCR和RT-PCR扩增,克隆BnEIN3基因。对菌核病不同抗性的3个油菜品种中BnEIN3的表达进行荧光定量PCR检测分析。[结果]克隆得到1 947 bp的基因片段,与拟南芥EIN3一致性高达82%,有完整的开放阅码框,编码614个氨基酸,其中包含1个EIN3结构域,初步认定该片段为油菜BnEIN3基因。在高抗品种(D083)中,菌核病在侵染后期快速诱导BnEIN3上调表达,且显著高于中抗(中双9号)及高感品种(84039)中该基因的表达水平。在中抗及高感品种中,菌核病均抑制BnEIN3的表达,且中抗品种BnEIN3表达量一直大于高感品种。[结论]BnEIN3可能与油菜对菌核病抗性相关。

摘要：基于原芯片杂交结果,油菜杂合双显性雄性核不育系差异表达基因Bn19070与拟南芥At2g19070基因高度同源,在油菜可育株雄蕊中高量表达,不育株雄蕊中表达量极低。从雄性不育基因At2g19070入手,利用amiR-NAi(人工微RNA干扰)技术对其两个RNA区段分别设计靶标,转化拟南芥。在多个转基因拟南芥植株和后代中普遍观察到小孢子数量减少、成熟花粉萎缩失去活力、不结实或者少结实的不育表型。两个靶标的干扰使转基因拟南芥出现了类似的表型,基因表达抑制率都在90%以上,干扰效果好,暗示amiRNAi技术在靶标选择上具有一定的灵活性。At2g19070基因的干扰对Bn19070的功能研究有借鉴作用。

摘要：[Objective] This study aimed to clone the gene atp6 from rice mitochondria, construct the binary expression vector 35S ：： Rflb5＇ ：： atp6 and obtain transgenic plants with atp6. [Method] The special primers were designed according to the sequence of target gene. With the TRIzol method the total RNA was extracted from rice seedlings and reverse transcripted to cDNA. The ORF of atp6 was amplified by PCR, and ligated to binary expression vector pCAMBIA1302 which contains se- quence of signal peptide from mitochondria （Rflb5＇）. The recombinant plasmid was then transformed into rice callus mediated by Agrobacterium. [Result] The binary expression vector 35S ：： Rflb5＇ ：： atp6 was constructed, and positive transgenic plants were obtained. [Conclusion] This study lays foundation for understanding influence of atp6 gene over-expression on rice growth.

摘要：[目的]克隆水稻线粒体基因atp6,构建转基因表达载体,获得35S∷Rf1b5'∷atp6转基因水稻植株。[方法]设计目的基因的特异引物,采用TRIzol法提取水稻叶片总RNA,借助Toyobo反转录试剂盒反转录为cDNA,通过PCR扩增得到atp6全序列;将atp6连接到含线粒体信号肽(Rf1b5')的pCAMBIA1302双元表达载体上,采用农杆菌介导的愈伤组织侵染法进行水稻的遗传转化。[结果]利用目的基因atp6成功构建了35S∷Rf1b5'∷atp6植物表达载体,并获得了转atp6基因的阳性植株。[结论]为探讨水稻中超表达atp6对水稻生长的影响奠定基础。