摘要：目的:研究NANOGP8基因在肺癌细胞系A549中启动子区域甲基化水平及其与基因表达的相关性。方法:利用MethPrimer甲基化岛预测和甲基化引物设计软件,预测NANOGP8启动子区甲基化位点。分别从人成纤维细胞系和肺癌细胞系中提取基因组DNA,经过亚硫酸氢钠处理后,用针对甲基化位点设计的引物进行PCR扩增,获得相应区段DNA后,连接到pGEM-T载体,转化大肠杆菌鉴定阳性克隆后,测序并与GenBank数据库中NANOGP8基因组DNA序列比对,获得其甲基化水平数据。分别提取两个细胞系的总RNA,RT-PCR获得相应cDNA进行PCR扩增,扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,经酶切和测序验证,获取其表达水平数据。结果:成功预测NANOGP8的两个区域有甲基化位点,并检测到人成纤维细胞系和肺癌A549细胞系中NANOGP8启动子甲基化水平分别为59.7%和12.5%,表达检测结果显示在A549细胞系中检测到NANOGP8的基因片段,而在人成纤维细胞系中没有扩增到相应产物。结论:在正常成体细胞中NANOGP8基因由于启动子的高度甲基化而沉默,而在肺癌细胞系中NANOGP8基因启动子去甲基化激活其表达。NANOGP8基因的表达与其启动子区域去甲基化密切相关,同时NANOGP8在肺癌细胞分化过程中发挥重要作用。

摘要：目的 :设计、合成硫 (醇 )代α 酮酸酯类化合物 ,并对其神经营养活性进行初步的评价。方法 :基于先期工作 ,根据功效相关等原理设计、合成硫 (醇 )代α 酮酸酯类化合物 ,并运用体外PC12细胞缺氧存活模型 ,观察了目标化合物的神经营养作用。结果与讨论 :设计、合成硫 (醇 )代α 酮酸酯类化合物 10个 ,其结构经1HNMR、13 CNMR和MS确定。初筛实验结果表明 ,大部分目标化合物对PC12细胞缺氧损伤具有显著的保护作用 ,其具有进一步研究的价值。

摘要：寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)是虫媒黄病毒属的重要成员,因其在2015年的南美寨卡疫情中导致大量新生儿小头症而备受关注,目前尚无获批上市的寨卡病毒疫苗.与传统疫苗相比,mRNA疫苗在安全性、有效性和产能方面优势明显,代表未来全新的疫苗形式.本研究选取寨卡病毒FSS13025株包膜蛋白E的Ⅲ区(EDⅢ)作为免疫原,设计构建包含EDⅢ编码序列、非编码区和poly(A)尾的重组质粒,通过体外转录和加帽反应获得EDⅢ-mRNA转录体,其转染至HEK293TN细胞后能表达特异的目的抗原并能分泌至胞外.进一步利用微流控技术将EDⅢ-mRNA转录体制备成脂质纳米颗粒(lipid nanoparticle,LNP),以间隔3周加强一次的免疫方案分别将5和20μg的EDⅢ-mRNA经肌肉注射至BALB/c小鼠.酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和空斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)的结果显示,该分子可刺激小鼠产生剂量依赖性的高水平的E蛋白特异IgG抗体与寨卡病毒中和抗体,并产生Th1细胞偏向的分泌型IFN-γ、TNF-α和IL-2细胞因子.攻毒保护试验结果显示,免疫组小鼠的病毒血症和主要脏器中的病毒RNA载量相较于磷酸盐缓冲液(phosphate-buffered saline,PBS)对照组小鼠均明显降低,其中孕鼠大脑及胎鼠大脑未检测到病毒核酸,体现出良好的免疫保护和垂直传播阻断效果.本研究设计的编码寨卡病毒E蛋白Ⅲ区的mRNA-LNP疫苗可为寨卡病毒疫苗提供新的候选.

摘要：目的运用功能磁共振成像(fMRI)观察24h睡眠剥夺对脑局部一致性(ReHo)的影响,并初步探讨经颅电刺激对睡眠剥夺后脑ReHo变化的干预作用。资料与方法采用自身前后对照的研究设计,16例健康受试者参加试验,并分别在清醒状态、睡眠剥夺后及给予经颅电刺激(真刺激或假刺激)后进行静息态fMRI扫描,应用ReHo分析方法,计算全脑在不同状态下的ReHo值,并分析睡眠剥夺前后及睡眠剥夺后经颅电刺激(真、假刺激)组间的差异。结果与正常睡眠状态相比,睡眠剥夺后ReHo显著增加的脑区主要包括左侧中央前回、右侧中央后回、双侧颞叶及丘脑;下降的脑区主要包括右侧楔前叶、左侧枕上回、边缘叶及双侧角回、额上回、额中回。经颅电刺激作用于前额叶区域后,与假刺激组相比,真刺激组ReHo增加的脑区主要包括双侧楔前叶、角回以及右侧额、上中回;ReHo下降的脑区主要包括左侧额叶内侧面、右侧中央前回、海马旁回、黑质以及双侧颞叶、脑桥等。结论睡眠剥夺可引起大量脑区的ReHo发生改变。以经颅电刺激的方式刺激前额叶区域后,可使因睡眠剥夺引起ReHo降低的脑区得到改善,以双侧楔前叶/后扣带回皮质为主,表明经颅电刺激作用于前额叶区域能干预因睡眠剥夺引起的脑功能紊乱。

摘要：目的从人组织cDNA文库克隆胆管癌相关基因FXYD6并进行功能区定位分析。方法利用人胎肝、脑及脾cDNA文库,通过Goldkey软件进行引物设计,从组织cDNA文库获得FXYD6全长和转录编码区序列,对其进行克隆与纯化;对FXYD6基因重组克隆进行测序鉴定;并应用GenBank核酸数据库及Goldkey软件对其功能区进行定位分析。结果在胎肝和脑cDNA文库中,扩增出FXYD6特异条带,但在脾cDNA文库未见扩增产物。将PCR扩增产物与pGEM-T载体连接,进行转化后确认回收组、阳性对照组均可见单菌落生长。选取阳性克隆进行菌落收获和质粒提取,并行测序分析,该序列包含已测序FXYD6基因大片段和可能的编码区序列。通过序列分析,得到最可能编码区序列为+1相位编码区序列,进一步分析得到该基因产物作为膜蛋白的可能功能区分布。结论 FXYD6基因克隆、纯化及功能区定位的成功为进一步研究该基因的功能奠定了基础。

摘要：目的研究北京地区儿童ORMDL3基因表达水平、生活方式、室内空气质量与哮喘发生的相关性。方法采用病例-对照方法进行实验设计。使用RT-PCR法检测儿童ORMDL3基因表达水平;通过《国际儿童哮喘及过敏研究(ISSAC)问卷》收集儿童生活方式信息;并根据《室内空气质量标准(GB/T18883-2002)》中规定的检验方法对室内空气中PM2.5,VOCs,甲醛浓度及空气温湿度进行监测。使用t检验、卡方检验分析病例组与对照组儿童ORMDL3基因表达水平,生活方式与室内空气质量差异;使用Logistic逐步回归来分析ORMDL3基因表达水平,生活方式与室内空气质量对与哮喘之间相关性。结果 ORMDL3基因表达水平在病例组与对照组中有显著差异(P<0.05)。在早发型哮喘患儿中,ORMDL3基因表达水平、哮喘家族史与哮喘显著相关(P<0.05)。而在迟发型哮喘患儿中,ORMDL3基因表达水平、采暖方式、室内空气湿度与哮喘显著相关(P<0.05)。结论 ORMDL3基因表达水平与儿童哮喘的发生密切相关,早发型哮喘患儿与遗传因素有显著关联,而迟发型哮喘患儿中遗传因素与环境因素均与哮喘相关。

摘要：目的探讨Toll样受体5（Toll-likereceptor5，TLR5）基因多态性位点与脓毒症发生风险及疾病严重程度的相关性。方法采用病例一对照研究设计，募集了255例脓毒症患者和260例对照个体。应用贝克曼公司的商用SNPstream分型技术和PCR—RFLP方法对TLR5基因的3个编码区多态性位点进行分型。采用Logistic回归分析，校正性别、年龄、吸烟和饮酒、慢性病状态、APACHEⅡ评分和脓毒症病因等混杂因素的影响，评价多态性位点与脓毒症的发生风险，以及脓毒症性休克、死亡和器官功能障碍等表型的遗传相关性。结果TLR5基因的3个多态性位点在病例和对照组中的基因型分布均呈哈．温平衡状态。这3个编码区的多态性位点与脓毒症的发生风险和疾病严重程度均无遗传学关联。结论TLR5基因的多态性位点可能在脓毒症的发生、发展和病程转归中不发挥重要作用。