摘要：【目的】建立一种基于成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 13a,CRISPR/Cas13a),针对马尔堡病毒核酸的快速检测方法。【方法】根据马尔堡病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因保守区序列设计合成特异性的逆转录酶重组酶介导链替换核酸扩增(reverse transcription recombinase aided amplification,RT-RAA)引物及CRISPR RNA(crRNA),利用RT-RAA等温扩增技术对靶序列进行扩增,通过CRISPR/Cas13a系统检测扩增产物,并结合消线法(easy-readout and sensitive enhanced,ERASE)侧流层析试纸进行结果判读。最后利用国家标准品对建立的新方法的灵敏度和特异性进行评估。【结果】筛选出一组针对马尔堡病毒NP基因的高效扩增引物和crRNA,建立了用于马尔堡病毒检测的CRISPR-ERASE方法,可在1 h内检测出浓度为1 copy/μL目标核酸,并与其他多种病原体无交叉反应。【结论】本研究基于CRISPR/Cas13a建立了一种快速、简便、高灵敏度和高特异性的马尔堡病毒核酸检测方法。

摘要：目的建立一种基于环介导等温扩增(LAMP)微流控芯片技术的快速检测蚊媒携带登革病毒的方法。方法根据登革病毒衣壳蛋白(C)、前膜蛋白(prM)和非结构蛋白2A(NS2A)基因片段构建pUC-GWAmp-CprM和pUC-GW-Amp-NS2A质粒,设计多组环介导等温扩增特异性引物组。制备LAMP微流控芯片,以靶基因质粒、登革病毒核酸为模板进行检测,根据起峰时间、相对荧光单位、假阳性、重复实验稳定性、检测灵敏度等指标筛选最优引物组。用最优引物组分别检测埃及伊蚊、白纹伊蚊等主要登革热传播媒介和常见的致倦库蚊、中华按蚊、摇蚊的cDNA,并与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒等常见蚊媒传播病原体进行交叉检测,评价LAMP法的特异性。评价LAMP法检测CprM和NS2A靶基因质粒的灵敏度,分别与PCR、实时荧光定量PCR(qPCR)检测结果进行比较。用登革病毒RNA与传播媒介埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA分别以1∶10、1∶100和1∶1000混合,模拟媒介携带登革病毒的样品进行LAMP微流控芯片检测。对采集自宁德市三都岛、西安市、上海朱家角、长兴岛和五角场等5地的白纹伊蚊的cDNA进行检测。结果引物组筛选结果显示,CprMG2和NS2AG1引物组起峰时间早,相对荧光单位高,灵敏度最高,为最优引物组。CprMG2引物组可检测浓度低至10-6 ng/μl的pUC-GW-Amp-CprM质粒,最低检测限为1.3×10^(3)拷贝;NS2AG1引物组可检测浓度低至10-9 ng/μl的pUC-GW-Amp-NS2A质粒,最低检测限为1拷贝。最优引物组CprMG2、NS2AG1对埃及伊蚊、白纹伊蚊、中华按蚊、致倦库蚊、摇蚊等蚊虫cDNA无非特异性扩增,与寨卡病毒、流行性乙型脑炎病毒、恶性疟原虫、黄热病毒核酸无交叉反应。LAMP微流控芯片检测CprM靶基因的最低检测限为1.3×10^(3)拷贝,较PCR检测的最低检测限(1.3×10^(4)拷贝)高1个数量级;LAMP微流控芯片检测CprM和NS2A靶基因的最低检测限分别为1.3×10^(3)拷贝、1拷贝,与qPCR检测的最低检测限(1.3×10^(3)拷贝、1拷贝)相当。LAMP微流控芯片检测模拟现场样品的结果显示,CprMG2可检出与埃及伊蚊、白纹伊蚊RNA 1∶10、1∶100和1∶1000混合的登革病毒RNA,NS2AG1最低可检出1∶100混合的登革病毒,特异性均为100%。LAMP微流控芯片检测5地现场采集白纹伊蚊的结果均为阴性。结论建立了基于LAMP微流控芯片检测登革病毒的方法,该法敏感性和特异性高,检测时间短,可用于现场蚊媒携带登革病毒的检测。

摘要：针对辐射剂量学领域人员剂量快速评估的应用需求以及现有通用蒙卡程序计算时间过长的问题,本文开发了基于GPU加速的光电耦合输运蒙卡程序Gadep。根据GPU显卡CUDA编程模型下内存、线程层次结构和执行模型中的硬件层次结构特点,对程序框架、粒子输运、步长抽样、数据结构和截面访问等进行了设计和优化。通过计算ICRP 116号成年男性参考人体素模型器官外照射剂量转换系数,对程序进行了正确性验证,和通用蒙卡程序MCNP5单核计算相比,加速效率在48~300倍。以南京放射源丢失事故人员物理剂量重建为例对该程序进行了实际应用,物理剂量重建计算结果和参考值、临床诊断结果相一致,与通用蒙卡程序MCNP5单核计算相比加速效率达到50倍以上,表明Gadep在事故剂量重建、放射诊断及治疗剂量评估等方面有一定的应用价值。

摘要：【目的】针对目前耐药基因检测通常需要依赖专业检测设施和设备,仍缺乏耐药基因快速检测方法这一问题,旨在建立一种基于成簇规律间隔的短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)的金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)mecA耐药基因快速检测方法。【方法】首先在mecA基因序列的保守区中设计筛选出灵敏度较高的重组酶介导链替换核酸扩增(recombinase aided amplification,RAA)引物和CRISPR RNA(CRISPR RNA,crRNA),通过结合消线法核酸检测试纸技术(easy-readout and sensitive enhanced,ERASE)建立针对mecA基因的检测方法,最后利用模拟样本及临床分离样本对建立的新方法与传统方法进行比较。【结果】成功筛选出了1组针对mecA耐药基因的高效扩增引物和crRNA,并建立了基于CRISPR-ERASE的mecA耐药基因高灵敏核酸检测方法,最低检出限为10 copies/μL,在32株临床分离的金黄色葡萄球菌中,该方法共检出24株mecA耐药基因阳性菌株,与药敏试验及荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测结果符合率为100%。【结论】建立了一种基于CRISPR-ERASE核酸检测试纸技术的简单、高灵敏的mecA耐药基因检测方法。

摘要：目的为进一步了解海南省三沙市南沙群岛岛礁生物多样性资源,丰富蠓类昆虫种类,对永暑礁蠓种类进行了调查,记述了中国南沙群岛永暑礁的新蠓种。方法蠓成虫标本于2021年11月采用诱虫灯法采集于永暑礁室外,浸泡保存于75%酒精后带回实验室,制片后检视其形态特征,根据体长、触须和外生殖器等特征进行鉴定,并命名和描述。结果记述了分布在中国南沙群岛永暑礁的蠓科毛蠓属2新种,即:双叶毛蠓新种Dasyhelea(Dasyhelea)binifolius Yu&Shi,***和隐藏毛蠓新种D.(D.)celatus Yu&Shi,***。结论本研究首次记述了南沙群岛永暑礁的毛蠓属2新种,目前尚未在该地发现吸血蠓。模式标本现保存于中国人民解放军疾病预防控制中心。

摘要：目的 探讨无人机在蚊虫标本采集中的应用,调查不同高度的蚊虫分布。方法 在天津某农场,于2021年8月下旬到9月上旬,通过无人机挂网飞行的方式捕虫,对比人工小时法和无人机捕获蚊虫效率,考察不同高度的蚊虫分布等。结果 无人机标本捕获效率(34.75只/10 min)高于人工小时法(3.38只/10 min),无人机携带的捕虫网在5.00 m高度采集的蚊虫数量最多,高度>12.00 m或风速>4.00 m/s时几乎无法采集到蚊虫。结论 无人机进行蚊虫标本采集,具有不限地形、不限生境、捕获效率高等优点,可作为蚊虫标本采集工具。蚊虫主要分布在低层空间,但是在无人机的风扇搅动下,蚊虫会上下翻飞,其结果可能与真实分布存在差异,需要进一步探讨。

摘要：建立生物安全风险监测预警体系对防范生物安全风险、保障生命健康、保护生物资源和生态环境具有重要意义。由于医院中传染病种类较多,空气中的尘埃颗粒物含有大量微生物,可以气溶胶的形式存在[1],若没有对空气中的微生物污染进行监测,可能会引起传染病交叉感染[2]。我国医院感染监测起步较晚,医院感染监测系统仍然存在缺陷,医院感染病例漏报率仍较高,医院感染爆发报告率低[3]。

摘要：目的研究设计一款新型驱蚊药效试验装置,采用小白鼠替代人体进行蚊虫叮咬试验,并扩大检测品种范围.方法依据《驱避剂室内药效试验及评价方法》(GB13917)等原理,综合分析不同种类驱避剂、驱避产品驱蚊原理和使用方法,设计一种新型驱蚊药效试验装置,对不同驱蚊产品、材料进行驱避药效试验观察,并与标准检测方法进行分析比较.结果新型驱蚊药效试验装置由一密闭方箱、内置一不锈钢纱笼,与另一方箱内纱笼之间用连接筒连接组成.对于涂抹型驱蚊剂,该装置检测结果和国家标准检测方法结果一致;对于驱蚊熏香类,该装置检测2~4 h保护率在98.35%以上,用蚊香药效国家标准方法检测,KT_(50)>8 min,药效属于不合格(蚊香);对驱蚊手镯、驱蚊草等材料,该装置可检测出驱蚊效果,2~8 h保护率为13.33%~38.33%,用驱避剂、蚊香等国家标准方法无法检测.结论该装置可替代人体进行驱避试验,避免蚊虫叮咬等风险,同时检测应用范围广、方法科学、使用简便.

摘要：生蔬中的农药残留会导致农药在人体内蓄积并产生危害,尤其是农药混合残留可能产生农药“鸡尾酒”效应,导致毒性效应叠加、增强或减弱。因此研究农药混合物的联合毒性效应及机制对食品安全风险评估具有重要意义。本研究以人神经瘤细胞母细胞(SK-N-SH细胞)为模型,以等毒性配比法设计联合细胞毒性实验,采用联合指数方法探讨多菌灵和苯醚甲环唑的联合细胞毒性。此外,采用析因设计探讨二者对SK-N-SH细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)生成的联合作用。结果显示,在不同效应水平,多菌灵和苯醚甲环唑对SK-N-SH细胞活力表现出不同的联合作用模式。当混合物的效应水平为0~50%时,多菌灵和苯醚甲环唑的毒性效应表现为拮抗作用;混合物的效应水平为50%~100%时,多菌灵和苯醚甲环唑表现为协同作用。此外,当苯醚甲环唑浓度较低时(16.88μmol·L^(-1)),二者对ROS的生成表现为拮抗作用;当苯醚甲环唑浓度较高时(22.08μmol·L^(-1)),二者对ROS的生成表现为协同作用。结果提示多菌灵和苯醚甲环唑具有联合神经毒性,且ROS生成的氧化应激机制在这二者的联合神经毒性中发挥作用。此研究结果为农药复合暴露对人类健康的风险提供实验依据。

摘要：目的 研究一种人工智能消毒机器人,实现对室内环境实施自动精准消毒。方法 基于智能云台的气溶胶空间喷雾、固定式紫外线/臭氧消毒、常量喷雾法结合气溶胶的自身消毒等功能设计机器人的不同智能模块,实现远程控制和自动运行驾驶模式,同时满足多因子消毒。结果 实现激光测量消毒场所空间体积,得到消毒实施喷雾参数的一种自动精准化作业决策系统及运载装置。该机器人具备自体消毒系统,最终实现室内多模式的精准消毒要求。结论 室内人工智能消毒机器人可满足室内表面、空气精准消毒要求,还可对特殊环境进行无人化紫外线自动消毒等作业。