摘要：鉴于丙型肝炎病毒(HCV)危害着人类健康,本研究拟用反转录环介导等温扩增(RT-LAMP)建立一种简易检测方法。收集并用FQ-PCR(金标准)检测临床样本。根据HCV保守5'非编码区设计4条通用引物,然后用Taq DNA聚合酶优化传统RT-LAMP体系,通过酶切和交叉实验以评价RT-LAMP的特异性,通过和反转录PCR(RT-PCR)同时检测倍比稀释的模板以评价RT-LAMP的灵敏度。同时判断钙黄绿素和羟基萘芬蓝(HNB)染色法是否与电泳法的结果相同。结果显示,Taq DNA聚合酶可提高扩增效率,RT-LAMP的特异性好,酶切片段与预期相一致(216bp)且只有HCV被扩增,灵敏度为10IU/tube,比RT-PCR高10倍。另外,两种染料和电泳法的检测结果相同。RT-LAMP和RT-PCR检测75例临床样本的一致性差(P0.05,Kappa=0.762)。综上所述,RT-LAMP简易、特异、灵敏,适用于基层医疗机构。

摘要：目的建立环介导等温扩增(LAMP)体系用于检测唾液和胃液中的幽门螺旋杆菌(Hp)及基因分型。方法收集临床Hp阳性标本,应用荧光定量PCR进行分型检测,即分为Ⅰ型和Ⅱ型。分别根据Hp,HpⅠ型设计LAMP引物并优化反应条件,通过LAMP检测验证这3套引物的特异性,并通过检测稀释后模板验证引物的灵敏度,同时加入钙黄绿素使产物显色,使Hp分型检测可视化。用LAMP方法检测收集的临床标本,计算Hp阳性率,并与荧光定量PCR法相比较。结果建立的LAMP体系特异性良好,对Hp、HpⅠ和HpⅡ型检测的灵敏度均为102 IU/ml。利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相一致。对临床标本进行Hp分型检测,HpⅠ、HpⅡ型LAMP结果与荧光定量PCR法比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LAMP对Hp的检测与分型均具有较高的特异性和灵敏度,且操作简便,在基层医院具有良好的应用前景。

摘要：为了提升对结核分枝杆菌(MTB)检测的实用性,本文开展了采用环介导等温扩增方法(LAMP)对MTB进行可视化检测的研究。首先,根据MTB 16S r DNA序列设计LAMP引物。然后,收集临床痰液样本并进行相应处理。为了评价LAMP的特异度和灵敏度,本文用电泳产物进行检测并用钙黄绿素进行可视化验证。最后,以细菌培养结果为金标准,用SPSS 17.0软件比较培养结果与LAMP的一致性。结果显示,特异度实验中无非特异扩增现象,灵敏度实验中的检测极限为10拷贝。另外,可视化产物检测方法和电泳后的灵敏性相一致。进一步进行临床实用性评价,灵敏性为94.47%,特异性为90%,与细菌培养无统计学差异,结果一致性较好(P>0.05)。综上,LAMP技术高效而可视,具有在设备匮乏的现场和基层医疗机构的应用前景。

摘要：利用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)对中国主要的丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型进行扩增。首先,收集临床采样标本,对其进行定量和定性。第二,分别根据HCV 1b和HCV 2a序列的5’非转录区(5’UTR)设计相应的RT-LAMP引物。第三,利用与非特异模板的交叉反应以评价各引物的特异性,利用内切酶酶切产物以进一步保证扩增准确。第四,利用倍比稀释的模板以评价各引物的灵敏性,并用依赖钙黄绿素/Mn2+的可视化方法与电泳结果比较。最后,利用RT-LAMP对所有采样标本进行HCV 1b和HCV 2a两组平行反应,SPSS统计学软件对其实用性初步评价。结果显示,所设计的RT-LAMP引物特异性好,HCV 1b和HCV 2a型产物大小均与预期相同。最低可检测的模板量为100IU/mL,且可视化染色方法电泳结果相一致。统计学软件比较扩增结果表明RT-LAMP与实时荧光定量PCR之间没有统计学差异(P>0.05)。综上,RT-LAMP设备简单,操作简便,具有在基层医疗机构的应用前景。

摘要：目的通过应用环介导等温扩增(LAMP)建立一种快速、简便的可视化检测儿童肠道腺病毒核酸的方法。方法登录GenBank网站下载腺病毒40和41基因型的六邻体序列,根据该区段的保守序列设计4条LAMP引物。将反应体系加入EP管,在恒温条件(65℃)扩增60min后,再以凝胶电泳和钙黄绿素染色评价LAMP法的特异性和灵敏度,并和PCR法的结果相比较。最后,同时用LAMP和PCR法对40份可疑临床样本进行检测,应用卡方检验进行统计学分析。结果 LAMP法能准确地使腺病毒40和41型得到扩增,酶切结果也正确,显示了LAMP法较好的特异性。LAMP的灵敏度比PCR高约10倍。经过对40份临床样本的检测,LAMP与PCR均没有发生非特异扩增,LAMP法和PCR法的一致性为92.5%(P>0.05)且LAMP法没有漏检阳性样本。另外,使用钙黄绿素染色的方法更好地显示了产物检测的可视性和简便性。结论该研究初步建立了快速、简便、可视化检测肠道腺病毒的LAMP技术,在基层医疗机构有一定的实用价值。

摘要：目的应用反转录环介导等温扩增技术(RT-LAMP)可视化检测丙型肝炎病毒(HCV)1b和2a基因型,为RTLAMP技术应用于现场或基层医院提供初步探索经验。方法首先,收集临床阳性样本并用荧光定量PCR分型检测,把样本基本分为1型和非1型。然后分别根据HCV 1b和2a基因型设计RT-LAMP引物并优化反应条件,通过互换模板实验验证这2套引物的特异性,并通过检测稀释的模板以验证引物的灵敏度。同时用钙黄绿素进行产物显色,使HCV分型检测可视化。最后用RT-LAMP方法检测临床样本,并计算阳性率,应用配对卡方检验比较RT-LAMP和荧光定量PCR的统计学差异。结果优化好的RT-LAMP体系的特异性好,对HCV 1b型的检测灵敏度为103 IU/mL,2a型的检测灵敏度为104 IU/mL。另外,利用钙黄绿素进行产物检测的效果和电泳结果相当。通过对临床样本分型检测,HCV 1b型样本的RTLAMP检测结果和荧光定量PCR差异无统计学意义(P>0.05),HCV 2a型样本的RT-LAMP检测结果和荧光定量PCR差异有统计学意义(P<0.05),但是未检出的样本中有2例为HCV 2b型。结论 RT-LAMP对HCV的可视化分型检测具有较好的特异性和灵敏度,操作简便,具有在现场或基层医院的应用前景。

摘要：目的:对中药络石藤化学成分及其抗风湿作用的研究进展进行综述。方法:查阅国内外最新研究文献,进行归纳、分析与总结。结果:络石藤是一味临床应用较频繁的抗风湿中药,疗效确切,化学成分研究和药理实验研究也取得了一些基础性成果,但其具体的抗风湿活性成分并未被阐明。结论:应用现代药物设计研究方法思路研究络石藤的抗风湿有效成分,将是阐明络石藤药效物质基础的一个可靠有效的手段,并能对抗风湿类新药的研发提供有意义的参考。

摘要：本文介绍了控 /缓释制剂生物等效性评价的方法、规范和研究进展 ,重点介绍试验设计、结果表达、统计学处理等方面 ;讨论了个体生物等效性。

摘要：目的通过应用反转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP）对甲型H1N1流感病毒进行基因检测，建立一种快速、简便的可视化核酸检测技术。方法先针对甲型H1N1流感病毒HA基因区段，设计2对RT-LAMP引物。通过检测不同病毒评估引物的特异性，通过检测倍比稀释的临床样本确定RT-LAMP的灵敏度。用羟基萘酚蓝（HNB）染料对产物进行可视化检测．同时用凝胶电泳进行结果验证。最后用RT-LAMP检测临床样本，使用卡方检验比较与TaqManPCR的一致性。结果RT-LAMP的引物特异性好，可准确地使甲型H1N1流感病毒扩增。通过对稀释模板的检测，得出RT-LAMP的灵敏度为2．5×10^3拷贝／ml。RT-LAMP扩增结果可通过HNB可视化判定，与凝胶电泳的效果相当。对RT-LAMP和TaqManPCR的显著性差异经统计学评价，可知二者一致性较好（P〉0．05）。结论本研究实现了可视化检测甲型H1N1流感病毒，具有更好的灵敏性，该技术在基层医疗机构有一定的实用价值。

摘要：目的建立环介导等温扩增(LAMP)方法,用于腺病毒7、14和55型感染检测。方法针对腺病毒7、14和55型Hexon区段设计4条特异性引物,建立LAMP预反应体系。然后对反应温度和时间进行优化;通过与PCR比较评估该方法的特异性和灵敏度,同时观察使用钙黄绿素染料的检测效果,最后对40例新兵鼻咽分泌物标本进行检测。结果优化的LAMP最适扩增温度为65℃,扩增时间为60min。建立的LAMP方法特异性好,只有腺病毒7、14和55型扩增阳性。LAMP可以使1︰1 000倍稀释的腺病毒DNA得到扩增,其灵敏度比PCR高10倍。同时用LAMP和PCR法对新兵腺病毒感染情况用SPSS软件进行比较,结果LAMP法与PCR法的一致性较差(Kappa=0.562,P0.05)。利用染料钙黄绿素进行可视化检测的效果和电泳方法相当。结论 LAMP法检测腺病毒7、14和55型感染优于PCR法,这种新方法也适用于基层医院实验室和流行区。