摘要：目的:设计人端粒酶逆转录酶(hTERT)的新型病毒样颗粒疫苗,并鉴定其表达蛋白的免疫原性和疫苗转染效率．方法:合成阳离子抗原肽K18P9,同时将人粒细胞、巨噬细胞集落刺激因子(hGM-CSF)和hTERT克隆入真核双表达载体pTCAE中,再将多肽和核酸疫苗结合于同一疫苗颗粒,并将其转染入真核细胞内.ELISA法和免疫印迹法检测hGM-CSF和hTERT的免疫原性,同时评价疫苗的转染效率．结果:酶切及测序结果证实已成功构建含hGM-CSF和 hTERT的载体pTGH,电镜等结果证实核酸被包装肽包裹形成病毒样颗粒,ELISA法和免疫印迹法证实疫苗在体外对真核细胞的转染效应以及hGM-CSF和hTERT 的免疫原性,与阳性对照DOTAP组比较,疫苗转染效率约可达78．5％．结论:成功构建了具有免疫原性的hTERT肽-核酸病毒样颗粒疫苗．

摘要：目前,病毒感染的诊断技术已从定性检测走向定量检测,这对进一步探讨感染量与病毒致病的关系及临床筛选抗病毒药物具有重要意义。本文就近年有关竞争性PCR的设计及应用的研究进展作一文献复习。

摘要：目的 :观察转化糖注射液对各种疾病病人血糖水平的影响 ,评价转化糖注射液临床应用的有效性及安全性。方法 :采用多中心临床试验设计 ,选用 18～ 6 5α病人共 139例 ,试验组 (70例 )静脉输注转化糖注射液 5 0 0mL·d- 1,对照组 (6 4例 )静脉输注葡萄糖注射液 5 0 0mL·d- 1,疗程皆为 3～ 5d(在此期间 ,2组病人皆不输注其他含糖制剂 )。结果 :转化糖组血糖波动小于葡萄糖组 (P 0 .0 5 ,试验前后血、尿常规 ,肝、肾功能 ,血尿酸均未出现与药物相关变化。结论 :转化糖注射液具有与葡萄糖注射液相当的安全性 。

摘要：目的构建正义和反义端粒酶 RNA 组分((human telomeraseRNA components,hTR)基因真核表达载体.方法用 Mlu Ⅰ和 Sal Ⅰ从 pGRN83质粒上切下约579 bp 的hTR cDNA 片段,分别定向连入 pcl-neo 的 Mlu Ⅰ/Sal Ⅰ和Mlu Ⅰ/Xho Ⅰ酶切位点上,即构建成了 hTR 的正反义表达载体,并经酶切鉴定和测序确认.结果经酶切鉴定和测序证明,所构建的正反义 hTR 真核表达载体与设计完全一致.结论成功构建了人端粒酶 RNA 的正反义真核表达载体,为进一步研究正反义 hTR 基因转染对胃癌细胞端粒酶及生物学行为的影响奠定了基础.

摘要：背景与目的:人活化素受体样激酶-1(activin receptor-like kinase-1,ALK1)可促进内皮细胞增殖,与肿瘤内血管生成密切相关。本研究采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制ALK1表达,观察抑制效果以及抑制ALK1表达后对人胃癌细胞增殖的影响。方法:设计3条靶向ALK1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),克隆到真核表达质粒pGenesil-1,转染人胃癌细胞株SGC-7901。分别采用Real-time PCR和Western blot技术检测胃癌细胞ALK1 mRNA及其蛋白表达的变化,并检测细胞周期及生长曲线。结果:与阴性对照相比,第3条ALK1干扰RNA在mRNA及蛋白水平均可明显下调ALK1基因表达,并抑制SGC-7901细胞增殖。结论:RNAi技术导致的ALK1表达下调并抑制胃癌细胞增殖,ALK1可作为胃癌抗肿瘤治疗的理想靶点。

摘要：目的:对MMSCs来源类肝细胞进行分子生物学鉴定. 方法:从人胎儿骨髓中分离MMSCs,在10 g/L Matrigel作基质,2.5 mmoL/L AZA预处理10-12 h,HGF 10 μg/L +FGF4 10 μg/L+HGM培养基中培养和诱导.收集诱导培养4,7,14,21,28 d时的细胞爬片,SABC免疫组化法DAB显色检测肝细胞早期标志AFP,CK19及早期转录因子GATA4,成熟肝细胞标志ALB,CK18,GST-π,肝细胞转录因子HNF1α;提取诱导分化10 dN第28 d细胞RNA 及蛋白质,设计AFP,CK19,ALB,CK18,CYP1B1,CYP286 引物,进行RT-PCR,观察在mRNA水平肝细胞标志的表达,采用Western blot检测CK18,AFP,ALB的表达量. 结果:未诱导培养的MMSCs中,有较少的细胞表达AFP, 未见其他肝脏特有的转录因子或者胞质蛋白标志.免疫组化显示在诱导早期可见较多细胞呈GATA4,AFP和CK19阳性表达,至诱导后期表达下降,而ALB,CK18,GST-π和肝细胞转录因子HNF1α阳性细胞比例逐渐上升.RT-PCR显示,未诱导的MMSCs仅可表达微弱的AFP mRNA,诱导早期可见AFP mRNA和CK19 mRNA表达,诱导后期未见扩增,而ALB,CK18,CYP1B1 mRNA早期和后期均可见表达,在诱导后期可见CYP286 mRNA表达,但很弱.Western blot检测显示诱导细胞中AFP,ALB和CK18 蛋白的表达趋势同基因表达类似.在65 ku和68 ku处诱导细胞组可见AFP和ALB目的条带,在45ku处诱导细胞组可见CK18目的条带.未诱导的细胞和诱导早期细胞中AFP有表达,后期未见.诱导早期和后期CK18和ALB均有表达,且后期增强. 结论:MMSCs向类肝细胞的横向分化是先分化为肝前体细胞,再分化为成熟肝细胞,在本实验诱导条件下可获得在复制及翻译各环节肝细胞标志阳性的类肝细胞.

摘要：基于活性肝细胞为主要生物成分的肝细胞治疗学已逐渐成为治疗肝衰竭及先天性肝脏代谢性疾病的重要手段,但其关键是获得理想的肝细胞材料.肝细胞永生化是解决肝细胞来源的重要途径之一,这一领域的研究进展较为迅速.目前已经建立的肝细胞株包括肿瘤源性肝细胞株、由正常肝细胞经胶原凝胶夹心培养系统培养后而获得的肝细胞株、由正常肝细胞经转染/转导而获得的肝细胞株,以及p53或p19基因敲除而建立的肝细胞株等.上述肝细胞株多由肝肿瘤细胞衍变而来或经病毒转导而获得,因此存在安全性之虑.另外,多数肝细胞株的分化功能与原代细胞相比有不同程度地下降.为克服上述缺陷,国内外学者开始采用可回复性永生化方法,其基本原理是先将永生化基因SV40T导入原代细胞以获得永生化细胞株,使其获得体外增生能力,然后再以特异性位点重组技术切除SV40T基因,使细胞株回复到永生化前的状态.这样,肝细胞株既具有了永生化特性,又可解决安全性与分化功能差的缺点. 从这一技术的发展现状及趋势看,进一步改善载体设计将是近期研究的热点。

摘要：目的探讨丙型肝炎患者保护性免疫缺陷的原因。方法根据HCVC区和NS4区基因序列设计并人工合成3条合成肽,采用抗原捕捉酶联免疫吸附试验检测HCV感染者血清中抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值,同时以正常人血清做对照。结果抗-HCV SP42,CP10和CP9抗体轻链的表达呈明显的偏斜;116例抗-HCV阳性者中113例(97.41％),抗-HCV IgG抗体轻链κ/λ比值偏高,所有病例追踪观察1a(其中11例抗-HCV阳性者随访2a);30例患者接受α-干扰素治疗,发现抗-HCV抗体κ/λ比值恒定不变。结论 HCV感染者抗-HCV抗体的产生不均匀性并呈稳定的克隆性。B细胞克隆优势化可能是HCV感染后机体保护性免疫缺陷的原因之一。

摘要：[目的]了解医院病人、护士和医生对护理质量重要程度认同的差异性,以便于改进护理质量评价标准,使之适应以病人为中心的护理质量管理。[方法]根据质量评价标准和现代护理涉及的内容从7个方面设计23个研究项目,每个项目分为5个等级,以问卷调查形式了解病人、护士和医生对每个项目重要程度的认同状况。[结果]医院病人、护士和医生对评价护理质量内容重要程度总体认同存在差异,表现出不同的护理质量观,有的项目各类人群也存在认同差异(P<0.05)。[结论]医院病人、护士和医生对护理质量重要程度认同的差异的确存在,应从病人的需求改进护理质量评价标准的内容和权重。

摘要：体温单是护理记录中的重要内容，在病人住院期间记录了病人的体温、脉搏、呼吸及其他重要情况。一直以来，需密切观察体温的病人，如医嘱为“每小时测体温”，其中是体温单上规定时间测得的体温照常填写，其他时间测得的体温则记录在护理记录单上。传染病的最常见的症状之一是发热，对于发热待查的病人，其体温的变化观察记录更显重要，如果体温单不能准确反映病人一天发热的过程，护士则无法提供具有法律依据的护理文书。在实际工作中，根据病人病情，随着病情变化应该随时测量病人的生命体征，