摘要：目的鼠/人源化抗人肝癌单链抗体(m/hscFv_(25))融合人突变型 TNFα(mTNFα)原核表达载体的构建及表达.方法用 Oligo 软件分析并设计人 mTNFα的5′及3′端引物,化学合成并用 PCR 方法扩增 mTNFα,经限制性内切酶酶切后,连接在原核表达载体 pGEX4T-1中的 m/hscFv_(25)之后,构建成pGEX4T-1/m/hscFv_(25)-mTNFα融合蛋白表达载体,转化大肠杆菌 JM109后,通过 IPTG 诱导进行目的蛋白的初步表达.结果经 DNA 电泳分析表明,mTNFα基因全长约460 bp,并通过酶切鉴定证明成功构建了抗人肝癌单链抗体融合 mTNFα的原核表达载体,融合蛋白产物经 SDS-PAGE 显示,相对分子质量(Mr)为68 000的蛋白谱带,与预期设计完全一致,光密度扫描结果表明,GST-mscFv_(25)-mTNFα和 GST-hscFv_(25)-mTNFα融合蛋白分别占菌体总蛋白的15%和12%,表达产物主要以不溶性包涵体形式存在.结论成功构建并表达了鼠/人源化抗人肝癌单链抗体融合人mTNFα的双功能抗体基因,并在原核细胞中获得较高水平的表达,为进一步研究 HCC 的治疗奠定了基础.