摘要：采用2×5因子试验设计[新城疫(ND)免疫分为免疫组和未免疫组,铅中毒按饮水中的醋酸铅浓度分为0mg/kg,50mg/kg,500mg/kg,1000mg/kg和2000mg/kg],将90只14日龄鹌鹑随机分配到各个试验组中,实行自由饮水和采食,研究铅中毒和新城疫免疫对黄羽鹌鹑免疫功能的影响。结果表明,ND免疫对注射植物血球凝集素(PHA)10h后的PHA指数无显著影响(P>0.05),但铅中毒可降低PHA指数(P0.05);ND免疫和铅中毒对试验5周(7周龄)鹌鹑法氏囊指数无显著影响(P>0.05);ND免疫对脾脏指数无显著影响(P>0.05),但铅中毒能显著降低脾脏指数(P<0.05),其中以1000mg/kg组脾脏指数最低。

摘要：用RT—PCR法从NDV Lasota疫苗株中扩增出HN基因，将其克隆到pGEM—T easy vector中，构建了重组质粒pT—HN．设计了1对引物，用PCR法扩增出HN蛋白主要抗原表位基因（442—1734bp共1239bp），将其连接到原核表达载体pET-28a（＋），构建重组质粒pET—HN．用IPTG诱导使其在大肠杆菌BL21（DE3）中表达．SDS—PAGE结果表明，NDV HN主要抗原表位基因在pET—HN中获得了高效融合表达，其表达蛋白的分子量为28kD．同时，通过试验摸索并确定了表达HN蛋白主要抗原表位基因的最佳诱导条件：IPTG终浓度为0．4mmol·L^-1，诱导时间为4h，温度为37℃．

摘要：禽腺病毒(fowl adenovirus,FAdV)是鸡群中常见的免疫抑制性病毒,其中Ⅰ群FAdV有12个血清型(FAdV1-8a,8b-FAdV11),这为Ⅰ群FAdV检测带来了挑战。为开发一种可以同时检测Ⅰ群FAdV的Digoxigenin标记核酸探针或者其组合,本研究针对Ⅰ群FAdV的hexon基因保守区域设计引物,分别以12个血清型的Ⅰ群FAdV参考毒株DNA为模板合成了12种Digoxigenin标记核酸探针,并将这12种核酸探针及其组合形成的多重探针共13种探针分别与同一杂交膜上的12种不同血清型Ⅰ群FAdV参考毒株的毒株核酸进行杂交,观察各探针或其组合能够识别的最大限度。结果显示,12种血清型对应的单一核酸探针能检测和识别的病毒类型及其灵敏度差异较大,而多重探针组合PM可以同时检测出所有12种血清型毒株并体现出最高灵敏度的优势。本研究建立了应用多重Digoxigenin标记探针组合在核酸斑点杂交检测中识别Ⅰ群FAdV核酸的新方法,为解决类似病毒高通量检测提供了新的思路。

摘要：虽然球虫激发宿主产生的保护性免疫应答机制已有很多相关研究,但是保护记忆性免疫应答机制这一关键点常常被忽视。高效保护记忆性免疫应答是球虫感染宿主和球虫病疫苗设计的基础。本研究对该领域50年的相关研究进行系统性回顾和分析,提出开发高效球虫疫苗的设想和评估候选球虫病疫苗产生高效免疫保护的新策略,该设想和新策略基于产生高效保护性记忆免疫应答的三大关键点,即产生免疫水平的阈值、效应部位以及时间。结果表明:1)球虫病活卵囊疫苗与球虫重组蛋白疫苗、DNA疫苗、以病毒或细菌为载体的球虫病活载体疫苗免疫鸡群激发宿主产生的免疫应答存在本质区别,活卵囊疫苗免疫过的鸡对球虫的感染处于“Primed”免疫状态(即免疫系统可快速高效地识别球虫百余个抗原,抵抗球虫再次感染的能力更高。),而非活卵囊疫苗对球虫的感染仍处于“Naive”状态(即免疫系统仅能识别特定的1个或几个球虫抗原,抵抗球虫再次感染的能力较弱。)。这也是目前研发的基于一个或几个抗原的球虫“死”疫苗效果不佳的根本原因。2)高效的保护性记忆免疫应答的主要机制是多种效应机制协同发挥作用,如肠道微环境中的组织常驻记忆细胞(Tissue resident memory cells,T_(RM))、循环的效应记忆细胞(Effector memory T cells,TEM)、中心记忆性T细胞(Central memory T cell,T_(CM)),尤其是T_(RM)的量和质起关键作用。在疫苗设计中可以将抗原靶向可激发宿主产生针对鸡球虫高效保护性记忆免疫应答的重要部位—肠道。3)抑制球虫早期裂殖生殖是记忆性免疫应答抵抗球虫感染最重要的特征,为评估高效球虫疫苗提供了新思路。综上,对鸡球虫感染过程中产生高效免疫保护的机制有清晰的认识和理解,是实现基于免疫学理论的球虫病科学防控的基础。

摘要：在动物细胞中，抑制非同源末端连接（Non-homologous end joining, NHEJ）修复途径，可以提高同源重组（Homologous recombination, HR）修复基因组双链断裂（Double-strand brakes, DSBs）的发生概率。为了提高绵羊胚胎成纤维细胞的 HR 效率，针对 NHEJ 修复途径中的关键因子 Lig4（DNA ligase 4）基因，本文设计合成4个具有靶向性的 siRNA（Small interfering RNA）。绵羊胚胎成纤维细胞经电转染导入 siRNA，通过实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和 Western blotting 检测，筛选出有效抑制 Lig4基因表达的2个 siRNA。应用质粒重连法检测HR 修复效率，将 I-SceⅠ酶线性化的 HR 质粒和 siRNA 共转染绵羊胚胎成纤维细胞，经72 h 培养及流式细胞仪检测，与对照组细胞比较，结果表明 HR 质粒重连效率提高了3~4倍。瞬间干扰 Lig4基因的表达可提高 HR质粒重连效率，为改善绵羊胚胎成纤维细胞基因打靶效率提供理论基础。

摘要：[目的]研究不同剂量野山杏总黄酮对三黄肉鸡屠宰性能的影响。[方法]采用单因素试验设计,将96羽1日龄雌性三黄肉鸡随机分为4组,每组24羽。于14日龄开始,野山杏总黄酮低、中、高剂量组肉鸡分别灌服50、100、200 mg/(kg·BW·d)的野山杏总黄酮,对照组肉鸡灌服生理盐水,试验期42 d。28、35、42日龄时每组分别选取8羽肉鸡进行屠宰试验,测定并比较相同日龄下各组肉鸡的屠宰性能指标。[结果]高剂量野山杏总黄酮可显著或极显著(P<0.05或P<0.01)提高28、35、42日龄肉鸡宰前体重,中剂量野山杏总黄酮可极显著(P<0.01)提高35日龄肉鸡宰前体重。高剂量野山杏总黄酮分别显著(P<0.05)和极显著(P<0.01)提高35日龄和42日龄肉鸡屠宰率。中、高剂量野山杏总黄酮极显著(P<0.01)提高28日龄肉鸡半净膛率。低剂量野山杏总黄酮可极显著(P<0.01)提高28日龄肉鸡全净膛率,显著(P<0.05)提高35日龄肉鸡全净膛率;中剂量野山杏总黄酮可极显著(P<0.01)提高35日龄肉鸡全净膛率;低、中、高剂量野山杏总黄酮可极显著(P<0.01)提高42日龄肉鸡全净膛率。低、中、高剂量野山杏总黄酮可显著或极显著(P<0.05或P<0.01)降低35、42日龄肉鸡皮下脂肪厚度。高剂量野山杏总黄酮可显著(P<0.05)降低28日龄肉鸡肌间脂肪宽度,极显著(P<0.01)降低35日龄肉鸡肌间脂肪宽度;低、中、高剂量野山杏总黄酮可极显著(P<0.01)降低42日龄肉鸡肌间脂肪宽度。低剂量野山杏总黄酮可显著(P<0.05)降低28、42日龄肉鸡腹脂率,中剂量野山杏总黄酮可显著(P<0.05)降低28、35、42日龄肉鸡腹脂率,高剂量野山杏总黄酮可极显著(P<0.01)降低42日龄肉鸡腹脂率。高剂量野山杏总黄酮可显著或极显著(P<0.05或P<0.01)提高35、42日龄肉鸡胸肌率,可显著或极显著(P<0.05或P<0.01)提高28、35、42日龄肉鸡腿肌率。[结论]灌服不同剂量的野山杏总黄酮能够明显改善三黄肉鸡的屠宰性能。

摘要：利用原核表达系统表达水貂肠炎细小病毒(MEV)VP2衣壳蛋白,以制备抗VP2超免疫血清。根据VP2的基因序列,设计1对特异性引物,以MEV全基因组重组质粒p B-MEV-L为模板,利用PCR技术扩增出MEV VP2片段,并定向克隆到pET-32a载体中,经酶切与序列测定,证明成功构建了VP2基因原核表达质粒pET-MEV-VP2。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后实现了高效表达。免疫印迹试验表明,获得的重组蛋白具有较好的反应原性。以该蛋白为免疫原免疫新西兰兔,制备抗血清,四免后用ELISA方法检测其效价达到1∶1 024。免疫荧光试验证明,获得的抗体具有良好的结合活性。为MEV的病原生物学研究奠定基础。

摘要：马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)的密码子使用频率与哺乳动物间存在着明显差异。为此,对马传染性贫血病毒驴白细胞弱毒疫苗株(DLA-EIAV)囊膜全长基因按照哺乳动物优势密码子的使用原则进行了重新设计和合成,并以此为基础通过重叠延伸PCR、限制酶切等方法得到结合型和分泌型囊膜基因,将其插入含有鸡beta-actin/兔beta-globin复合启动子(AG)的高效表达载体pCAGGS中,构建了EIAV驴白细胞弱毒疫苗株结合型和分泌型囊膜基因的DNA疫苗质粒pCAGGS-opti-bou-env、pCAGGS- opti-sec-env。将构建的质粒纯化后分别转染293T细胞,以间接免疫荧光和Western blot方法检测转染48 h后细胞及上清中囊膜蛋白的表达。结果显示,两种表达质粒均可正确表达EIAV囊膜蛋白,与相对应未优化的表达载体pCAGGS-wt-bou-env和pCAGGS-wt-sec—env相比,密码子优化的基因体外瞬时表达水平有极为显著的提高,而且蛋白表达部位也与预期的结果符合。这一结果为EIAV囊膜蛋白的单抗制备、表位鉴定、免疫试验、新疫苗的开发等奠定了基础。

摘要：【目的】研究头孢氨苄片受试制剂和参比制剂在比格犬体内的生物等效性。【方法】采用双周期和双序列交叉设计,将22只健康比格犬随机分成2组,按30 mg/kg BW分别单剂量口服头孢氨苄片受试制剂Trolevis300和参比制剂Rilexine300,于给药前(0 h)和给药后0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、12、17和24 h从臂头静脉采血。对超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)方法进行特异性、线性、检测限、准确度、精密度、稳定性等方法学考察。利用建立好的UPLC-MS/MS方法测定血浆中的药物浓度,并用WinNonlin^(TM) 8.1软件对药代动力学参数进行分析计算。【结果】方法学结果显示,在100~5000 ng/mL浓度范围内相关性良好,相关系数(R^(2))≥0.99,标准曲线方程为y=10.6828x-176.481;高、中、低3个浓度的相对回收率平均值分别为105.63%、104.35%和102.40%;日内和日间变异系数均<15%;检测限为50 ng/mL,定量限为100 ng/mL。药代动力学结果显示,参比制剂组和受试制剂组药代动力学参数如下:T_(max)分别为(1.77±0.55)和(2.70±4.68)h;C_(max)分别为(28.09±5.09)和(26.82±7.94)μg/mL;T_(1/2)分别为(3.39±1.43)和(3.12±1.05)h;AUC_(0-t)分别为(121.81±25.80)和(116.34±36.30)μg·h/mL。受试制剂与参比制剂药时曲线相似,且受试制剂与参比制剂C_(max)、AUC_(0-t)和AUC_(0-∞)几何均数的比值分别为99.51%、99.27%和99.30%,其90%CI均在80.00%~125.00%之间。【结论】本试验建立的UPLC-MS/MS方法准确、可靠,可用于头孢氨苄的浓度测定,且头孢氨苄受试制剂与参比制剂是等效的,临床上均可用于相关疾病的治疗。

摘要：为了研究黑素皮质素受体1(MC1R)基因与家鸡、家鸽羽色的相关关系,根据Gen Bank上原鸡MC1R基因序列,利用在线引物设计软件Primer3(V.0.4.0)在编码区设计1对引物PE,试验以家鸽和边鸡DNA为模板,PCR扩增,测序,分别获得长度为303 bp和335 bp的基因片段。结果表明:家鸽与原鸡MC1R基因核苷酸序列存在10处变异,边鸡与原鸡存在3处变异,其序列相似性分别为95.71%、99.10%。二级结构分析结果表明,家鸽和边鸡α螺旋、β折叠、无规则卷曲所占比例分别为47.92%、31.25%、20.83%,64.80%、21.90%、13.30%,均有2个跨膜区。针对2个物种氨基酸序列同源与变异预测其三级结构,结果表明,MC1R基因可能是表达禽类羽色的主效基因。