摘要：本研究旨在建立可同时检测犬源牛犬细小病毒(CBoV)和犬圆环病毒(CCV)的二联PCR检测方法,并对两种病毒病当前的流行情况进行监测和调查。分别将已发表的CBoV和CCV基因组序列进行同源性比对,选择高同源区段,应用Primer Primier 5计算机软件设计并合成了2对特异性扩增引物,目的片段大小分别为170 bp(CBoV)和239 bp(CCV)。分别提取CBoV和CCV重组质粒作为模板,进行二联PCR扩增试验。结果表明,本研究成功建立了可同时检测CBoV和CCV的二联PCR检测方法。并对其重复性、特异性和灵敏度进行验证,二联PCR最低检测限度为3.0 pg总DNA,而对犬细小病毒2型、犬瘟热病毒和犬副流感病毒的PCR检测结果均为阴性。对送检的30份病料进行检测,其中,4份为CBoV阳性,3份为CCV阳性,未检测到混合感染。综上所述,本研究所建立的CBoV和CCV二联PCR诊断方法特异性高,敏感性好,可用于临床犬腹泻病的流行病学调查。

摘要：副猪嗜血杆菌病(Haemophilus parasuis)是规模化猪场的重要细菌性疾病之一。对已发表的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子量大约为41 kDa,利用基因工程的方法将该基因片段定向克隆至表达载体pGEX-6p-1中,诱导表达后的分子量约为67 kDa。该研究为制备亚单位疫苗和诊断试剂奠定了基础。

摘要：为了能够快速、准确定量小鼠Bax基因的mRNA,构建了小鼠Bax基因的标准品质粒和标准曲线。根据GenBank中小鼠基因编码区保守序列,设计特异性引物,从N2a细胞中提取总RNA,利用RTPCR技术扩增该基因162bp的核苷酸片段,经纯化、连接和转化后,提取质粒并进行酶切、测序鉴定;将阳性重组质粒10倍递减稀释作为标准模板,通过SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,建立了Bax标准曲线及直线回归方程。结果表明产物熔解曲线峰值单一,引物特异性高;标准曲线相关系数R2=0.999,表明线性关系好。本试验成功构建了目的基因Bax的标准品质粒和标准曲线。

摘要：为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。

摘要：sag基因家族是制备基因工程疫苗重要的候选基因。本研究通过在毕赤酵母Pichiapastoris中表达柔嫩艾美耳球虫Eimeriatenella表面抗原基因sag10,来探讨sag10表达后的生物学活性。本文首先提取柔嫩艾美耳球虫北京株第2代裂殖子总RNA,根据GenBank报道序列(AJ586552)设计引物,应用RT-PCR技术扩增得到鸡球虫表面抗原sag10基因。然后将sag10与真核表达载体pPIC9K连接,构建了pDQ052分泌型真核表达质粒,并转化毕赤酵母GS115,利用G418抗性筛选多拷贝重组菌株,进行优化表达。SDS-PAGE和Westernblot检测表达结果,在43kDa处有明显的免疫印迹条带,表明目的蛋白得到表达,而且能被特异性抗体所识别,说明表达的SAG10蛋白具有生物学活性。

摘要：为探讨复方丁氨丙磷溶液的抗冷应激作用及其作用机理,将 45 只 1 日龄肉雏随机分成 3 组,每组 15 只,分别给予生理盐水和不同剂量的复方丁氨丙磷溶液。于第14日龄开始冷暴露,在低温条件下继续饲养 2 周,并观察和检测各项设计指标。结果表明,复方丁氨丙磷溶液能显著降低冷应激肉雏血清肌酸磷酸激酶和碱性磷酸酶活性;显著提高血糖和血清甲状腺素含量,同时降低皮质醇含量;但对血清乳酸脱氢酶活性、胰岛素含量和T3/T4值无显著影响。

摘要：采用盆栽实验法,对在滨海盐渍土条件下生长的羊草进行了有机质施肥,以了解有机质对碱解氮和羊草生长的影响。试验采取3因素2水平组合设计,在土壤中添加不同有机质(秸秆粉、微生物菌肥和鸡粪),对羊草的出苗率、鲜重、碱解氮含量进行了分析比较。结果表明:与对照相比,施加有机质可以增加羊草的出苗率和鲜重。添加单一有机质对羊草鲜重、出苗率的影响效果均为正相关,影响效果由大至小均为秸秆粉>鸡粪>微生物菌肥。不同改良物质及其各种组合处理之间的影响效果有显著差异,说明不同类型的有机质对羊草生长的影响较大。土壤碱解氮含量在单独添加单一有机质时无显著差异,但组合后添加差异显著。