摘要：本文旨在构建有效抑制朊蛋白(Prion protein,PrP)表达的重组质粒,并以此为工具控制PrP表达,从而探讨PrP对细胞SOD活性的影响。设计并化学合成1对含有发夹结构的寡核苷酸片段(shPrP),退火后与表达载体pG-super(Hairpin siRNA expressing vector)定向连接,构建重组质粒pG-super-shPrP。对重组子进行PCR鉴定,测序正确后,脂质体法转染C6细胞,采用实时荧光定量RT-PCR检测PrP mRNA的表达水平,以验证pG-super-shPrP的抑制效率;结果表明:重组质粒pG-super-shPrP构建成功,且显著降低C6细胞PrP mRNA表达(P<0.05),抑制效率为34.2%。利用pG-super、pG-super-shPrP分别转染C6细胞,并检测细胞SOD总活性及SOD表达水平,探讨PrP对细胞SOD活性的影响及其作用机制,结果表明PrP促进细胞SOD的活性(P<0.01),但对细胞SOD的表达量无影响,即PrP对SOD活性的促进作用与SOD1的表达量无关。本研究在成功构建了PrP的RNA干扰表达质粒的基础上,利用此质粒,在细胞水平上揭示了PrP对细胞SOD活性的促进作用。

摘要：本文成功克隆了金黄地鼠Dpl(PrP-like protein doppel,Doppel)基因,并采用实时荧光定量PCR法对其组织特异性表达进行了研究。根据已发表家鼠Dpl基因序列设计引物,采用PCR直接扩增金黄地鼠(Hamster)的Dpl基因CDs区,序列测定和分析表明金黄地鼠的Dpl基因CDs区全长537 bp,编码178个氨基酸的前体蛋白,不存在基因多态性。经基因序列对比分析,金黄地鼠与其他10种属哺乳动物Dpl基因有较高同源性,均为70.8%以上,且与鼠科Dpl序列的同源性最高(86%)。实时定量PCR结果表明,在所检测组织中,Dpl mRNA在睾丸表达量最高,其次为脾脏、心脏、骨髓和脑,其在肝脏、肺脏、肾脏和肌肉中的表达低于检测水平;成年动物与未成年动物相比,在睾丸组织的表达量,成年鼠显著高于未成年鼠;在成年鼠脑组织检测不到Dpl mRNA的表达。本研究对金黄地鼠Dpl基因序列进行分析测定,并对其在不同组织的生理表达进行了定量,以期为其功能的进一步研究提供基础数据。