摘要：为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。

摘要：研究旨在探讨播期和叶面肥喷施对不同玉米品种产量和籽粒矿质元素含量的影响,于2019年5—10月在山东省临沂市设置玉米大田试验,采用三因素裂区试验设计,主处理为5个玉米播期(5月31日、6月6日、6月13日、6月21日和6月28日,分别记作B1~B5),裂区为‘登海605’和‘郑单309’2个玉米品种,裂区-裂区为5种叶面肥喷施处理,分别为去离子水(Water)、氯化钙(Ca)、硫酸锌(Zn)、谷氨酰胺(N)和谷氨酰胺与硫酸锌混合溶液(N+Zn)。于玉米成熟期进行样品采集与分析。结果表明:‘登海605’和‘郑单309’均在B3播期时(6月13日)产量最高,最高产量平均分别为11.9、10.9 t/hm^(2),主要由于该播期下穗粒数最高,表明B3播期是该区域最佳播期,而早播和晚播均会显著降低2个玉米品种的产量。对于‘登海605’,叶面喷施N溶液可略提高早播条件下(B1和B2播期)籽粒产量,而叶面喷施Ca、Zn、N和N+Zn溶液可提高晚播条件下(B4和B5播期)籽粒产量,其中叶面喷施N+Zn溶液的增产效果最好,在B4和B5播期下籽粒产量较对照分别增加45.5%和16.0%。对于‘郑单309’,叶面喷施N或Zn溶液可提高B4播期籽粒产量,而喷施Ca溶液可提高B5播期的籽粒产量。另外,叶面喷施Zn或N+Zn溶液可显著提高‘登海605’和‘郑单309’在B2和B3播期的籽粒Zn浓度。叶面喷施Zn溶液可以显著提高B2和B3播期下‘郑单309’的籽粒Fe、Mn、Cu、N和Mg浓度。以上研究结果为协同实现玉米高产优质栽培和肥料利用效率的提高提供理论依据。

摘要：目的建立一个以CHO定点整合系统为基础的高通量抗体筛选平台,筛选获得抗VEGF高亲和力突变体抗体。方法设计并构建了基于CHO细胞定点整合系统的通用minibody展示载体,将3株亲和力已知的抗VEGF抗体(A6,A63,A657)和1个抗VEGF轻链抗体库分别呈现在CHO细胞的表面,通过Western印迹、Bia-core3000、流式细胞分析等对该展示系统进行验证和评价,并通过流式细胞分选技术对抗体库进行了细胞筛选。结果成功实现了抗VEGF抗体在CHO细胞表面的展示,流式细胞分析抗体的亲和力与Biacore测定全抗体亲和力结果一致;通过筛选获得3株抗VEGF高亲和力突变体抗体。结论建立了基于CHO定点整合技术的新型抗体库展示系统,为抗体的亲和力成熟、分子改造等突变库的构建和筛选提供了新的技术支持。

摘要：为了研究黑素皮质素受体1(MC1R)基因与家鸡、家鸽羽色的相关关系,根据Gen Bank上原鸡MC1R基因序列,利用在线引物设计软件Primer3(V.0.4.0)在编码区设计1对引物PE,试验以家鸽和边鸡DNA为模板,PCR扩增,测序,分别获得长度为303 bp和335 bp的基因片段。结果表明:家鸽与原鸡MC1R基因核苷酸序列存在10处变异,边鸡与原鸡存在3处变异,其序列相似性分别为95.71%、99.10%。二级结构分析结果表明,家鸽和边鸡α螺旋、β折叠、无规则卷曲所占比例分别为47.92%、31.25%、20.83%,64.80%、21.90%、13.30%,均有2个跨膜区。针对2个物种氨基酸序列同源与变异预测其三级结构,结果表明,MC1R基因可能是表达禽类羽色的主效基因。

摘要：受全球工业化和气候变化的影响,具有固着生长特性的植物面临着多种非生物逆境的威胁,而种子在各类非生物逆境胁迫下的顺利萌发,对植物的繁殖与地理分布、作物的产量与质量等极其重要。随着植物分子生物学研究的不断深入,非生物逆境协迫下种子萌发的调控机制研究取得了诸多进展。本文重点综述了在盐胁迫、极端温度(高温和低温)胁迫、干旱胁迫、荫蔽胁迫、渗透胁迫和淹涝胁迫等非生物逆境胁迫下,植物通过介导激素、活性氧及能量代谢通路调控种子萌发的分子机制,并讨论了三大通路之间的互作,展望了未来该领域的研究热点,以期总结种子萌发过程中响应非生物逆境胁迫的主要调节模块/基因功能,为农业生产及环境改造中的育种设计提供参考。

摘要：沙门氏菌是一种常见的食源性致病菌,由沙门氏菌引起的食源性疾病位居榜首。荧光定量聚合酶链式反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)是一种准确、可靠的用于核酸定量的扩增技术,常用的荧光探针法使得扩增体系复杂、引物合成成本高。为了简化FQ-PCR的扩增体系,减少标记基团的修饰,拟通过单标记的荧光自淬灭引物实现新型荧光定量聚合酶链式反应(innovative FQ-PCR,IFQ-PCR)用于模板DNA的定量检测。根据沙门氏菌特异性基因设计单标记发卡型荧光自淬灭引物,并将其应用于FQ-PCR实现了沙门氏菌的检测。设计的自淬灭引物探针一体化,只需单标记,无需额外探针或染料的加入,简化了扩增体系,降低了检测成本;同时引物的发卡结构提高了检测特异性。在最优的引物浓度(0.4μmol/L)下,沙门氏菌在10^(1)-10^(5) CFU/mL的浓度范围内其浓度的对数值与循环阈值(cycle threshold,CT)值之间呈现良好的线性关系,R^(2)高达0.99,检测限低至2 CFU/mL,并且在1.5 h内即可完成扩增检测,方法的稳定性符合要求。因此,一种基于荧光自淬灭引物的IFQPCR方法被开发出来并实现了沙门氏菌的简便、快速、灵敏、特异、低成本的检测。

摘要：以苹果属山荆子为试材,根据Nramp1同源序列保守区设计两对简并引物进行PCR,结合RACE技术获得了3'末端和5'末端片段,将3段片段序列拼接,根据拼接序列获取了MbNramp1基因全长cDNA序列。MbNramp1cDNA长2090bp,包含一个长度为1656bp的开放阅读框,编码551个氨基酸的多肽,分子量约为59.7kD。该基因编码的蛋白是一个膜蛋白,76%以上的氨基酸为非极性。MbNRAMP1与二价铁、锰转运蛋白NRAMP基因家族保守性很高,具有NRAMP1金属转运蛋白家族基因典型特征,即含有推断的N–端相连的糖基化位点、10个预测的跨膜结构域(TMs),在第6和第7跨膜结构域间有一个相同的转运基序(CTM)。低铁胁迫时MbNramp1在根中表达量增加。

摘要：实现有效生物多样性保护的关键在于提升生物多样性丰富的人口密集区的保护效率。北京人口密集且生物多样性丰富,存在3类具有生态保护功能的区划——自然保护区、生态保护红线和限制建设线。上述区域可视为生态保护潜力区。本文以在北京有分布的30种受胁鸟类为主要对象,探讨现有生态保护潜力区对这些物种栖息地的覆盖程度,并对如何改善上述受胁鸟类栖息地的保护状况进行了建议。根据物种对栖息地的选择,基于高分辨率卫星解译的土地利用类型图,利用最大熵模型(MaxEnt)掩膜栖息地分布图,得到各受胁鸟类的预测空间分布。叠加这些分布获得北京受胁鸟类丰富度分布格局并进行验证。依据物种丰富度高低,将受胁鸟类栖息地划分为一至四级(最重要的栖息地是一级栖息地,以此类推)。同时,依据地表覆盖类型和人类活动强度高低将北京市域划分为城市建成区、乡村生境区和自然生境区。分别计算3类保护潜力区对上述3类区域以及四级栖息地的覆盖面积比例。结果表明:(1)95.64%的一级关键栖息地和86.32%的二级关键栖息地分布在乡村生境区,但仅有0.69%和15.15%的乡村生境区分别被自然保护区和生态保护红线覆盖;(2)未受到自然保护区和生态保护红线覆盖的一、二级关键栖息地主要为水域和沼泽地等湿地、高覆盖度草地和部分耕地,以及含有较高比例水体的大型城市绿地。基于以上结果,我们建议至少在一定区域内试行如下保护措施:(1)严格保护湿地及其周边的高覆盖度草地,确保面积不减少;(2)维持基本农田规模和粮食种植模式;(3)将乡村生境区位于河道附近的水域、沼泽地、高覆盖草地和灌木林纳入生态保护红线范围;(4)在公园绿地中划定生物多样性保护区;(5)优化平原地区林地结构。以上措施将使北京的受胁鸟类栖息地得到更好保护,为中国东部人口密集区生物多样性保护提供示范。

摘要：为进一步探索波形蛋白(vimentin)调控绒山羊绒毛生长的作用机制,以内蒙古遗传种子资源阿尔巴斯白绒山羊皮肤中的毛囊组织为材料,利用PCR技术和酵母双杂交技术对根据GenBank中山羊的vimentin蛋白序列,运用蛋白质互作在线软件预测和液相色谱质谱联用采集免疫共沉淀数据筛选出肌动蛋白(ACTB)和vimentin进行基因引物设计、克隆、酵母表达载体构建和蛋白互作鉴定。结果显示:成功克隆出绒山羊vimentin基因CDS区序列的长度为1 401 bp, ACTB基因CDS区序列的长度为1 128 bp;构建了酵母表达载体;试验组共转化pGBKT7-vimentin与pGADT7-ACTB的Y2HGold菌株在二缺板SD/-Trp/-Leu/X-α-GaL/AbA培养基和四缺板SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-GaL/AbA培养基上,均能生长出淡蓝色菌落,而在对照组共转化pGBKT7空质粒与pGADT7-ACTB重组质粒的二缺板SD/-Trp/-Leu/X-α-GaL/AbA培养基上长出白色菌落,表明共转化的pGBKT7-vimentin与pGADT-ACTB重组质粒的下游报告基因Lac被激活,共转化pGBKT7空质粒与pGADT7-ACTB重组质粒的下游报告基因Lac未被激活。提示:vimentin与ACTB两种蛋白间存在相互作用。

摘要：本研究针对猪育种中重点考虑的窝产活仔猪数(NBA)、达100 kg体重日增重(ADG)、饲料利用率(FCR)、达100 kg体重的背膘厚(BF)、肌内脂肪含量(IMF)5个性状,利用连锁平衡(linkage equilibrium,LE)、连锁不平衡(linkage disequilibri-um,LD)标记和直接标记(direct marker,DR)3种类型的分子遗传标记,设计了3个规模不同的基础群,母猪数分别为100、200、300头,公猪数都为10头,基础群个体间无亲缘关系,育种群实施闭锁繁育。用Monte Carlo方法模拟了MAS的5个世代选择试验。育种值估计采用标准BLUP(Standard BLUP,SBLUP)模型(此育种值作为对照)、QBLUP模型(使用DR标记)、MBLUP模型(使用LD和LE标记)。结果表明,利用DR标记在各种情况下都比利用LD和LE标记获得的选择效率高;5个性状中,MAS对低遗传力、限性性状NBA的选择效率最高;当性状的QTL方差占遗传方差基本相同时,中等遗传力性状FCR的选择效率比高遗传力性状BF的更高;当性状的遗传力差异不大时,QTL方差占遗传方差比例大的性状FCR的选择效率比QTL方差占遗传方差比例小的性状ADG的更高。当利用QBLUP模型时,MAS对NBA的选择效率最高,ADG的选择效率最低。