摘要：设计1对特异性引物对羊布鲁菌16M总DNA进行外膜蛋白omp10的PCR扩增,得到了一个大小为330bp的目的基因片段(去掉17个氨基酸编码的信号肽),测序证实它与国外报道的羊布鲁菌omp10基因完全一致。将其克隆到表达载体PET-30a中,经酶切、PCR扩增和测序分析,表明重组表达载体构建成功。将此重组质粒转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达,该基因以包涵体的形式在大肠埃希菌中表达,经过包涵体的变性、复性和亲和层析纯化,成功获得大小为14.2ku的融合蛋白,与理论推测的蛋白分子质量一致;Westernblot和间接ELISA试验证明,纯化之后的OMP10重组蛋白可以被布鲁菌阳性血清识别。

摘要：以流产奶牛肝组织块内提取的基因组DNA为模板,根据GenBank数据库中的衣原体ompA基因序列设计2对引物,采用套式PCR进行扩增.PCR产物经纯化后连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后,进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:ompA基因的开放阅读框架全长1 170 bp,编码由389个氨基酸组成的多肽,理论分子质量为41.9 ku,等电点为7.61;SMART分析表明,ompA基因编码的氨基酸中,1-22位氨基酸为信号肽序列,另外还有7个保守的半胱氨酸残基形成二硫键;BLAST同源性分析表明,ompA基因的核苷酸序列与已发表的衣原体ompA序列的同源性均达到了98%以上.