摘要：[目的]本试验分别采用硒代蛋氨酸法和改进体外三步法评估3种过瘤胃蛋氨酸(A、B、C)的生物利用率,并对两种方法所得结果进行相关性分析和回归分析,旨在探究两种方法之间的关系。[方法](1)硒代蛋氨酸法:选用33头健康泌乳奶牛,按照随机区组试验设计分为3组,试验期共32 d,分为3个阶段,其中前7 d为预饲期(第0阶段),第8~22天为第1阶段,随后10 d为第2阶段。第0阶段奶牛仅饲喂基础饲粮,第1阶段所有奶牛均按照0.3 mg Se/kg DM补充硒酵母,第2阶段继续补充相同剂量的硒酵母,同时依据相同有效蛋氨酸的量(25 g/d),3组奶牛分别补充过瘤胃蛋氨酸A(33.3 g/d, A组)、B(29.4 g/d, B组)和C(56.82 g/d, C组)。在第22和32天采集奶样,用于硒、蛋氨酸和氮浓度的测定,以硒浓度/蛋氨酸浓度(硒浓度/氮浓度)比值的变化评估3种过瘤胃蛋氨酸的生物利用率。(2)改进体外三步法:选用3头安装瘤胃瘘管的泌乳奶牛,3种过瘤胃蛋氨酸各设置2个平行,3个重复,通过瘤胃孵育、体外模拟胃-小肠消化测定干物质(DM)和粗蛋白质(CP)的过瘤胃率和小肠消化率以评估其生物利用率。(3)分析两种方法之间的相关性并建立回归方程。[结果]硒代蛋氨酸法结果表明,过瘤胃蛋氨酸A基于牛奶硒浓度/蛋氨酸浓度和牛奶硒浓度/氮浓度比值变化计算的生物利用率分别为:83.02%和81.42%,过瘤胃蛋氨酸B的分别为:72.94%和72.47%,过瘤胃蛋氨酸C的分别为:51.77%和50.98%。改进体外三步法结果显示,过瘤胃蛋氨酸A、B和C的生物利用率分别为86.87%、75.47%和59.56%。比较两种方法的测定结果,二者无显著差异(P>0.05),且呈极显著正相关(r=0.867~0.964,P<0.01)。[结论]在本试验条件下,硒代蛋氨酸法和改进体外三步法均能用于3种过瘤胃蛋氨酸的生物利用率的测定,且两种方法间存在较强的正相关关系。

摘要：本试验旨在研究全收粪法与回肠食糜法测定肉鸭内源氨基酸损失、饲粮标准氨基酸消化率的差异及其可加性,为选择更合适的肉鸭饲粮氨基酸效价评定方法提供参考。试验选用48只20周龄雄性北京鸭,随机分为2组:全收粪组和取回肠食糜组,每组采用单因素完全随机区组设计,包括4个饲粮处理:以玉米和豆粕分别为唯一蛋白质源配制的玉米饲粮和豆粕饲粮、玉米-豆粕型全价饲粮以及1种无氮饲粮,饲粮中均添加0.5%二氧化钛(TiO_(2))作为指示剂,每个处理6个重复,每个重复1只鸭。采集经肉鸭消化后的粪便或食糜样品,全收粪组通过差量法和指示剂法2种方式、取回肠食糜组通过指示剂法计算得到饲粮标准氨基酸消化率。结果表明:1)通过全收粪-指示剂法测定的无氮饲粮下肉鸭苯丙氨酸、苏氨酸、缬氨酸及总氨基酸的内源损失均显著低于回肠食糜法(P0.05)。3)单样本t检验表明,回肠食糜法测定的玉米-豆粕型饲粮的可消化氨基酸含量的实测值与计算值间均无显著差异(P>0.05),全收粪-差量法和全收粪-指示剂法测定的玉米-豆粕型饲粮的总可消化氨基酸含量的实测值均显著小于计算值(P<0.05)。由此可见,全收粪法和回肠食糜法测定的饲粮标准氨基酸消化率具有可比性,但回肠食糜法测得的饲粮标准氨基酸消化率的可加性更好。

摘要：旨在探讨仿生消化法估测生长猪饲料原料消化能(DE)、代谢能(ME)和净能(NE)的准确性和可加性,为快速获得生长猪饲料的有效能值提供参考。采用单因素完全随机设计,以生长猪仿生消化法测定12个能量饲料、9个蛋白质饲料,以及由上述21个饲料原料配制的17个饲粮的酶水解物能值(EHGE),每个处理5个重复,每个重复1根消化管。通过EHGE、粗蛋白(CP)和酸性洗涤纤维(ADF)估测DE、ME及NE值。比较饲料原料有效能(DE、ME、NE)估测值与GB/T 39235-2020中同本研究同名的17个饲料原料的能量利用率乘以总能(GE)实测值得出的体内有效能值的差异及相关性,以验证仿生消化法估测饲料有效能的准确性。根据饲料原料的有效能估测值计算饲粮有效能加权值,并根据饲粮EHGE估测有效能的数学模型获得饲粮的有效能值,比较两者的差异以验证仿生消化法估测饲料有效能值的可加性。结果表明,采用GB/T 39235-2020计算的17个饲料原料的DE、ME、NE对EHGE结合CP、ADF估测的有效能值线性回归模型的决定系数(R2)分别为0.774,0.778和0.870。回归诊断分析发现,米糠、小麦麸和玉米胚芽粕偏离了其他14个饲料原料样品体内值与估测值的线性关系■。剔除上述3个样品后,GB/T 39235-2020计算的体内有效能对估测值线性回归的决定系数高于0.93。17个试验饲粮的EHGE实测值对加权计算值,DE、ME和NE的估测值对加权计算值的线性回归与Y=X重叠(R2>0.95,P<0.01)。上述结果表明,仿生消化法可以满意地估测14个饲料样品的有效能值,但低估了米糠和小麦麸的有效能值,却高估了玉米胚芽粕的DE和ME。仿生消化法测定的EHGE及通过EHGE估测的DE、ME、NE均具有良好的可加性。

摘要：【背景】作为降解木聚糖的核心酶种,木聚糖酶可以有效促进木质纤维素的消化水解,在动物养殖领域应用广泛。来源于嗜热细菌贝斯其热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor bescii)的GH10家族木聚糖酶Cb Xyn10C最适温度为85℃,在80℃条件下具有良好的热稳定性,具有饲料工业应用潜力。【目的】为满足饲料制粒尤其是水产饲料加工过程的工艺要求,进一步提高木聚糖酶Cb Xyn10C的热稳定性并阐明其耐热机理。【方法】以Cb Xyn10C晶体结构为基础,采用刚性氨基酸引入、疏水作用网络重排2种策略对其热稳定性进行理性设计,获得在100℃条件下比活提高的单点突变体后,通过有益突变位点叠加策略进一步提升酶的热稳定性,最后采用分子动力学模拟技术分析其热稳定性提高的分子机制。【结果】共获得了4个稳定性提高的单点突变体A45P、T69P、F309V和A325P,其中突变体A45P效果最优。随着在A45P基础上另外3个突变位点的叠加,酶的热稳定性在不损失酶活的前提下得到了逐步提升。获得的四点突变体A45P/F309V/A325P/T69P的耐热性最好,其最适反应温度和熔解温度Tm值较野生型分别提高了5℃和6.8℃。分子动力学模拟技术分析发现4个位点的突变引入了新的氢键作用力且优化了疏水作用网络,进而导致酶的结构构象更加稳定。【结论】本研究不仅提高了木聚糖酶在饲料工业中的应用价值,而且对基于酶蛋白结构的稳定性分子改造提供了理论支持。

摘要：本研究旨在研究白羽肉鸡对不同来源干白酒糟的代谢能并建立其估测模型。采用2×11完全随机设计,其中肉鸡饲养阶段设2个阶段,分别为11~14日龄和25~28日龄;试验饲粮设11个饲粮处理,分别为基础饲粮和10个干白酒糟饲粮。在肉鸡11~14日龄,每个试验饲粮处理6个重复,每个重复8只鸡;在肉鸡25~28日龄,每个试验饲粮处理6个重复,每个重复6只鸡。采用全收粪法,以重复为试验单元收集全部排泄物,测定试验饲粮的代谢能,并计算干白酒糟的代谢能。分析干白酒糟的化学成分与代谢能的相关性,并采用逐步回归法建立干白酒糟表观代谢能(AME)和氮校正表观代谢能(AME n)的预测模型。结果表明:1)干白酒糟的粗纤维(CF)含量高(≥20.10%),代谢能低(AME为2.96~6.70 MJ/kg DM),且肉鸡在11~14日龄和25~28日龄对同一个白酒糟样品的代谢能无显著差异(P>0.05)。2)肉鸡在11~14日龄对干白酒糟的AME(r=-0.689,P<0.05)和AME_(n)(r=-0.688,P<0.05)与CF含量呈负相关。肉鸡在25~28日龄对干白酒糟的AME与CF含量呈负相关(r=-0.726,P<0.05);AME_(n)与粗蛋白质(CP)含量呈正相关(r=0.640,P<0.05),与CF(r=-0.776,P<0.05)和酸性洗涤纤维(ADF)含量(r=-0.655,P<0.05)呈负相关。3)肉鸡在11~14日龄对干白酒糟代谢能的估测模型为:AME(MJ/kg DM)=9.52-0.158×CF(%DM)(R^(2)=0.474,RSD=0.84 MJ/kg DM,P=0.028);AME n(MJ/kg DM)=9.12-0.155×CF(%DM)(R^(2)=0.474,RSD=0.82 MJ/kg DM,P=0.028);肉鸡在25~28日龄对干白酒糟代谢能的估测模型为:AME(MJ/kg DM)=-4.43+0.758×总能(GE)(MJ/kg DM)-0.179×CF(%DM)(R^(2)=0.773,RSD=0.62 MJ/kg DM,P=0.006);AME_(n)(MJ/kg DM)=-2.81+0.652×GE(MJ/kg DM)-0.176×CF(%DM)(R^(2)=0.819,RSD=0.51 MJ/kg DM,P=0.008)。由此可见,干白酒糟CF含量是估测肉鸡在11~14日龄时对代谢能最重要的估测因子,CF含量和GE是估测肉鸡在25~28日龄时代谢能的主要估测因子。

摘要：基于CRISPR-Cas系统的新型基因检测技术对核酸序列碱基突变检测分析具有独特的优势,但目前对单个碱基突变检测过程中的灵敏性和特异性研究较少。为此,本研究针对小尾寒羊中具有单碱基突变的多羔基因FecB进行研究,探究CRISPR-Cas系统对其检测的灵敏性和特异性。试验以小尾寒羊个体作为试验动物,提取基因组DNA,通过PCR扩增BB、++、B+型的基因序列为底物。基于Cas核酸酶的体外定点内切酶活性,针对FecB基因BB型基因序列设计了3种Cas9核酸酶sgRNA和1种Cas12a核酸酶crRNA,利用CRISPRCas9和CRISPR-Cas12a系统对不同基因型目标序列进行酶切检验,并探究Cas核酸酶的切割性能。结果表明:3种基因型的靶DNA均被切割为250 bp和100 bp 2个片段;Cas核酸酶切割性能检测结果显示,缩短酶切反应时间对提高Cas核酸酶切割特异性没有影响,降低Cas核酸酶和sgRNA浓度影响切割效率,但是不能有效改善Cas核酸酶的切割特异性,对区分FecB基因BB、++、B+基因型没有影响。本研究试验结果表明Cas核酸酶具有较高的切割稳定性和切割灵敏性,但其特异性是复杂的,受多种因素影响,且sgRNA/crRNA与靶DNA的互补配对有一定的容错性,存在单碱基错配不影响Cas核酸酶的切割活性,不能有效区分绵羊FecB基因型。本研究揭示了影响Cas核酸酶切割特异性的多重因素,为后续优化CRISPR-Cas系统中核酸酶和sgRNA/crRNA设计提供了理论基础,有助于提高基因组编辑的特异性和效率。

摘要：本试验旨在研究黄羽肉鸡的品种和生长期对5种饲料原料代谢能(ME)的影响。采用单因素完全随机试验设计,设4个处理水平,分别为T1:快速型黄羽肉鸡(黄脚麻鸡)-生长前期;T2:快速型黄羽肉鸡-生长中后期;T3:慢速型黄羽肉鸡(雪山草鸡)-生长前期;T4:慢速型黄羽肉鸡-生长中后期,每个处理6个重复,每个重复4只鸡。选择26和47日龄的黄脚麻鸡以及33和61日龄的雪山草鸡各144只,通过全收集排泄物法测定玉米-大豆粕基础饲粮及5种试验饲粮(玉米饲粮、小麦饲粮、大豆粕饲粮、花生粕饲粮、玉米蛋白粉饲粮)的表观代谢能(AME)、氮校正表观代谢能(AMEn)及粗蛋白质(CP)代谢率,并计算5种饲料原料(玉米、小麦、大豆粕、花生粕、玉米蛋白粉)的ME(包括AME和AMEn)以及能量代谢率(ME/GE,包括AME/GE和AMEn/GE)。结果显示:快速型黄羽肉鸡对基础饲粮和5种试验饲粮的AME和AMEn均显著低于慢速型黄羽肉鸡(P0.05);慢速型黄羽肉鸡生长中后期对玉米饲粮的AME和AMEn显著高于生长前期(P0.05)。快速型黄羽肉鸡生长中后期对大豆粕的ME/GE和ME显著高于生长前期(P0.05)。慢速型黄羽肉鸡的生长期对5种饲料原料的ME/GE和ME均无显著性影响(P>0.05)。上述结果表明,快速型黄羽肉鸡对5种试验饲粮和4种饲料原料的ME显著低于慢速型黄羽肉鸡,但2个品种肉鸡的生长期对大部分试验饲粮和饲料原料的ME无显著性影响。

摘要：本试验旨在以不同来源的玉米、高粱原料为试验材料,利用单胃动物仿生消化系统(SDS)测定玉米和高粱原料的酶水解物能值(EHGE),并结合前期研究测定的鸡表观代谢能(AME)和真代谢能(TME),建立基于EHGE的AME及TME预测模型。本试验采用单因素完全随机设计,利用SDS分别测定5种不同来源的玉米原料和5种不同来源的高粱原料的体外干物质消化率(IVDMD)、体外总能消化率(IVGED)及EHGE。本试验参照的鸡AME和TME值为前期使用同批次原料,以健康体成熟的海兰褐公鸡通过自由采食法结合全收粪法测定所得。结果表明:1)不同来源玉米的IVDMD、IVGED和EHGE存在显著差异(P<0.05),其中2号玉米的IVDMD、IVGED和EHGE分别为75.12%、80.89%和15.19 MJ/kg DM,显著高于1号玉米(P<0.05)。2)不同来源高粱的IVDMD、IVGED和EHGE存在显著差异(P<0.05),其中5号高粱的IVDMD、IVGED和EHGE最高,分别为79.28%、85.15%和15.73 MJ/kg DM,而2号高粱的IVDMD、IVGED和EHGE最低,分别为55.93%、58.28%和10.72 MJ/kg DM。3)高粱的EHGE与AME和TME之间存在显著的正相关(P<0.05),玉米的EHGE与AME和TME之间的相关系数均为0.80。4)基于EHGE建立的玉米和高粱AME预测模型分别为:AME=7.62+0.57×EHGE[R^(2)=0.64,相对标准偏差(RSD)=0.11,P=0.11]、AME=10.03+0.31×EHGE(R^(2)=0.80,RSD=0.38,P=0.04);基于EHGE建立的玉米和高粱的TME预测模型分别为:TME=7.58+0.58×EHGE(R^(2)=0.64,RSD=0.11,P=0.10)、TME=9.98+0.33×EHGE(R2=0.89,RSD=0.28,P=0.02)。由此可见,不同来源的玉米和高粱的EHGE差异明显,在本试验条件下高粱原料的EHGE与AME和TME之间存在较强的相关关系,使用SDS对高粱原料的AME和TME有更好的预测性。

摘要：本试验旨在探讨猪小肠不同肠段消化环境的变异规律及与饲粮标准回肠氨基酸消化率间的相关性,为猪饲料氨基酸效价快速评定技术的开发提供数据支撑。试验选用18头初始体重为(21.6±3.5)kg的“杜×长×大”三元杂交去势公猪,随机分为3组,每组6头猪,分别在十二指肠末端、空-回中段、回肠末端安装T型瘘管;每组猪内部采用3×3拉丁方设计,3种饲粮(以玉米、豆粕和小麦麸分别为唯一蛋白源配制3种半纯合饲粮)处理,进行3期试验,每期试验包括5 d预饲期、3 d食糜通过时间测定期、2 d食糜收集期和2 d恢复期。测定各段肠液中的pH、离子浓度、消化酶活性及食糜通过时间,分析肠段及饲粮对消化环境的影响,并对饲粮的标准回肠氨基酸消化率与小肠液消化环境参数进行相关性分析。结果表明:1)肠段和饲粮对肠液K^(+)、Cl^(-)浓度和糜蛋白酶活性有显著交互作用(P0.05);3)饲喂玉米饲粮条件下,回肠末端肠液pH、Na^(+)和K^(+)浓度、食糜通过时间和3种消化酶活性与16种氨基酸的标准回肠消化率无显著相关性(r≤0.68,P>0.10);饲喂豆粕饲粮条件下,淀粉酶活性与谷氨酸的标准回肠消化率有显著负相关性(r=0.86,P<0.05);饲喂小麦麸饲粮条件下,Na^(+)浓度与脯氨酸以及食糜通过时间与蛋氨酸、组氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸的标准回肠消化率呈显著正相关(r≥0.87,P<0.05)。综上,生长猪肠段及饲粮对小肠液消化环境有显著影响且有交互作用,pH、离子浓度和消化酶活性与16种氨基酸的标准回肠消化率之间相关性较弱,但食糜通过时间会影响小麦麸饲粮蛋白质的消化。

摘要：铜离子作为奶牛生长发育阶段的必需金属元素发挥着极为重要作用,其缺乏或过量都会影响奶牛生理健康及养殖场经济效益,因此实时快速检测铜离子对于调节饲料中含铜添加剂具有重要意义。荧光生物传感器具有高灵敏度、高选择性、实时监测、易操作、低成本、大规模生产等优点,非常适合奶牛养殖场现场快速检测。本试验旨在将对铜离子选择性和灵敏性高的脱氧核酶作为生物敏感材料,设计在脱氧核酶的5'端和特异性底物链的3'端分别标记标荧光染料Cy5和猝灭剂BHQ3,制备荧光生物传感器,对生物敏感材料浓度与pH环境进行优化,并对钙、镁、锌等金属离子进行特异性检测。当铜离子存在时,铜离子与脱氧核酶特异性结合,进而切割特异性底物链的rA位点,导致Cy5重新暴露,荧光信号增强。通过试验表明,该方法构建的荧光生物传感器可以在pH 6.0~6.5对1~1000 nmol/L的铜离子具有良好的线性关系,最低检测限为0.67 nmol/L,该方法可快速检测奶牛血清铜离子。