摘要：本研究旨在比较泌乳期与干乳期水牛(Bubalus bubalis)差异血清生化指标及差异血清代谢物的组成,探讨血清生化指标与代谢物的相互关联,进一步了解水牛营养代谢过程的调控机制。选取泌乳期(泌乳第100~200天)健康水牛9头和干乳期(停乳后第30~60天)健康水牛9头,每头牛采血清样本两份,一份用生化分析仪进行20项指标检测;另一份用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)检测分析水牛血清中内源性代谢物。在生化指标检测结果中,泌乳期的谷草转氨酶/谷丙转氨酶(P1),这些代谢产物共富集到8条显著不同的代谢途径,分别是D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,色氨酸代谢,卟啉和叶绿素代谢,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,组氨酸代谢,不饱和脂肪酸的生物合成,以及氮代谢(P<0.05)。这些结果说明在泌乳期时,水牛吸收的营养物质主要用于参与多种氨基酸的合成及脂肪酸的合成与利用。

摘要：为探讨不同采卵季节、供体牛年龄和连续采卵时间3个因素对水牛活体采卵效果的影响,本实验选择3~12岁、体重400~700 kg的尼里拉菲水牛52头(其中3~7岁40头、8~12岁12头),根据单因子完全随机试验设计进行分组,分别观察不同采卵季节、供体牛年龄、连续采卵3个月以下(包含3个月)和3~9个月时间对活体采卵效果的影响。结果表明:冬季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均高于春季(P<0.05)和夏季(P<0.01),且夏季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均低于其他季节(P<0.01);3~7岁牛的头均可用卵母细胞数比8~12岁牛的多1.78枚(P<0.05);活体连续采卵时间在3个月以下(包含3个月)的卵母细胞可用率比连续采卵3~9个月的多8.03(P<0.01)。可见,一年四季都可进行水牛活体采卵,但秋、冬季进行活体采卵较为适宜;3~7岁年龄段牛做供体的活体采卵效果更佳;卵母细胞可用率会随着连续采卵时间延长而明显下降,建议同一批牛连续采卵不超3个月。

摘要：为了探讨不同添加剂和混合比对象草和甘蔗梢混合青贮发酵品质的影响,试验采用两因素试验设计,将象草和甘蔗梢按鲜重比为100∶0、75∶25、50∶50、25∶75和0∶100混合,并分别进行添加乳酸菌(LAB)和甲酸(FA)及无添加(C,对照)处理,每个处理5个重复,采用小规模发酵法,在室温避光条件下发酵30 d后测定混合青贮的发酵品质和营养成分。结果表明:不同混合比例及不同添加剂处理pH值、乳酸、乙酸、氨态氮(NH_(3)-N)、干物质、粗蛋白和有机物含量表现出显著或极显著的交互作用(P<0.05或P<0.01)。与象草单一青贮相比,混合青贮的pH值、乙酸、丁酸、NH_(3)-N和粗蛋白含量均显著降低(P<0.05),干物质和有机物含量均显著增加(P<0.05),在象草和甘蔗梢混合比例为25∶75时pH值、NH_(3)-N含量较低,乳酸、有机物含量较高;在不同添加剂处理方面,与无添加处理相比,FA处理的pH值、乳酸、乙酸和NH_(3)-N含量均显著降低(P<0.05),粗蛋白和有机物含量均显著提高(P<0.05)。说明象草和甘蔗梢在混合比例为25∶75及添加甲酸时青贮的发酵品质最优。

摘要：为了检测水牛乳中常见污染菌种假单胞菌,根据荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、莓实假单胞菌、隆德假单胞菌gyrB、carA基因设计4对特异性引物,经过反应条件的优化,结合特异性、灵敏性和人工污染试验,建立水牛乳中4种常见假单胞菌PCR检测方法。结果表明,该方法能扩增荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、莓实假单胞菌、隆德假单胞菌245bp、241bp、106bp、284bp特异性片段,纯细菌DNA最低检测量分别为310.4×10^(-4)、198.0×10^(-5)、192.8×10^(-4)、225.3×10^(-6)ng/μL,可应用于水牛乳中荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、莓实假单胞菌、隆德假单胞菌的快速检测。

摘要：在单因素实验的基础上,选取胶原蛋白添加量、蔗糖添加量、接种量为自变量,感官评分为响应值,利用Box-Behnken中心组合设计原理和响应面分析法,对胶原蛋白水牛乳酸奶制备工艺进行优化。结果表明,最佳工艺条件为胶原蛋白的添加量为2.0%,蔗糖添加量为8%,接种量为0.0067%,发酵温度42℃,感官评分可达到93分。

摘要：针对大肠杆菌O157:H7型菌株的志贺祥毒素Stx I和Ⅱ基因的特异序列设计并合成两对引物,确定了大小为350 bp和262 bp的检测引物都具有较强的特异性。其中采用Stx I引物结合PCR技术可直接检测水牛乳中大肠杆菌O157:H7,灵敏度高,检出限为8.58×103m L^(-1),总的检测时间可控制在24 h内可完成,使得水牛乳中的大肠杆菌O157:H7的检测能够快速、准确、灵敏的进行。

摘要：以大肠杆菌O157:H7的志贺氏氏毒素Stx I基因保守序列设计特异性引物,并进行PCR扩增,采用地高辛标记扩增的DNA片段以制备探针。用DNA探针对纯菌种大肠杆菌O157:H7和对照组菌株进行斑点杂交检测,结果表明:大肠杆菌O157:H7的Stx I基因探针对纯菌种大肠杆菌O157:H7DNA产生较强的阳性反应,而与福氏志贺氏氏菌、枯草芽孢杆菌、单增李斯特氏菌、大肠埃希氏菌和伤寒沙门氏菌DNA等均无反应,表明该Stx I的DNA探针特异性较强。用该探针对人工污染水牛乳进行检测,成功检出大肠杆菌O157:H7,最低检出限为8.58×102 cfu/m L,可应用于水牛乳中大肠杆菌O157:H7的快速检测。

摘要：为进一步保护和开发中国本地水牛和国外引进水牛的遗传资源,建立快速区分鉴别本地和引进水牛品种的方法。设计57条随机扩增多态性(randomly amplified polymorphic DNA,RAPD)引物,对本地沼泽型水牛和国外引进的河流型(摩拉,尼里拉菲和地中海)水牛之间的遗传差异进行了调查。以128头水牛DNA样本为模板,通过PCR扩增从57条RAPD引物中筛选并优化反应条件。实验结果显示,筛选得到了5条可用于区分本地沼泽型水牛与引进河流型水牛的引物(OPG6,OPG7,S11,S40和S1013),建立了RAPD鉴别区分沼泽与河流水牛的方法。本实验的结果为中国水牛的杂交改良、良种培育和本地水牛种质资源的保护等工作提供了理论和实验依据。

摘要：【目的】克隆沼泽型水牛VASA基因5′侧翼序列,对启动子进行生物信息学分析及转录活性检测,为后续水牛繁殖性能的分子机理研究奠定基础。【方法】根据GenBank已公布的河流型水牛(Bubalus bubalis)的VASA5′侧翼序列,经过同源比对,设计PCR引物。以沼泽型水牛血液基因组为模板扩增VASA基因5′侧翼序列并进行测序和生物信息学分析。将扩增的VASA基因5′侧翼片段插入pEGFP-1多克隆位点处,构建pVASA-EGFP-1载体。载体经脂质体转染HEK-293T和CHO细胞系,分析其转录活性。【结果】成功克隆沼泽型水牛VASA 5′侧翼序列及部分CDS区序列,共3 081bp,同源性分析表明,沼泽型水牛VASA基因5′侧翼序列与河流型水牛、黄牛、绵羊、山羊、小鼠和人的相似性分别为99%,96%,93%,95%,90%和79%。对其5′侧翼序列2 000bp进行启动子预测及转录因子结合位点预测,发现在其翻译起始位点上游-635--586处存在TATA box,启动子区存在Nobox、Stat1、Stat3、Stat4、Stat5a、Stat5b、Stat6、Gata3、Smad2、Smad3和Smad4等反式作用因子结合位点,其中Stat家族基因在VASA启动子区存在多个结合位点,且同一位点又存在多个Stats基因结合的情况。水牛VASA启动子能启动EGFP在HEK-293T细胞中的表达,但非常微弱;能启动EGFP在CHO细胞中表达,且启动活性与CMV启动子相似。【结论】成功克隆了沼泽型水牛VASA基因启动子,分析了其启动子序列特征并成功验证其组织特异性和转录活性。

摘要：凝乳酸度影响酪蛋白胶束中的钙含量,导致影响从原料奶到干酪的转移率。为了研究适合于水牛奶Mozzarella干酪生产的凝乳酸度,最大限度减少原料奶钙的损失,以凝乳酸度为试验考察因素、试验批次和不同干酪槽为辅助试验因素,设计3×3拉丁方试验方案,凝乳酸度设置pH值为6.40,6.20和6.00三个水平,研究其对原料奶中的钙转移到干酪的比率的影响。结果表明,采用pH值≥6.20的酸度凝乳,可以使干酪获得更高的钙转移率,而不影响其他主要化学成分的转移率及成品率。