摘要：本研究参考黄牛甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)基因序列设计引物,运用PCR扩增技术对水牛PTH基因进行克隆,并用生物信息学方法对序列进行分析。结果显示,成功克隆了水牛PTH基因完整编码区序列(CDS)348bp,可编码115个氨基酸。该基因编码区序列与黄牛、猪、马、山羊、绵羊和骆驼的同源性分别为99%、93%、91%、97%、96%和92%,表明PTH基因在不同物种间高度保守。系统进化树分析表明,水牛与黄牛PTH基因亲缘关系最近。此外,在水牛PTH基因CDS上共发现了3个碱基突变,其中两个属于同义突变,一个属于错义突变。氨基酸序列分析表明,该蛋白属于碱性、亲水、稳定型蛋白质,其分子式为C_(570)H_(941)N_(167)O_(164)S_8,分子质量为13.01ku。二级结构分析显示,水牛PTH蛋白以α-螺旋和无规则卷曲为主,与三级结构预测结果相一致。亚细胞定位分析显示,水牛PTH蛋白分布在细胞质(26.1%)、线粒体(21.7%)、细胞外(包括细胞壁)(17.4%)、内质网(13.0%)、细胞核(8.7%)、高尔基体(4.3%)和其他部位(8.7%),推测PTH蛋白可能在运输、结合及细胞被膜等方面发挥信号转导和转录调控作用。

摘要：锌指核酸酶是一种人工合成的融合蛋白,由特异性识别靶DNA的锌指蛋白结构域连接非特异性的Fok I切割结构域构造而成,能够在预定的DNA靶位点引起DNA双链中断,随后依靠非同源末端连接和同源重组修复两种途径修饰该位点。近些年来,该技术已广泛的应用于基因转变、基因修饰和基因治疗等方面的研究。本文将简要介绍锌指核酸酶结构与原理,重点对锌指核酸酶的设计和应用进行了回顾与展望。

摘要：试验旨在对水牛甲状旁腺素1受体(parathyroid hormone 1receptor,PTH1R)基因CDS区进行克隆,并对所获序列进行生物信息学分析,以期丰富水牛PTH1R基因研究的基础数据。提取水牛基因组DNA,以牛PTH1R基因为参考序列(GenBank登录号:NM-001075332.1),应用Primer Premier 5.0软件设计引物序列,运用PCR扩增及测序获得水牛完整CDS区序列,使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA、PSORTⅡPrediction等在线分析软件分析PTH1R的一级结构、二级结构、三级结构与理化性质,并进行同源性分析及构建系统进化树。结果显示,试验成功克隆了水牛PTH1R基因完整编码序列,该序列长为2 283bp,CDS区长1 770bp,序列已提交GenBank,登录号:MF380401,可编码589个氨基酸。PTH1R基因CDS区核苷酸序列与黄牛、猪、马、山羊、绵羊和骆驼同源性比对结果显示,其同源性分别为99.4%、93.2%、93.5%、95.3%、98.1%和93.9%,物种之间同源性较高,进化树分析结果与其亲缘关系远近一致,表明水牛PTH1R基因编码区在进化过程中比较保守。蛋白理化性质分析显示,水牛PTH1R蛋白分子式为C2996H4616N792O823S30,分子质量为65 860.22u,半衰期为30h,理论等电点(pI)为8.37,水溶液在280nm处的消光系数为117 770,肽链N端为M(Met),不稳定系数为43.36,属于碱性不稳定蛋白。脂肪系数为88.61,总平均亲水性为0.007,该蛋白属于不可溶性蛋白。二级结构分析显示,水牛PTH1R基因蛋白中包含有218个α-螺旋、114个延伸链、44个β-转角、213个无规则卷曲,与三级结构预测结果相一致。综上所述,PTH1R基因编码区在长期生物进化过程中具有较强的保守性,PTH1R基因的成功克隆及分析为进一步揭示其遗传特性提供了理论依据。

摘要：本试验旨在研究硝酸钠调控水牛瘤胃甲烷生成对脂肪酸生物氢化途径的影响。选取3头体重约为(650±50)kg、安装永久性瘤胃瘘管的水牛作为瘤胃液供体动物,通过体外批次培养,设计发酵底物的精粗比为40∶60,试验设4个组,每组5个重复,每组各添加0.25 mg/mL的α-亚麻酸,硝酸钠添加水平分别为0(对照)、1、2、3 mg/mL。分别培养3、6、9、12、24 h时测定产气量和甲烷产量,在培养24 h结束后测定体外发酵参数和脂肪酸含量。结果表明:①添加硝酸钠显著降低了瘤胃培养液24 h的总产气量、甲烷(CH4)含量和甲烷/总产气量的比例(P0.05);添加硝酸钠组瘤胃液乙酸浓度差异不显著(P>0.05),但丙酸、丁酸、异丁酸、戊酸和异戊酸浓度显著低于对照组(P0.05);添加1 mg/mL硝酸钠组瘤胃液C18∶3n3、C18∶2n6c和C18∶1n9c含量均高于对照组,差异不显著(P>0.05)。由此可见,体外添加硝酸钠显著降低了瘤胃液总产气量和甲烷含量,pH和NH3-N含量显著升高,TVFA含量降低,通过显著减少丙酸含量而升高乙酸/丙酸;添加1 mg/mL硝酸钠可显著提高瘤胃液共轭亚油酸(CLA)和UFA含量,且在抑制甲烷产生的同时能够降低不饱和脂肪酸的生物氢化程度。

摘要：本试验旨在研究夏季补饲半胱胺和烟酸铬对水牛泌乳性能、抗氧化性能、瘤胃发酵参数和微生物多样性的影响。选取体重[(615±21)kg]、胎次(3~5胎)和产奶量(5~6 kg/d)相近的健康泌乳中期尼里-拉菲奶水牛20头,采用单因素随机区组设计分为4组(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ组),每组5头。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮;Ⅱ组、Ⅲ组、Ⅳ组为试验组,其中Ⅱ组饲喂基础饲粮+22.5 g/(d·头)半胱胺,Ⅲ组饲喂基础饲粮+24 mg/(d·头)铬(烟酸铬形式,下同),Ⅳ组饲喂基础饲粮+22.5 g/(d·头)半胱胺+24 mg/(d·头)铬。试验在2019年7—8月开展,预试期1周,正试期4周。结果显示:1)补饲烟酸铬和半胱胺对水牛体表温度和呼吸频率均无显著影响(P>0.05);与Ⅰ组比较,Ⅳ组的直肠温度显著降低(P0.05)。5)Ⅳ组乳中C12∶0、C14∶0、C16∶0、C18∶2(顺-9,反-11)、C20∶3n3含量显著低于Ⅰ组(P0.05);Ⅱ组和Ⅳ组血清丙二醛含量显著低于Ⅰ组(P<0.05),总抗氧化能力显著低于Ⅳ组(P<0.05)。Ⅱ组和Ⅳ组血清生长激素含量显著高于Ⅰ组(P<0.05);Ⅲ组血清雌二醇含量显著高于Ⅰ组和Ⅱ组(P<0.05)。Ⅳ组血清甲状腺素含量显著高于Ⅰ组(P<0.05);Ⅲ组血清谷草转氨酶活性较Ⅰ组显著提高(P<0.05)。7)补饲烟酸铬和半胱胺均能显著提高水牛瘤胃液细菌数量(P<0.05);Ⅱ组水牛瘤胃液产甲烷菌数量较Ⅰ组显著提高(P<0.05)。Ⅱ和Ⅲ组瘤胃液拟杆菌门的相对丰度较Ⅰ组有所提高,而厚壁菌门的相对丰度较Ⅰ组降低。综上可知,夏季同时补饲半胱胺和烟酸铬提高了水牛的干物质采食量,改善了养分表观消化率、泌乳性能、瘤胃发酵参数和微生物组成,进而缓解了夏季热应激对水牛机体造成的不良影响。

摘要：为探讨不同采卵季节、供体牛年龄和连续采卵时间3个因素对水牛活体采卵效果的影响,本实验选择3~12岁、体重400~700 kg的尼里拉菲水牛52头(其中3~7岁40头、8~12岁12头),根据单因子完全随机试验设计进行分组,分别观察不同采卵季节、供体牛年龄、连续采卵3个月以下(包含3个月)和3~9个月时间对活体采卵效果的影响。结果表明:冬季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均高于春季(P<0.05)和夏季(P<0.01),且夏季的头均卵母细胞数、头均可用卵母细胞数均低于其他季节(P<0.01);3~7岁牛的头均可用卵母细胞数比8~12岁牛的多1.78枚(P<0.05);活体连续采卵时间在3个月以下(包含3个月)的卵母细胞可用率比连续采卵3~9个月的多8.03(P<0.01)。可见,一年四季都可进行水牛活体采卵,但秋、冬季进行活体采卵较为适宜;3~7岁年龄段牛做供体的活体采卵效果更佳;卵母细胞可用率会随着连续采卵时间延长而明显下降,建议同一批牛连续采卵不超3个月。

摘要：为了探讨不同添加剂和混合比对象草和甘蔗梢混合青贮发酵品质的影响,试验采用两因素试验设计,将象草和甘蔗梢按鲜重比为100∶0、75∶25、50∶50、25∶75和0∶100混合,并分别进行添加乳酸菌(LAB)和甲酸(FA)及无添加(C,对照)处理,每个处理5个重复,采用小规模发酵法,在室温避光条件下发酵30 d后测定混合青贮的发酵品质和营养成分。结果表明:不同混合比例及不同添加剂处理pH值、乳酸、乙酸、氨态氮(NH_(3)-N)、干物质、粗蛋白和有机物含量表现出显著或极显著的交互作用(P<0.05或P<0.01)。与象草单一青贮相比,混合青贮的pH值、乙酸、丁酸、NH_(3)-N和粗蛋白含量均显著降低(P<0.05),干物质和有机物含量均显著增加(P<0.05),在象草和甘蔗梢混合比例为25∶75时pH值、NH_(3)-N含量较低,乳酸、有机物含量较高;在不同添加剂处理方面,与无添加处理相比,FA处理的pH值、乳酸、乙酸和NH_(3)-N含量均显著降低(P<0.05),粗蛋白和有机物含量均显著提高(P<0.05)。说明象草和甘蔗梢在混合比例为25∶75及添加甲酸时青贮的发酵品质最优。

摘要：研究旨在根据基因多态性和超数排卵效果的关联分析,找到一种能预测水牛超数排卵反应的因子。以127头水牛(摩拉、尼里、地中海、本地、杂交水牛)为材料,采集血样,提取基因组DNA。采用PCR及DNA测序技术,以Gen Bank公布的牛FSHR(follicle stimulating hormone receptor)、INHA(inhibin alpha)、LHCGR(luteinizing hormone/choriogonadotropin receptor)、OPN(osteopontin)基因序列为参考序列,设计PCR引物,对FSHR的5'上游调控区、INHA第1外显子、LHCGR第11外显子和OPN3907启动子进行了基因型检测,并将基因多态性与45头水牛的超数排卵性状进行了关联分析。结果表明:FSHR、INHA、LHCGR的相应SNP位点都不存在多态性;OPN基因启动子上游存在T碱基插入/缺失突变,T9/T9、T10/T10、T9/T10的基因型频率分别为:0.4020、0.1275和0.4634。此外,T10/T10型水牛在第5次超数排卵时获得的可用卵母细胞数显著高于T9/T9型水牛(P<0.05)。以上结果预示,OPN可作为水牛超数排卵效果的一个预测因子。

摘要：研究旨在分析甘蔗尾全混青贮饲喂技术与甘蔗尾青贮加精料饲喂技术对杂交水牛增重、肉用性能及血液生化指标的影响。采用完全随机分组设计,选取12头体重(527.8±80.0)kg年龄相近的健康育肥后期杂交公水牛,随机分为2组,即饲喂甘蔗尾青贮+精料组(对照组)和甘蔗尾全混青贮组(试验组),试验时间共105 d,其中预饲期14 d,正式试验期91 d。结果表明:①干物质、粗蛋白、能量及纤维等营养素的摄入量对照组均显著高于试验组(P0.05);③除了试验组的白蛋白及白球比显著高于对照组(P0.05)。试验结果表明,甘蔗尾全混青贮质量稳定,利于贮藏及运输,可降低养殖场(户)的技术水平要求,饲喂效果与同等条件下甘蔗尾青贮加精料饲喂基本一致。

摘要：试验研究甜玉米秆全混青贮对杂交水牛育肥效果、肉用性能及血清生化指标的影响。采用完全随机分组设计,选取体重(356.2±43.5)kg、年龄相近的健康杂交公水牛20头,随机分为2组,每组10个重复。对照组水牛饲喂普通甜玉米秆青贮+精料,试验组水牛饲喂甜玉米秆全混青贮饲料。预试期7 d,正式试验期75 d。结果显示,试验组公水牛的平均日增重低于对照组,但是差异不显著(P>0.05);试验组公水牛的干物质采食量,粗蛋白、代谢能、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维、钙和磷的摄入量均显著低于对照组(P0.05)。试验组公水牛的血清白蛋白、总胆固醇含量均显著低于对照组(P0.05)。研究表明,新鲜甜玉米秆可加入玉米、豆粕、麦麸等精饲料制成营养全面的全混青贮饲料,替代常规甜玉米秆青贮加精料日粮饲喂的方式应用于生产。