摘要：通过添加增效剂、正交试验设计优化PCR反应体系、联合采用多种PCR程序等措施,建立并优化了PCR扩增体系,成功地从高GC青枯菌基因组中扩增出了长度为2 434 bp且GC含量高达70.9%的aac基因。PCR反应体系为20μL包括5%DMSO2、.5 mmol/L MgCl2、500μmol/L dNTP、10 pmol/L引物1、.25 UTaq酶、50 ng模板DNA。首先采用热启动PCR:95℃5 min,保持80℃,加入Taq酶;然后采用二步PCR:5个循环包括变性95℃1 min,65℃1 min;最后采用降落PCR:30个循环为95℃1 min,78℃1 min,每个循环降低0.5℃,72℃3 min;补充10个循环为95℃1 min,63℃1 min,72℃3 min;72℃10 min。该试验体系的建立与优化为研究高GC含量生物的基因功能提供了方法。

摘要：武夷菌素是由不吸水链霉菌武夷变种(Streptomyces ahygros ***)产生的一种农用抗生素,对多种作物的真菌病害防治效果显著。为进一步提高武夷菌素产生菌的产量、降低其生产成本,应用SAS软件提供的Plackett-Burman设计法和响应面分析法对该菌株的发酵培养基进行优化组合,以期找到适宜武夷菌素产生菌C-75生产的最佳发酵培养基配方。应用Plackett-Burman设计法从9种培养基成分中筛选出玉米粉和碳酸钙为两个重要因素;通过响应面回归分析结果建立响应面回归模型:Y=5826.99-91.56X2-180.69X8-194.31X22-151.25X2X8-205.31X82。回归模型预测当玉米粉和碳酸钙的含量分别为2.314g和0.205g(50mL培养基装量)时,该模型能取到最大值。摇瓶发酵试验结果表明,该模型稳定点处的实际效价平均值为5837μg/mL,菌株C-75经优化培养基发酵后的效价较之前提高了5.59%。