摘要：猫冠状病毒(FCoV)在全球猫种群中广泛流行,隐形感染的猫导致病毒在猫群中持续传播。提高样本检测率、早预防、早治疗可减少种群中病毒流行率。为建立可以灵敏、准确检测FCoV的Taq Man荧光定量PCR检测方法,根据GenBank公布的FCoV基因片段N保守区域设计了1对特异性引物和1条探针,通过优化反应体系,建立了FCoV Taq Man荧光定量PCR检测方法,对75份临床样品进行检测。结果表明,该方法在1.49×10^(11)~1.49×10^(2) copies/μL之间具有良好的线性关系,特异性强,敏感性高,对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(0) copies/μL,而普通PCR对FCoV质粒标准品最低检测下限为1.49×10^(5) copies/μL;重复性好,组内变异系数和组间变异系数均小于3%;75份临床样品,阳性率为37.33%。研究建立的FCoV检测方法扩增效率高、特异性强、敏感性好、稳定性高,且实用性好,可以用于FCoV的快速检测,可为流行病学调查提供有效的技术手段。

摘要：【目的】谷氨酸棒杆菌是一种重要的工业微生物,挖掘可调控性元件可有效拓展谷氨酸棒杆菌研究和应用的广度和深度。【方法】在谷氨酸棒杆菌组成型强启动子P_(H10)上嵌入阻遏蛋白CymR结合的操纵序列CuO,构建了4-异丙基苯甲酸(Cumate)为诱导剂的启动子P_(H10-CuO)。【结果】绿色荧光蛋白作为报告基因的实验结果显示,无诱导剂时,谷氨酸棒杆菌工程菌相对荧光强度较低;以25μg/mL 4-异丙基苯甲酸诱导12 h时,谷氨酸棒杆菌工程菌荧光强度达62000,证明P_(H10-CuO)具有很好的严谨性和诱导表达强度。构建了以启动子P_(H10-CuO)调控recET和Cas12a表达的谷氨酸棒杆菌基因编辑质粒,实现谷氨酸棒杆菌染色体上靶标基因的精准编辑和外源基因插入。【结论】诱导型启动子P_(H10-CuO)具有表达强度高且渗漏表达低的特点,可用于谷氨酸棒杆菌中被其调控基因的时序性表达。

摘要：本试验旨在研究饲粮添加甜菜碱缓解皮质酮诱导的产蛋鸡小肠炎症反应。采用单因素完全随机试验设计,将72只130日龄产蛋鸡随机分成3组,每组8个重复,每个重复3只鸡。对照组和皮质酮组产蛋鸡全程饲喂不添加甜菜碱的基础饲粮,甜菜碱+皮质酮组产蛋鸡全程饲喂基础饲粮+0.10%甜菜碱。试验至28 d时,皮质酮组和甜菜碱+皮质酮组产蛋鸡均按4 mg/kg BW的剂量皮下注射皮质酮,对照组产蛋鸡皮下注射等量生理盐水,连续注射7 d。试验期35 d。结果表明:1)与对照组相比,皮质酮组的十二指肠、空肠和回肠中白细胞介素-1β(IL-1β)含量显著升高(P<0.05);与皮质酮组相比,甜菜碱+皮质酮组的十二指肠、空肠和回肠中IL-1β含量显著降低(P <0.05)。2)与对照组相比,皮质酮组的十二指肠中Toll样受体4(TLR4)、白细胞介素-8(IL-8)和核因子-κB p65(NF-κB p65)的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与皮质酮组相比,甜菜碱+皮质酮组的十二指肠中TLR4、IL-8和NF-κB p65的mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。3)与对照组相比,皮质酮组的空肠中IL-1β和NF-κB p65的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与皮质酮组相比,甜菜碱+皮质酮组的空肠中IL-1β的mRNA表达水平显著降低(P<0.05),空肠中白细胞介素-10(IL-10)的mRNA表达水平显著升高(P<0.05)。4)与对照组相比,皮质酮组的回肠中IL-1β、IL-8和NF-κB p65的mRNA表达水平显著升高(P<0.05);与皮质酮组相比,甜菜碱+皮质酮组的空肠中IL-1β、IL-8和NF-κB p65 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮添加甜菜碱可通过降低小肠中IL-1β含量及炎症相关基因的mRNA表达水平缓解皮质酮诱导的产蛋鸡小肠炎症反应。

摘要：旨在验证牛INTS11基因在成肌细胞中的功能作用,通过生物信息学分析探讨INTS11的CDS区序列及其编码蛋白的特征,并使用不同分子试验技术验证其在牛成肌细胞增殖过程中发挥的作用。本研究对牛INTS11基因序列与其他物种进行同源性对比并构建生物进化树,对其编码蛋白进行理化性质和功能结构分析以及亚细胞定位。并以体外分离培养的3月龄健康胎牛成肌细胞为试验材料,克隆成肌细胞中INTS11的全部CDS区序列,构建INTS11的过表达载体并设计基因的干扰序列,通过CCK8、Edu、RT-qPCR等技术探究其对成肌细胞增殖的影响。生物信息分析结果表明,CDS区序列全长为1800 bp,具有MBL-foldmetallo-hydro和β-CASP基序两个功能结构域,属于非跨膜蛋白,且细胞定位主要分布于细胞质。在成肌细胞中转染pcDNA3.1-INTS11质粒,结果显示在72~96 h时试验组的成肌细胞比对照组的增殖速度显著增加(P<0.05);Edu试验发现阳性细胞数目显著增加(P<0.05);RT-qPCR结果表明增殖标志因子CDK2、CYCLIND1的mRNA表达水平与对照组相比显著上升(P<0.05)。转入干扰序列后,细胞增殖速度显著下降(P<0.05),同时增殖标志因子CDK2、cyclin D1的mRNA表达水平与对照组相比显著下降(P<0.05)。本研究预测了INTS11在家养动物中的保守性,并且INTS11蛋白具有两个功能结构域,发现其通过介导CDK2、CYCLIND1的mRNA转录促进牛成肌细胞增殖,其结果完善了调控骨骼肌的基因网络,为后序探讨调控骨骼肌生长机制提供理论支持。

摘要：旨在开展GREB 1L和MIB 1基因多态性与肋骨数和胴体性状(胴体长、胴体直长、胴体斜长及胴体重)关联分析,筛选关键功能位点。本研究选取屠宰日龄为215天的317头健康北京黑猪,并提取耳组织DNA,对GREB 1L和MIB 1基因进行引物设计、并利用聚合酶链式反应(PCR)技术和Sanger测序技术等对SNPs进行基因分型,计算变异位点基因型频率以及等位基因频率分布,并与肋骨数和胴体性状进行关联分析。试验共筛选到6个SNPs,包括GREB 1L基因的3个同义突变、MIB 1基因的2个同义突变和1个内含子区的可变剪切突变。将6个SNPs分别对肋骨数和胴体性状使用Duncan’s多重检验统计分析发现,GREB 1L基因上的3个同义突变6:106574972 G>A、6:106648540 C>T、6:106648558 A>G与性状关联均不显著(P>0.05);MIB 1基因上的1个同义突变6:106936590 C>T与胴体长显著相关(PG可变剪切突变与肋骨数显著相关(PA与肋骨数和胴体性状均无显著差异(P>0.05)。结果显示,显著的2个位点可作为北京黑猪肋骨数及胴体长变异的候选基因功能位点。

摘要：【目的】研究脂蛋白脂酶(lipoprteinlipase,LPL)和Nudix水解酶3(Nudix hydrolase homolog 3,NUDT3)基因多态性与北京黑猪肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量和背膘厚的关联性,从而在分子水平上指导北京黑猪的育种工作。【方法】利用347头北京黑猪背最长肌样本进行IMF含量和背膘厚数据测定,按照IMF含量进行高、低分组。根据猪NUDT3和LPL基因序列设计引物并进行PCR扩增及测序,运用DNAStar软件中SeqMan分析测序结果,使用Duncan’s多重检验对2个基因不同基因型与北京黑猪IMF含量和背膘厚进行关联分析,并运用实时荧光定量PCR对其进行基因表达差异分析。【结果】LPL基因存在1个错义突变、3个同义突变和3个3′-UTR突变;NUDT3基因存在6个3′-UTR突变。LPL基因CDS区c.431 G>C位点与北京黑猪第6~7肋背膘厚显著相关,c.647 G>C位点与胸腰结合处背膘厚显著相关,c.637 A>G位点与第6~7肋背膘厚、胸腰结合处背膘厚和腰荐结合处背膘厚均显著相关(PG位点与胸腰结合处背膘厚显著相关,c.1689 C>A位点与IMF含量显著相关(PT位点与北京黑猪IMF含量和腰荐结合处背膘厚显著相关,c.6068 C>G位点与IMF含量和第6~7肋背膘厚显著相关,c.5729 G>A位点与IMF含量显著相关(PT位点IMF含量高、低组间表达量无显著差异,LPL基因c.1689 C>A位点CC与AA基因型间表达量无显著差异(P>0.05)。【结论】北京黑猪群体中LPL和NUDT3基因的突变位点与IMF含量显著关联,为北京黑猪肉品质选育提供了新的分子标记。

摘要：试验旨在研究饲粮添加乙二胺四乙酸铁钠(NaFeEDTA)对肉仔鸡生长性能和不同组织中铜、锌和锰沉积的影响。试验按3(铁源)×3(添加铁水平)+1(不加铁对照组)双因子完全随机试验设计,将560只1日龄AA肉公鸡随机分成10组,每组7个重复,每个重复8只鸡,分别饲喂未添加铁的玉米-豆粕型基础日粮(对照组)和在此基础日粮中分别添加20、40和60 mg/kg铁(分别源于硫酸亚铁(FeSO_(4)·7H_(2)O)、饲料级NaFeEDTA和食品级NaFeEDTA的饲粮21 d。结果显示:与FeSO_(4)·7H_(2)O组相比,饲粮添加不同来源的NaFeEDTA对肉仔鸡生长性能无显著影响(P>0.05);食品级和饲料级NaFeEDTA组心脏中铜、胫骨中锌以及肝脏和胫骨中锰元素的含量显著提高(P<0.05)。由此可见,添加NaFeEDTA从整体上促进了肉仔鸡心脏中铜、胫骨中锌以及肝脏和胫骨中锰元素的沉积。

摘要：试验旨在研究饲粮添加甜菜碱缓解皮质酮诱导的产蛋鸡肝脏炎症反应。试验采用单因子完全随机试验设计,将72只130日龄产蛋鸡随机分成3组,分别为对照组、皮质酮组和甜菜碱缓解组,每组8个重复。试验期35 d。对照组和皮质酮组鸡全程饲喂不添加甜菜碱的饲粮,而甜菜碱缓解组鸡全程饲喂添加0.10%甜菜碱的饲粮,试验至28 d时,皮质酮与甜菜碱缓解组鸡均按4 mg/kg体重的剂量注射皮质酮,而对照组鸡注射等体积的酒精生理盐水(含15%酒精),连续注射7 d。结果显示:饲粮添加甜菜碱有效缓解皮质酮诱导的血浆中谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性的升高以及肝脏中IL-1βmRNA表达水平的升高(P<0.05);甜菜碱显著缓解皮质酮诱导的IL-1βDNA启动子区甲基化水平的降低(P<0.05)。研究表明,甜菜碱通过DNA甲基化修饰抑制肝脏中IL-1βmRNA表达,从而缓解皮质酮诱导的产蛋鸡肝脏炎症反应。

摘要：本试验旨在研究饲粮锌缺乏对22~42日龄肉仔鸡生长性能、小肠形态、屏障功能及空肠中紧密连接蛋白mRNA表达的影响。试验选用140只1日龄爱拔益加肉仔鸡公雏,1~21日龄统一饲喂正常添加七水合硫酸锌(ZnSO 4·7H 2O)的试验饲粮(实测锌含量为84.40 mg/kg);22日龄时,从中选取体重接近的112只肉仔鸡,采用单因子完全随机试验设计,随机分为2组(每组7个重复,每个重复8只鸡),对照组饲喂满足肉仔鸡锌需要量的试验饲粮(基础饲粮中添加40 mg/kg锌,实测锌含量为64.36 mg/kg),锌缺乏组饲喂不添加锌的试验饲粮(基础饲粮中不添加锌,实测锌含量为22.23 mg/kg)。试验期42 d。结果表明,与对照组相比:1)锌缺乏组22~42日龄肉仔鸡料重比显著增加(P<0.05);2)锌缺乏组42日龄肉仔鸡十二指肠和空肠隐窝深度显著增加(P<0.05),42日龄肉仔鸡十二指肠、空肠和回肠绒毛高度/隐窝深度以及空肠绒毛高度和绒毛表面积显著降低(P<0.05);3)锌缺乏组42日龄肉仔鸡翅静脉和肝门静脉血清二胺氧化酶活性和异硫氰酸荧光素-葡聚糖含量显著增加(P<0.05);4)锌缺乏组42日龄肉仔鸡空肠中黏膜闭合蛋白-1(Claudin-1)的mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。综上所述,饲粮锌缺乏可能通过降低紧密连接蛋白Claudin-1的mRNA表达而损伤肉仔鸡小肠黏膜完整性和屏障功能,进而降低其饲料转化效率。

摘要：本试验旨在研究饲粮添加不同形态锌[无机硫酸锌(ZnSO4)和中等螯合强度蛋白锌(Zn-Prot M)]对肉仔鸡血浆生化指标、抗氧化能力及免疫功能的影响。试验选用300只1日龄爱拔益加肉仔鸡公雏,1~13日龄统一饲喂不添加锌的半纯合饲粮,于14日龄从中选取体重接近的240只鸡,采用单因子完全随机试验设计,随机分成3组,每组8个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂不添加锌的基础饲粮,试验组分别饲喂基础饲粮中添加60 mg/kg ZnSO_(4)和Zn-Prot M(以锌计)的试验饲粮。试验期26 d。结果表明:1)饲粮添加不同形态锌对血浆白蛋白、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇含量以及谷丙转氨酶和谷草转氨酶活性均无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,饲粮添加ZnSO_(4)和Zn-Prot M均显著降低了血浆中总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量(P0.05)。与对照组相比,饲粮添加ZnSO_(4)和Zn-Prot M均显著降低了血浆中白细胞介素-1β含量(P<0.05);与ZnSO_(4)组相比,饲粮添加Zn-Prot M显著降低了肉仔鸡血浆中白细胞介素-1β含量(P<0.05)。综上所述,饲粮添加ZnSO_(4)和Zn-Prot M显著影响了肉仔鸡血浆中总蛋白、球蛋白、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量以及乳酸脱氢酶活性等生化指标,提高了其抗氧化能力和免疫功能,且Zn-Prot M的效果优于ZnSO_(4)。