摘要：本试验旨在研究饲粮粗蛋白质(CP)水平对肉鸡生长性能及消化功能的影响,并探讨由此是否引起了对饲粮表观代谢能(AME)测定的差异。试验包括2个部分。第1部分考察饲粮CP水平对肉鸡生长性能及消化酶活性的影响。采用完全随机区组设计,以7日龄体重为区组,饲粮设置2个CP水平,即高CP水平(HP)饲粮(8~21日龄饲粮CP水平为22.57%,22~35日龄饲粮CP水平为20.65%)和低CP水平(LP)饲粮(8~21日龄饲粮CP水平为19.29%,22~35日龄饲粮CP水平为17.49%),每个处理6个重复,其中8~21日龄每个重复24只鸡,22~35日龄每个重复17只鸡。第2部分考察饲喂不同CP水平饲粮的肉鸡对排泄物中可消化养分及饲粮能量和蛋白质代谢的影响。采用2×2两因素完全随机设计,试验鸡的来源设2个处理,即饲喂HP饲粮的肉鸡和饲喂LP饲粮的肉鸡;经肉鸡消化代谢的饲粮设2个处理,即HP饲粮(21~28日龄,CP水平为22.57%;35~42日龄,CP水平为20.65%)和LP饲粮(21~28日龄,CP水平为19.29%;35~42日龄,CP水平为17.49%),每个处理6个重复,其中21~28日龄每个重复4只鸡,35~42日龄每个重复2只鸡。结果表明:1)饲喂LP饲粮的肉鸡8~21日龄平均日增重(ADG)显著高于饲喂HP饲粮的肉鸡(P0.05)。2)肉鸡饲喂HP饲粮与饲喂LP饲粮相比,21日龄空肠液淀粉酶、糜蛋白酶和回肠液淀粉酶活性显著升高(P0.05)。4)饲喂不同CP水平饲粮的肉鸡对饲粮AME、氮校正表观代谢能(AMEn)、能量表观代谢率(AME/GE)、氮校正能量表观代谢率(AMEn/GE)及CP代谢率均无显著影响(P>0.05)。由此可见,虽然饲粮CP水平影响了肉鸡的ADG和消化液中部分消化酶的活性,但对生物学法测定的饲粮AME及CP代谢率无显著影响。

摘要：牛分枝杆菌是严重危害养牛业的重要人兽共患病原微生物,PCR是检测该病原的有效手段之一。本研究通过筛选最佳的PCR检测方法,以期为临床监测牛分枝杆菌感染提供技术参考。针对牛分枝杆菌4种常见的特异性基因(16S rRNA、IS6110、IS1081和Mpb64)分别设计引物,通过温度梯度PCR法确定最适退火温度;采用牛分枝杆菌参考株核酸确定PCR最小检测限,同时运用牛分枝杆菌国内参考株、牛分枝杆菌国际参考株、禽分枝杆菌、胞内分枝杆菌、副结核分枝杆菌、羊种布鲁菌以及牛种布鲁菌进行特异性比较试验;最后运用人工模拟牛分枝杆菌感染组织样本(肺脏、淋巴结、奶样)比较不同PCR方法检测效果。4对引物以60℃为退火温度时均能检测分枝杆菌,其中IS6110、IS1081和Mpb64基因引物可以特异性检测牛分枝杆菌。IS6110和IS1081基因引物对牛分枝杆菌基因组的检测灵敏度最高,可达10^(-10) ng/μL;IS6110基因引物在肺脏和淋巴结中牛分枝杆菌检测灵敏度可达10~6 CFU/mL以上,而Mpb64基因引物对奶样中牛分枝杆菌的检测灵敏度可达10~2 CFU/mL。本研究筛选出相对适宜的牛分枝杆菌PCR检测方法,为牛结核病病原学检测和临床应用提供技术支持。

摘要：为了探索发酵全混合日粮(FTMR)对贵州黑山羊淘汰母羊生产性能、瘤胃发酵参数、血清免疫指标及育肥效果的影响,试验选择健康、平均体重为(35.00±1.63)kg的贵州黑山羊淘汰母羊33只,采用完全随机区组设计(RCBD)将试验羊分为3组,每组11只,各组单栏饲养。试验Ⅰ组饲喂市售商品颗粒TMR,试验Ⅱ组饲喂现加工的常规TMR,试验Ⅲ组饲喂FTMR,预试期为10 d,正试期为75 d。试验开始前试验羊空腹称初始重,然后每间隔14 d称重1次,计算日增重(ADG)、干物质采食量及料重比,统计增重饲料成本和增重效益。试验结束后,试验羊颈静脉采血,检测血清免疫指标[免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白G(IgG)、胰岛素样生长因子(IGF)、干扰素(IFN)、生长激素(GH)、白细胞介素-2(IL-2)、游离三碘甲状腺原氨酸(T3)、游离四碘甲状腺原氨酸(T4)]。用导管法采集各组试验羊瘤胃液样品30 mL,测定总挥发性脂肪酸(TVFA)、氨态氮(NH3-N)、乙酸、丙酸、丁酸含量及pH值,统计主要挥发性脂肪酸(VFA,乙酸、丙酸、丁酸)占TVFA比例,并计算乙酸与丙酸比(乙丙比)。结果表明:试验Ⅲ组ADG为(196.43±36.28)g/d,与试验Ⅱ组相比差异不显著(P>0.05),但试验Ⅰ组日增重显著高于试验Ⅱ组(P0.05),试验Ⅲ组的粗蛋白、中性洗涤纤维和粗脂肪消化率高于试验Ⅰ组和试验Ⅱ组(P>0.05)。各试验组间瘤胃液pH值,TVFA含量,乙酸、丙酸、丁酸占TVFA比例及乙丙比差异不显著(P>0.05),试验Ⅰ组NH3-N含量极显著高于试验Ⅱ组和试验Ⅲ组(P0.05)。说明饲喂FTMR可提高贵州黑山羊淘汰母羊养分消化率,提升体液免疫功能,促进其生长发育,同时能降低增重饲料成本,提高育肥经济效益。

摘要：旨在研究上游远端元件结合蛋白3(far upstream element binding protein 3,FUBP3)及泛素特异性蛋白酶43(ubiquitin specific protease 43,USP43)基因多态性与北京黑猪眼肌面积性状的关系,从而在分子水平指导北京黑猪的育种工作。本研究选取408头北京黑猪收集眼肌面积性状数据并采集肉样提取DNA,根据FUBP3和USP43基因序列设计43对引物进行PCR扩增及测序,运用DNAstar软件分析测序结果,对FUBP3和USP43基因不同基因型与北京黑猪眼肌面积性状进行关联分析并运用荧光定量PCR对两基因进行基因表达差异分析。在FUBP3基因启动子区共有8个突变,其中rs701769847G>A与5~6肋眼肌面积和最后肋眼肌面积均关联显著(PG仅与5~6肋眼肌面积关联显著(PC、rs339464012T>C和rs326069041T>C只与最后肋眼肌面积关联显著(PA位点GG型个体的FUBP3基因mRNA水平显著低于AA型个体(PT和剪切区的rs323463345G>A均只与最后肋眼肌面积关联显著(PA中GG型个体和AA型个体的USP43基因mRNA水平差异不显著。上述两基因中共有两个位点与5~6肋眼肌面积性状关联显著(P<0.05),6个位点与最后肋眼肌面积性状关联显著(P<0.05),可以作为北京黑猪眼肌面积性状变异的候选基因功能位点,也可以作为潜在的眼肌面积性状分子标记。

摘要：【目的】试验旨在利用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得CD 163(cluster of differentiation 163)单等位基因表达的永生化猪肺泡巨噬细胞系(immortalized porcine alveolar macrophages,iPAMs),并探究其介导猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)感染的特征,为深入研究CD 163基因在PRRSV感染中的作用机制奠定基础。【方法】在猪CD 163基因外显子1区域设计8条向导RNA(single guide RNA,sgRNA),并将其连接到pX458载体中,通过T7E1酶切试验检测不同sgRNA载体的活性;将活性较高的3条sgRNAs表达载体电转染到iPAMs中,通过流式细胞术分选单克隆细胞,对获得的单克隆细胞进行基因型鉴定、蛋白表达检测、脱靶分析以及PRRSV感染分析。【结果】在设计的8条sgRNAs中有3条基因编辑效率在28%以上。基因型鉴定结果表明,50株片段敲除的单克隆细胞中有4株符合预期的CD 163单等位基因表达的iPAMs,效率为8%。蛋白表达检测和脱靶分析结果显示,CD 163单等位基因表达的iPAMs中CD163蛋白表达量显著下降(P0.05)。【结论】本研究利用CRISPR/Cas9编辑系统构建了可以正常感染PPRSV的CD 163单等位基因表达的iPAMs,为阐明CD163在猪繁殖与呼吸综合征传染病中所起的作用以及培育抗病猪新品种奠定了基础。

摘要：谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GS)是合成CHO细胞生长所需要的谷氨酰胺的关键酶。为了获得能快速稳定表达外源蛋白的CHO细胞GS筛选系统,根据CRISPR/Cas9技术原理,针对GS基因设计3对sg RNA,分别将连接sg RNA的pX459质粒转染至CHO-K1细胞中以便定向敲除GS基因;经筛选后利用PCR及测序分析鉴定GS基因敲除情况;将GS基因敲除的CHO细胞株(CHO^(GS-/-))分别在含有外源谷氨酰胺培养基与无谷氨酰胺培养基中进行培养,观察细胞的生长状态,绘制生长曲线,并验证该CHO^(GS-/-)细胞株中外源基因的表达能力。结果显示,sg RNA3与sg RNA4共转染能高效双靶位敲除CHO细胞中的GS基因;生长曲线显示CHO^(GS-/-)细胞在富含谷氨酰胺的培养基中生长速度正常或无差异,但无法在无谷氨酰胺的培养基中存活,这表明GS基因功能被破坏;外源基因表达水平及功能验证显示,敲除GS基因后不影响外源单抗在细胞中的表达。这表明,借助CRISPR/Cas9敲除系统获得了CHO^(GS-/-)细胞,大大提高了稳定转染外源基因阳性细胞株的筛选效率,为后期利用CHO细胞大量发酵表达蛋白技术建立了坚实的分子生物学平台。

摘要：本试验通过研究不同泌乳水平奶牛在瘤胃发酵和血清代谢上的差异,从消化和代谢的角度解释不同泌乳水平奶牛的泌乳合成机制差异,为提高奶牛的生产性能提供理论依据。试验采用随机区组设计,选择24头体况良好、体重[(648.50±68.65)kg]、胎次[(2.64±0.70)胎]相近的泌乳中期[(182.0±31.5)d]荷斯坦奶牛,按产奶量分为高产组[(41.7±4.8)kg/d]和低产组[(24.1±3.9)kg/d],各12头,在相同的饲养管理条件下饲喂相同的全混合日粮。分别用乳成分分析仪、酶免法、比色法和气相色谱法对乳成分、血清代谢指标及瘤胃发酵参数进行测定。结果表明:1)高产组奶牛乳成分中乳蛋白、乳脂和乳糖含量极显著高于低产组(P<0.01),乳总固形物含量显著高于低产组(P<0.05),而乳蛋白率极显著低于低产组(P<0.01);2)高产组奶牛瘤胃中总挥发性脂肪酸、丙酸及丁酸含量极显著高于低产组(P<0.01),乙酸含量显著高于低产组(P<0.05);3)高产组奶牛血清能量代谢指标葡萄糖(GLU)和甘油三酯(TG)含量极显著低于低产组(P<0.01),非酯化脂肪酸(NEFA)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量显著低于低产组(P<0.05),β-羟丁酸(BHBA)含量极显著高于低产组(P<0.01);抗氧化指标血清丙二醛(MDA)含量显著高于低产组(P<0.05),总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著低于低产组(P<0.05);免疫指标血清白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量极显著低于低产组(P<0.01),免疫球蛋白G(IgG)、白细胞介素-6(IL-6)含量显著低于低产组(P<0.05),而免疫球蛋白M(IgM)含量显著高于低产组(P<0.05)。综上所述,高、低产奶牛在瘤胃发酵及血清代谢指标方面存在显著性差异。

摘要：本试验旨在研究沙棘黄酮对奶牛生产性能、乳中生物活性成分及血清生化和抗氧化指标的影响。选取胎次、体重、产奶量和泌乳期相近的中国荷斯坦奶牛30头,按照完全随机区组设计原则分为3组,每组10头。各组分别在基础饲粮基础上添加0 (对照)、 60和100 g/(d·头)的沙棘黄酮。试验期共75 d,其中预试期15 d,正试期60 d。于正试期第1、15、30、45、60天采集乳样测定生产性能和乳中生物活性成分,第1、30、60天采集血样测定血清生化和抗氧化指标。结果表明:1)与对照组相比,饲粮中添加60和100 g/(d·头)沙棘黄酮均显著提高了泌乳中期荷斯坦奶牛的产奶量(P<0.05),饲粮中添加60 g/(d·头)沙棘黄酮显著提高了泌乳中期荷斯坦奶牛的乳蛋白率、乳脂率、4%乳脂校正奶产量和能量校正奶产量(P<0.05)。2)与对照组相比,饲粮中添加60和100 g/(d·头)沙棘黄酮均显著提高了泌乳中期荷斯坦奶牛乳中溶菌酶、乳铁蛋白、β-乳球蛋白和乳过氧化物酶含量(P<0.05)。3)与对照组相比,饲粮中添加60 g/(d·头)沙棘黄酮显著提高了泌乳中期荷斯坦奶牛的血清总蛋白和胆固醇含量(P<0.05)。4)与对照组相比,饲粮中添加60 g/(d·头)沙棘黄酮显著提高了泌乳中期荷斯坦奶牛的血清谷胱甘肽过氧化物酶、硫氧还蛋白氧化还原酶活性(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加60 g/(d·头)沙棘黄酮能提高泌乳中期荷斯坦奶牛产奶量和乳成分含量,提高奶牛的抗氧化能力。

摘要：本试验旨在通过体外法研究竹叶黄酮(BLF)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)抗氧化及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路中关键基因表达的影响。采用单因素试验设计,对照组不添加BLF,试验组分别添加不同浓度(0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、60.0、100.0μg/mL)BLF,处理BMECs 3、6、12、24和48 h后,应用细胞增殖试剂盒(CCK-8)法检测BMECs的活性,应用乳酸脱氢酶(LDH)法检测BLF对BMECs的毒性,每次试验平行复孔6个,重复试验3次。分别应用流式细胞仪和试剂盒法检测BLF对BMECs抗氧化指标的影响,并应用实时荧光定量PCR法检测凋亡相关基因以及mTOR信号通路中相关基因表达量的变化。结果表明:1)BLF对BMECs活性适宜作用浓度为1.0、5.0、10.0μg/mL,最佳作用时间为12 h,且此浓度的BLF对BMECs无毒性作用。2)流式细胞仪检测结果表明,与对照组相比,5.0、10.0μg/mL的BLF极显著降低了BMECs的早期凋亡率和晩期凋亡/坏死率(P<0.01),BLF极显著降低了BMECs的总凋亡率(P<0.01)。3)与对照组相比,5.0μg/mL的BLF极显著降低了细胞内活性氧(ROS)的生成和线粒体膜电位(MMP)水平(P<0.01)。4)与对照组相比,添加BLF可极显著升高BMECs的总超氧化物歧化酶(T-SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)(P<0.01)活性极显著降低丙二醛(MDA)的含量(P<0.01)。5)实时荧光定量PCR的结果表明,与对照组相比,添加5.0μg/mL的BLF显著降低B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)的基因相对表达量(P<0.05);BLF可极显著提高B淋巴细胞瘤/白血病-2(Bcl-2)的基因相对表达量(P<0.01),极显著降低Bax/Bcl-2的比值(P<0.01);添加5.0和10.0μg/mL的BLF显著降低环氧合酶-2(COX-2)基因相对表达量(P<0.05),极显著降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)基因相对表达量(P<0.01),极显著提高真核翻译起始因子4E结合蛋白1(EIF-4EBP1)基因相对表达量(P<0.01);此外,与对照组相比,BLF可极显著提高BMECs中mTOR信号通路关键调控基因mTOR、核糖体p70s6(S6K1)和细胞周期素D1(Cyclin D 1)基因相对表达量(P<0.01),极显著提高β-酪蛋白(β-casein)基因相对表达量(P<0.01)。综上所述,BLF可促进BMECs的活性,减少ROS的积累和MMP水平;BLF可显著提高BMECs的抗氧化能力,降低凋亡相关基因的表达,通过mTOR信号通路转导,从而影响乳蛋白的合成。

摘要：随着生物组学、系统生物学和合成生物学等前沿学科的高度交叉融合,推动新一代基因工程技术不断取得新突破。基因回路设计与合成是新一代基因工程的技术核心,具有颠覆性、智能性和精准性三大技术特征。加快农业生物基因回路设计与合成技术等创新,将为创制新一代农业生物新品种和促进我国农业高质量绿色发展提供重要技术支撑。简要总结了农业生物基因回路设计与合成技术国际发展动态,深入探讨了我国农业生物基因智能设计与精准表达技术的发展策略与优先领域。