摘要：设计特定引物对牦牛MSTN基因PCR分段扩增并克隆和测序,利用分子生物学软件进行序列拼接,获得牦牛MSTN基因序列(GenBank登录号EU926670)。该基因由3个外显子和2个内含子组成,CDS序列全长为1 128 bp(GenBank登录号EU926671),由375个氨基酸组成。外显子大小分别为373,374,381 bp,内含子大小分别为1 843,2 028 bp。牦牛与普通牛的MSTN基因编码区中,在417位发生一次碱基转换(C→T),但未造成氨基酸改变。不同物种间在该基因编码区核苷酸序列和氨基酸序列上有较高的相似性,牦牛与普通牛、绵羊、猪、人、狗、小鼠、马、兔子、鸡、猩猩各物种间核苷酸相似性大小分别为99.9%,96.5%,94.3%,89.1%,91.9%,91.3%,93.6%,91.7%,82.0%,92.0%。牦牛与普通牛MSTN氨基酸序列相似性最高,为100%;而与绵羊、猪、小鼠、人、狗、马、兔子、鸡、猩猩各物种间相似性大小分别为93.3%,95.5%,92.5%,94.1%,93.3%,94.9%,94.4%,88.0%,94.4%。生物信息学软件分析发现:牦牛MSTN基因编码蛋白的理论分子量约为42.6 kDa,PI值为6.14,Leu的含量最高(9.9%),其次是Lys(7.2%)。牦牛MSTN基因编码蛋白二级结构以β折叠为主,属于跨膜蛋白,跨膜区位于AA6-AA23之间;具有一个分泌信号肽结构,其氨基酸序列MQKLQICVYIYLFMLIVA具有TGF-β家族的特征。

摘要：本研究根据GenBank中登录的剂量敏感的性别反转-先天性肾上腺发育不良基因1(dosage-sensitive sex reversal,adrenal hypoplasia critical region,on chromosome X,gene 1,DAX1)设计引物,构建包含DAX1基因cDNA片段的质粒,作为中国荷斯坦牛DAX1基因mRNA定量检测的标准品,建立了DAX1基因mRNA表达实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法特异性好,检测灵敏度达102拷贝,线性范围为102～106拷贝,阈值循环数(Ct)与PCR体系中起始模板量的对数值间有着良好的线性关系(r=0.99975),扩增效率高(E=100%),可以作为检测牛DAX1基因mRNA定量检测方法。

摘要：根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria75/1株的H基因序列,设计上下游引物并添加BamHⅠ酶切位点,以含有小反刍兽疫病毒H基因的Topo-PPRVH质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆于pEASY-T载体中,用BamHⅠ单酶切后将目的片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,核酸序列分析证明,成功构建了PPRVH原核表达质粒pET-32a-H。将pET-32a-H重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)进行融合表达,经SDS-PAGE电泳,可见H蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为87ku,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量达到菌体总蛋白的38%,占包涵体蛋白的80%以上。Western blot鉴定表明,所表达的重组蛋白能被抗组氨酸单抗、抗PPRV标准阳性羊血清及抗PPRV疫苗的羊血清所识别,具有良好的免疫原性。

摘要：为建立一种快速、简便检测犬细小病毒(CPV)的方法,本研究基于CPV VP2基因的保守序列,设计合成引物,通过对反应条件的优化,建立了CPV的重组酶聚合酶(RPA)检测方法。该方法在38℃恒温反应15 min即可快速、特异性的检测出CPV。特异性试验结果显示,除CPV (BJ-2b株、BJ-2c株)外,犬瘟热病毒、犬冠状病毒、犬腺病毒、犬副流感病毒等检测均为阴性;敏感性试验结果显示,以重组质粒pEASY-CPV-VP2为模板,RPA的检测下限为1×10~1拷贝/μL,其敏感度比普通PCR方法高10倍。利用建立的RPA方法对疑似CPV感染的临床样品的阳性检出率为88%,高于普通PCR的检出率(82%)和胶体金的检出率(76%)。本研究建立的CPV RPA检测方法操作简单,反应灵敏,结果确实可靠,适用于CPV的快速检测。

摘要：学术背景:胚胎原始生殖细胞经体外抑制分化培养可得到胚胎生殖细胞,是胚胎干细胞的又一来源。以其作为外源基因的载体用于制作嵌合体、基因敲除等具有很高的实用价值。目的:概括性论述鸡胚胎原始生殖细胞建系方法、影响因素及应用前景等问题。检索策略:由该论文的研究人员应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2006-04的相关文献,检索词"embryos,primordialgermcells,embryonicstemcells,embryonicgermcells,genitalridge,Invitroculture",并限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库2000-04/2007-04的相关文献,检索词"胚胎,原始生殖细胞,胚胎干细胞,胚胎生殖细胞,生殖嵴,体外培养",并限定文章语言种类为中文。共检索到60篇文献,对资料进行初审,纳入标准:①与鸡胚胎原始生殖细胞的建系、影响因素及应用密切相关。②同一领域选择近期发表或在权威杂志上发表的文章。排除标准:重复性研究。文献评价:文献的来源主要是通过对鸡胚胎原始生殖细胞建系方法、影响因素及应用前景方面内容进行汇总分析。所选用的30篇文献中,7篇为综述,其余均为临床或基础研究。资料综合:①原始生殖细胞离体培养的关键是保证细胞具备无限增殖能力的同时维持其未分化状态。目前主要通过选择鸡胚原始生殖细胞的适宜分离时期和方法、合理设计培养基、采用饲养层细胞培养以及添加抑制分化的细胞因子等方法来解决。②鸡胚原始生殖细胞的生物学检测主要包括形态学鉴定、碱性磷酸酶活性检测、PAS染色检测、阶段特异性胚胎表面抗原1检测、核型分析、分化试验以及嵌合体试验等方法。③鸡胚原始生殖细胞的应用研究广泛,相比较桑椹胚和囊胚体外培养获取干细胞优势明显;为基础研究提供了最原始的发育生物学模型;生产克隆动物,降低禽类的保种成本;生产药物蛋白,是生产治疗用重组蛋白极为理想的来源。结论:尽管目前有关鸡原始生殖细胞的培养与应用已取得一定进展,但在生产实践上如何设计出更适合于鸡原始生殖细胞生长的离体培养体系、如何更高效方便地获得鸡原始生殖细胞、如何提高利用原始生殖细胞制作嵌合体的成功率等问题还有待进一步深入研究。

摘要：为系统地测定分析不同生长期金荞麦的常规营养成分、氨基酸、微量元素含量及其回肠末端消化率,本研究用3头安装"T"型瘘管,并做回-直肠吻合切除盲肠的巴克夏-驯养野猪-高坡黑猪(巴-野-高)三元杂交生长猪作为试验动物,采用3×3拉丁方试验设计开展消化试验。结果表明,分枝期、孕蕾期和初花期金荞麦OM、CP、EE、Ca、P、CF含量分别为88.59%、22.72%、2.34%、1.05%、0.39%、13.51%,89.10%、20.57%、1.69%、1.25%、0.42%、15.50%和89.63%、17.54%、1.37%、1.29%、0.46%、19.75%;EAA、NEAA和TAA含量分别为9285、7982、6244mg/100g,14334、10810、9320mg/100g和23619、18792、15564mg/100g。随着生长期的后延,营养成分含量显著降低,在体和离体消化率也随着生长期的后延而显著降低。分枝期与孕蕾期间营养成分含量差异显著(P<0.05),分枝期与初花期间营养成分含量差异极显著(P<0.01),孕蕾期与初花期间营养成分含量差异显著(P<0.05)。从分枝期到孕蕾期,金荞麦CP、EE、EAA及TAA下降较慢,CF含量升高较慢,营养成分消化率下降也较慢;从孕蕾期到初花期,金荞麦CP、EE、EAA及TAA下降较快,CF含量升高也较快,营养成分消化率下降也较快。以分枝期、孕蕾期和初花期体外法测定常规营养成分及微量元素消化率值为自变量,以对应的动物饲养试验回肠末端表观消化率值为因变量建立的回归方程拟合度好,可用于推算对应的回肠末端表观消化率。本实验证明,金荞麦营养丰富、消化率高,必需氨基酸比例高、适合动物消化吸收。孕蕾期为金荞麦适宜收割期,在适宜收割期内,收割时间点应选择孕蕾后期。

摘要：进行2个试验，研究有机锌源的理化特性及其体外瘤胃发酵的稳定性。在试验1中，分析了7种有机锌源产品的理化特性。结果表明：有机锌源产品的含锌量和氨基酸组成存在较大差异；所测2种有机锌源产品（ZnPro B和ZnAA B）均具有锌络合物的结构特征；所有有机锌源产品在盐酸、柠檬酸、中性柠檬酸铵缓冲液中的溶解度均在90％以上，在pH2缓冲液中的溶解度为53．92％～98．54％，在水和pH5缓冲液中的溶解度变化范围为6．04％～98．54％；未检测到有机锌源在pH2、0．2mol／LHCl-KCl或pH5、0．1mol／LKH2PO4-K2HPO4缓冲液及去离子水中的可溶部分有络合锌的存在；有4种有机锌源产品属于弱络合强度有机锌源，有1种有机锌源产品属于中等络合强度有机锌源，有2种有机锌源产品属于强络合强度有机锌源。在试验2中，采用6×4析因安排的完全随机设计，用体外瘤胃发酵法评价了不同络合强度有机锌源的瘤胃稳定性。结果表明：不同络合强度有机锌在模拟瘤胃环境下是稳定的，过瘤胃率分别在92％以上，其中又以强络合强度有机锌为最好（99．55％），弱络合强度有机锌（94．85％）次之，中络合强度有机锌（92．16％）相对最低。

摘要：试验采用单因子完全随机试验设计研究赖氨酸对7～21日龄雄性北京鸭生产性能和胴体品质的影响,进而探讨生长前期北京鸭赖氨酸需要量。280只7日龄雄性北京鸭随机分为5个处理,每处理8个重复,每重复7只鸭。各处理组北京鸭随机饲喂赖氨酸水平分别为0.65%,0.80%,0.95%,1.10%和1.25%的试验日粮。饲养期为7～21日龄。结果表明:赖氨酸对北京鸭生产性能和胴体品质均产生显著影响(P<0.05)。以日增重、料肉比和胸肉重为评价指标,依据二次曲线模型,北京鸭生长前期赖氨酸需要量分别为1.06%、1.07%和1.12%。

摘要：根据已经得到的MsZIP基因序列(GenBank序列号:HQ911778),设计两对含有酶切位点的引物ZIPF1/ZIPF2和ZIPR1/ZIPR2,合成用于构建干扰载体的正反义片段。将正反义片段插入到载体pART27中,构建成为含有发夹结构的RNAi干扰载体pART-F-R。采用农杆菌介导的方法,将该干扰载体成功转化到苜蓿中,得到9株抗性苗,选取其中的3株进行PCR鉴定,结果表明成功得到转基因苜蓿。

摘要：采用RT-PCR方法扩增了鸽源新城疫病毒F基因并将其克隆至pMD18-T载体,测定其核苷酸序列。根据F基因CDS序列,设计原核表达引物,扩增F基因功能区片段,并构建了重组原核表达质粒pGEX4T-1-NDV F(924),在不同时间和温度下进行诱导表达。通过SDS-PAGE检测,目的基因表达出约60ku的融合蛋白,主要以包涵体形式存在,表达目的蛋白的最佳诱导时间为6h,最佳诱导温度为42℃;提取并纯化包涵体蛋白,用其免疫BALB/c小鼠,采小鼠血进行ELISA检测。结果显示,表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。上述结果表明,缺失疏水区的F基因可以在大肠杆菌BL21(DE3)中获得表达,表达的重组F蛋白具有良好的免疫原性和反应原性。