摘要：目的探讨肺癌中RET基因重排肿瘤的荧光原位杂交(FISH)信号特征。方法收集北京协和医院2019年12月至2022年4月存档的甲醛固定石蜡包埋的表皮生长因子受体(EGFR)野生型和间变性淋巴瘤激酶(ALK)免疫组织化学阴性的肺腺癌标本616例,经基于不平衡设计的逆转录数字PCR方法筛选出RET阳性的标本33例,以分离探针进行RET FISH检测,并通过二代测序验证FISH结果和确定RET基因重排类型。结果在33例逆转录数字PCR检出的RET阳性样本中,经二代测序检测均含有RET基因重排。其中包括27例KIF5B::RET、3例CCDC6::RET、2例ERC1::RET和1例CCDC186::RET重排。RET FISH检测结果为32例阳性、1例阴性。在FISH阳性标本中,25例(78.1%,25/32)样本为红绿信号分离,阳性细胞数为52%~100%;7例(21.9%,7/32)样本以孤立的3′信号为特征,阳性细胞数介于38%~88%之间。未见以单个5′信号聚集为特征的FISH阳性类型。最常见的伙伴基因是KIF5B(81.8%,27/33),且RET基因重排者女性居多(72.7%,24/33)。结论对于RET基因重排的肺癌来说,大多数样本的FISH类型表现为分离信号,而且具有重排信号的瘤细胞常是高占比的。

摘要：AdEasy是目前应用最广泛的腺病毒构建系统,其采用细菌Escherichia coli(BJ5183)进行同源重组,虽然提高了效率,但需进行电击转染和阳性克隆筛选.ClonTech 公司的Adeno-XTM腺病毒表达系统采用归位内切酶(I-Ceu Ⅰ和PI-Sce Ⅰ),将穿梭质粒pShuttle-Vector上的目的基因直接连接到病毒骨架质粒上,省去了重组克隆的筛选,缩短了构建时间.

摘要：目的探究示踪用盐酸米托蒽醌注射液在甲状腺癌根治术中对淋巴结染色、示踪的效果及其安全性和耐受性。方法本研究采用单中心、开放、空白对照试验设计,按剂量递增原则,逐剂量组进行人体耐受性试验和药代动力学试验。前瞻性纳入2016年12月至2017年3月北京协和医院拟行甲状腺癌根治术的患者为受试者,并分为空白对照组和试验组。空白对照组进行常规手术,不注射示踪剂;试验组暴露术野后拟分别在甲状腺腺体注射0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.2 mL示踪用盐酸米托蒽醌注射液,由低至高依次进行5个剂量组的爬坡试验。主要疗效指标为淋巴结示踪率和淋巴结染色率,次要疗效指标为淋巴结染色程度评分和示踪持续成功率。记录给药后受试者体征变化,进行安全性评定。给药前及给药后10 min、20 min、30 min、60 min、90 min、120 min,分别采集受试者静脉血计算药代动力学参数。结果共纳入27例受试者,其中空白对照组3例;试验组0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.2 mL 5个剂量组分别为3例、3例、6例、6例、6例。当试验进行至第3个剂量组(0.6 mL)时,受试者注射部位对药物注射剂量承载已达饱和,终止试验,故实际共15例受试者完成试验。空白对照组均未出现淋巴结染色。试验组中,12例受试者中央区淋巴结全部染色,部分侧颈部淋巴结也出现染色,甲状旁腺不被染色、呈负显影。0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL剂量组给药前后淋巴结染色程度评分存在显著性差异(P<0.05),平均淋巴结染色率分别为90.47%、91.67%、91.36%,平均淋巴结示踪率分别为79.17%、100%、98.67%。试验组淋巴结清扫持续时间为5~20 min,均未出现染色的淋巴结褪色,示踪持续成功率为100%。安全性评价中,空白对照组和试验组均未发生严重不良事件,且不良事件发生原因与该示踪剂肯定无关。药代动力学试验显示,该示踪经剂经腺体注射给药后快速被吸收,注射后10 min血液浓度达峰值(最高血药浓度为13.1μg/L),并迅速被消除。结论甲状腺癌根治术中使用0.2~0.6 mL示踪用盐酸米托蒽醌注射液,可起到较好的淋巴结示踪作用,且安全性高、耐受性好。

摘要：目的 探讨细胞学标本表皮生长因子受体（EGFR）基因突变检测的规范化流程.方法 收集北京6家医院287例临床怀疑肺癌的细胞学标本,应用设计的规范化检测流程检测细胞学标本中EGFR基因突变状态.选择40例非小细胞肺癌（NSCLC）患者富于肿瘤细胞胸水标本,比较同一标本采用石蜡包埋和细胞学甩片中刮取癌细胞同时检测EGFR突变的一致性,比较直接测序（Seq）法及扩增受阻突变系统（ARMS）方法检测EGFR基因突变状态的差异.对应用吉非替尼治疗的患者分析其基因突变状态与疗效的关系.结果 287例怀疑肺癌的细胞学标本中,发现肿瘤细胞236例（82.2％,236/287）,其中寡肿瘤细胞标本31例（13.1％,31/236）,富于肿瘤细胞学标本205例（86.9％,205/236）.富于肿瘤细胞学标本中,180例（87.8％,180/205）诊断为***法检测富于肿瘤细胞NSCLC标本EGFR基因突变率为27.8％ （50/180）,腺癌标本为28.2％ （50/177）.ARMS方法检测富于肿瘤细胞NSCLC标本EGFR基因突变率为45.6％ （82/180）,腺癌标本为46.3％（82/177）.寡肿瘤细胞标本ARMS方法检测EGFR突变率为38.7％（12/31）,与富于肿瘤细胞标本EGFR突变率差异无统计学意义（P=0.12）.40例富于癌细胞胸水标本中,ARMS检测石蜡包埋细胞学标本和细胞学甩片刮取癌细胞标本的EGFR基因突变率均为37.5％ （15/40）,一致率为100％.吉非替尼治疗ARMS（＋）组和ARMS（-）组患者的无进展生存时间（PFS）分别为12个月和2个月（P ＜0.001）,总生存时间（OS）分别为19个月和7个月（P=0.003）.吉非替尼治疗Seq（＋）组和Seq（-）组患者的PFS分别为12个月和7个月（P =0.227）,OS分别为20个月和15个月（P=0.510）.吉非替尼治疗Seq（＋）ARMS（＋）组和Seq（-）ARMS（＋）组患者的PFS分别为12个月和10个月（P =0.354）,OS分别为20个月和17个月（P=0.334）.结论 细胞学标本EGFR基因突变检测的流程具有可靠性和可行性,病理质控和免疫组化染色在细胞学标本EGFR基因突变检测流程中作用重要,细胞学标本EGFR基因突变检测需采用高灵敏度的检测方法.

摘要：目的评价羧甲基壳聚糖(N,O-carboxymethyl chitosan,NOCC)预防兔手术后粘连的效果。方法 220只雌性大耳白兔采用双子宫模型造成手术粘连,随机分组后接受单纯造模手术(对照组)或造模手术+关腹前腹腔内注射NOCC(NOCC组)。所有手术均由同一位术者完成。每组各22只大耳白兔在实验设计的5个观察时间点(术后3、7、14、28和42 d)分别被处死并评估其粘连情况,包括范围、类型和强度等大体情况和炎症、纤维化以及新生血管等镜下情况。结果 NOCC组在术后3 d时其粘连的范围(P=0.0337)和强度(P=0.0271)以及炎症反应情况(P<0.0001)均显著轻于对照组。在术后14 d内,NOCC组的纤维化情况均明显轻于对照组(P均<0.0005)。与对照组相比,NOCC组的粘连强度在术后14、28、42 d均明显减轻(P均<0.05),而其粘连类型评分在术后28和42 d也明显降低(P均<0.05)。结论经NOCC处理后,兔盆腹腔术后粘连大体和病理学评分均不同程度降低。应用NOCC可有效预防盆腹腔术后粘连。

摘要：目的研究甲状腺癌5种驱动基因RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT突变与临床病理特征的关系,以期细化甲状腺癌主要驱动基因突变的人群特征,在临床实践中为患者提供更精准的分子分型检测指导。方法回顾性收集319例甲状腺癌患者的临床病理特征和5种基因突变状态资料,分析各基因突变状态与患者年龄、性别、病理类型的相关性。结果 319例患者的RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT突变频率分别为5. 3%、45. 1%和12. 9%。其中37例患者检出双基因突变(11. 6%);BRAF和TERT共突变发生频率最高,为9. 4%;其次为NRAS/TERT共突变4例。RAS和BRAF的突变状态与患者病理类型显著相关(均P<0. 01);RAS突变在滤泡性癌中比例高;BRAF突变主要见于乳头状癌,滤泡性癌中少见;TERT突变在乳头及滤泡性癌中均可见,在滤泡性癌中比例增高,但无统计学意义。此外,RAS/BRAF/TERT基因突变患者的平均年龄分别为52. 5岁、44. 6岁和59. 5岁,均显著高于总体平均年龄(40岁)(P <0. 01);而<19岁的青少年患者(31例)仅1例检出BRAF基因突变;所有病例其他驱动基因均为阴性。结论甲状腺癌RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT驱动基因突变与患者的病理分型及年龄相关。青少年甲状腺癌患者RAS(KRAS,NRAS,HRAS)、BRAF和TERT驱动基因突变发生频率极低,在临床实践中需有针对性的设计基因检测方案。

摘要：目的：研究细胞学标本间变性淋巴瘤激酶（ ALK）蛋白表达及基因融合检测的规范化流程。方法收集北京市7所三级甲等医院晚期肺腺癌细胞学标本，按照设计的规范化流程检测ALK蛋白表达及基因融合状态。制作福尔马林固定石蜡包埋（ FFPE）细胞学蜡块，应用免疫组化（ IHC）方法鉴别肿瘤细胞的来源与分型；应用Ventana IHC ALK（ D5F3）检测ALK蛋白的表达；应用实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）方法检测表皮生长因子受体（ EGFR）基因野生型标本中ALK基因融合，并对无法制作细胞学蜡块的细胞学标本进行ALK基因融合检测；Ventana IHC ALK（ D5F3）检测阳性标本应用荧光原位杂交（FISH）方法验证ALK基因的融合状态。分析Ventana IHC ALK（D5F3）检测阳性并采用克唑替尼治疗患者的疗效。结果229例细胞学标本符合肺腺癌诊断，其中207例标本采用至少1种方法检测并获得ALK蛋白表达和基因融合检测结果，检测率为90．4％（207／229）。203例标本成功制作FFPE细胞学蜡块，应用Ventana IHC ALK（D5F3）检测ALK蛋白表达的成功率为100．0％，阳性率为10．3％（21／203）。98例EGFR基因野生型肺腺癌FFPE细胞学标本采用qRT-PCR方法检测ALK基因融合，96例检测成功（97．96％）。以qRT-PCR方法为标准，Ventana IHC ALK（D5F3）检测ALK蛋白表达的灵敏度为100．0％，特异性为98．7％。2种检测方法一致率为94．7％（ Kappa＝0．967， P＜0．001）。 FISH方法对Ventana IHC ALK（ D5F3）表达阳性的结果进行验证，2例寡肿瘤细胞学标本无法获得明确判读结果。6例Ventana IHC ALK（ D5F3）检测ALK蛋白表达阳性的患者选用克唑替尼治疗，有效5例。2例细胞学蜡块应用4％甲醛固定72 h后，Ventana IHC ALK（ D5F3）染色强度明显减弱；10例患者分别用FFPE细胞学蜡块标本切片和刮取细胞学甩片中细胞提取总RNA，qRT-PCR检测ALK基因融合结果一致。结论所设计的ALK蛋白表达及基因融合检测流程，扩展了细胞学标本的检测类型，提高了检测率。 Ventana IHC ALK（ D5F3）是检测细胞学标本ALK蛋白表达的可靠方法，检测前病理质量控制过程对检测结果的准确性至关重要。细胞学标本无法制作细胞学蜡块时， qRT-PCR是进行ALK基因融合检测的可选方法。

摘要：病理技术是病理医生诊断疾病的基石。病理技师岗前规范化培训,有助于病理技师掌握病理技术相关的理论知识,提高实践操作能力,为其日后开展实验室工作奠定基础。本文阐述了北京协和医院病理技师岗前培训的设计与实施,以2020年6月至2022年2月参加培训的18名学员为研究对象,通过理论与实践操作考核、问卷调查和座谈会了解培训效果。结果显示,学员理论与实践操作考核成绩分别为(94.09±7.96)分和(91.68±4.71)分,均为优秀,17名学员对规范化培训表示满意,病理技师岗前规范化培训有助于培养病理技师的综合能力。

摘要：按照北京市病理质量控制与改进中心工作要求, 对北京地区各医疗机构病理科弹力纤维染色质量进行室间质评, 评估室间质量差异, 并分析染色技术问题, 为病理质控和诊断判读提供技术支撑。统一选定测评标本为肺肿瘤切除标本(含胸膜), 共发放测评标本66份, 同时设计调查问卷收集各实验室信息和染色方法。最后收集切片由质控组专家进行统一评价。结果本次共有66家北京地区的病理实验室提交结果, 包括65家医院病理科和1家第三方检测机构病理实验室。使用的染色方法依次有:维多利亚蓝法(46家)、铁碘苏木精法(17家)、间苯二酚-碱性品红法(2家)、Gomori醛品红法(1家)。其中维多利亚蓝法合格44家(95.7%), 含11家优秀(23.9%, 11/46)。铁碘苏木精法合格15家(15/17), 含优秀10家(10/15)。间苯二酚-碱性品红法合格2家(2/2), 无优秀。Gomori醛品红法合格1家, 无优秀。4种弹力纤维染色结果差异无统计学意义(P>0.05)。总体评价, 本次调研北京地区弹力纤维染色的总合格率93.9%(62/66), 其中优秀率31.8%(21/66)。结论本次室间质评数据充足, 调研证实北京地区各病理实验室的弹力纤维染色技术合格, 推荐维多利亚蓝染色是首选染色方法;个别实验室染色技术有待改进, 建议加强技术培训。

摘要：目的探索使用他扎罗汀倍他米松乳膏治疗斑块状银屑病4周后有效但未达基愈患者的后续用药方案。方法本研究采用多中心、随机、开放、平行、对照设计。232例完成0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏4周治疗,银屑病面积与严重性指数(PASI评分)改善在50%~90%但未达基愈的斑块状银屑病受试者,在第5周时1∶1随机化进入试验组和对照组,试验组每日1次外用0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏,对照组每日1次序贯使用0.05%他扎罗汀凝胶、0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏(工作日使用他扎罗汀凝胶、周末使用他扎罗汀倍他米松乳膏),进行第5~8周的治疗,第6周和第8周时评价两组的疗效和安全性。两组间计量资料的比较采用协方差分析或t检验,计数资料的比较采用卡方检验。结果232例进入第5~8周治疗的患者中,200例完成研究,试验组和对照组的全分析集(FAS)分别为110例、112例,安全性分析集(SAS)均为113例。连续治疗6周和8周后,试验组PASI评分的下降率分别为73.05%±16.69%和78.46%±15.40%,对照组分别下降66.73%±21.77%和67.02%±34.19%,两组比较,均P<0.05。治疗6周后,试验组达到PASI90的受试者比例(14例,12.7%)高于对照组(5例,4.5%,χ^(2)=4.842,P=0.028);治疗8周后,试验组达到PASI75、PASI90的受试者比例(61.8%、23.6%)均高于对照组(48.2%、12.5%,均P<0.05)。连续用药8周后,试验组和对照组的不良反应发生率(15.0%、23.9%)差异无统计学意义(χ^(2)=2.822,P=0.093)。结论使用0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏治疗银屑病4周后有效但未达基愈的患者,继续进行为期4周的0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏治疗是一种比序贯使用0.05%他扎罗汀凝胶、0.05%/0.05%他扎罗汀倍他米松乳膏更优的治疗方案。