摘要：一些在组织和细胞分化中起重要作用的蛋白质包含锌指结构域 .为了克隆分离和研究与造血细胞分化和发育成熟相关的蛋白基因 ,利用编码C2H2型锌指蛋白结构域中部分保守氨基酸序列设计简并引物 ,以骨髓cDNA为模板 ,进行PCR扩增 ,得到若干新的锌指蛋白基因EST .用其中一条为探针筛选人骨髓cDNA文库 ,获得了一个新的锌指蛋白基因全长cDNA ,GenBank收录号为AF2 4 6 12 6 ,长 3888bp ,包括一个完整阅读框 ,编码 6 86个氨基酸 ,包括 17个典型的和 2个非典型的C2H2模体 ,命名为HZF2 .RNA印迹、人多组织mRNA斑点杂交分析结果显示 ,其在T淋巴细胞发育和定居的器官组织胸腺、淋巴结中有较高表达 ,在脾脏、胎肝有中度表达 ,在B淋巴细胞发育的骨髓中表达很低 ,在外周血几个淋巴细胞系中仅有极微量的表达 ,提示HZF2可能对于T淋巴细胞发育和增殖有重要功能 .该基因也在脑组织的若干部位、胎盘及肾上腺有较高表达 ,在多种其他组织细胞有微量表达 ,说明其可能对维持这些组织细胞的生理功能也起一定作用 .将编码HZF2读框的DNA顺序克隆到pEGFP N1载体中 ,转染 3T3细胞 ,证明表达的HZF2 GFP融合蛋白定位于细胞核 ,这与根据HZF2蛋白结构推测其可能作为DNA结合蛋白行使调节基因转录的功能是一致的 .

摘要：将大鼠脑原生型一氧化氮合酶（cNOS）全长cDNA定向插入pRC／CMVpolylinker区，获得真核细胞表达载体pCMVcNOS。以pCMVcNOS为模板，cNOS内部基因序列设计的引物进行PCR扩增，证明cNOS基因的存在。经酶切检测进一步证实插入方向完全正确。用磷酸钙共沉淀法和LipofectinTM法将pCMVcNOS转染NG108-15细胞，用含600mg／LG418培养基筛选和增殖抗性单克隆细胞，通过3H-精氨酸转化3H-胍氨酸法测定各细胞克隆可溶相和颗粒相cNOS活性，筛选高效稳定表达的细胞株。从42株抗G418单克隆细胞林中筛选到3株稳定高效表达细胞，在表达的cNOS活性中，可溶相增加更为明显。本实验结果证实，得到高效表达原生型一氧化氮合酶的神经细胞株。

摘要：目的分离、克隆一种新的恶性疟原虫PDZ结构域包含蛋白(PfPCP)编码区基因,并初步研究其红内期表达。方法分析恶性疟原虫基因组3号染色体数据库,设计特异的引物,利用RT-PCR从恶性疟原虫海南株红内期mRNA扩增PfPCP编码区基因利用生物信息学相关软件分析所扩增的基因;利用Western印迹法分析PfPCP在红内期的表达。结果从恶性疟原虫mRNA扩增到的PfPCP编码区基因长度为2076bpcDNA克隆,编码蛋白长为691氨基酸,具有典型的PDZ结构域。Western印迹显示,该基因在红内期裂殖体期特异性表达。结论获得新的恶性疟原虫PfPCP编码区基因,该基因在恶性疟原虫红内期裂殖体期特异性表达。

摘要：目的研究I型先天性厚甲症患者KRT6A基因突变情况,为建立该病的基因诊断与遗传咨询提供依据。方法提取1例I型先天性厚甲症患者及家系成员和50名正常对照外周血白细胞基因组DNA.设计针对KRT6A基因的特异引物,采用聚合酶链反应(PCR)扩增基因的全部编码序列,DNA直接测序明确具体的突变位置和方式,限制性内切酶反应验证基因突变。结果 PCR结合DNA测序发现患者KRT6A基因第7外显子存在异常;第1385位核苷酸由胸腺嘧啶(T)突变为鸟嘌呤(G),导致KRT6A角蛋白2B螺旋区末端第462位密码子由异亮氨酸(I)变成丝氨酸(S),即发生1462S错义突变。患者父母及与家系无血缘关系的50名正常对照均未发现此突变,提示I462S为一种新生突变(de novo mutation)。结论 KRT6A基因1462S新生错义突变是导致该例患者I型先天性厚甲症的特异突变。

摘要：目的克隆并表达伯氏疟原虫pbmag-1基因cDNA片段。方法在GenBank中检索伯氏疟原虫编码基因pbmag-1部分cDNA序列,设计特异引物,经RT-PCR从伯氏疟原虫ANKA株扩增出该基因的部分cDNA片段。以锚定OligodT引物反转录mRNA获得的cDNA为模板,利用已知序列设计特异引物,通过cDNA末端快速扩增(RACE)技术延伸pbmag-13′端未知的编码序列,并将其克隆于原核表达载体后转入大肠埃希菌(***)BL21-(DE3)-RIL株,经优化诱导条件,表达了重组蛋白PbMAg-1并用其免疫小鼠。结果获得1341bp具有完整3′末端序列的pbmag-1基因片段,其A/T含量为73%。以包涵体形式表达的重组蛋白免疫小鼠,其血清抗体经蛋白质印迹(Western blotting)分析,能特异性地识别伯氏疟原虫感染红细胞相对分子质量约为Mr64000的蛋白。结论获得重组蛋白PbMAg-1的3′端完整的pbmag-1基因cDNA片段,为研究伯氏疟原虫PbMAg-1蛋白在鼠疟免疫反应中的作用奠定了实验基础。

摘要：目的了解3个县（市）城乡居民对公共场所完全禁止吸烟的态度，探讨影响城乡居民控烟态度的主要因素。方法2004年以四川省绵竹市、江西省安义县、河南省新安县为研究现场，每个研究现场均采用三阶段分层随机抽样方法，抽取18～69岁城乡居民作为调查对象。由经过培训的调查员运用统一设计的调查表，以面对面询问方式进行人户调查。采用岔检验和非条件logistic回归模型，分析城乡居民对公共场所完全禁烟的态度及其影响因素。结果3个县（市）调查对象的现在吸烟率为44．3％，在现在吸烟者中80．7％（1379／1709）报告经常或有时在公共场所吸烟；有工作者中9．6％（479／4983）报告工作场所有室内完全禁烟的规定；调查对象对公共场所完全禁止吸烟的赞成率是43．5％。多因素logistic回归模型结果显示，地区、城乡、年龄、性别、文化程度、吸烟状况、掌握被动吸烟的健康危害知识、通过广播接受过控烟宣传与居民对公共场所完全禁烟态度的关系有统计学意义。居住在城区的调查对象比居住在农村者更支持在公共场所完全禁烟（OR=1．29）；女性支持高于男性（OR=1．27）；高年龄组较低年龄组更赞成公共场所完全禁烟（30～49岁洮18～29岁：OR=1．46；50～69岁伽．18～29岁：OR=1．71）；文化程度与控烟态度间呈正关联，文化程度越高，赞成率越高；与吸烟者相比，戒烟者、非吸烟者更支持存公共场所完全禁烟，OR值分别为1．90和2．01；掌握被动吸烟健康危害知识的调查对象对公共场所完全禁烟的赞成率高于未掌握知识者（OR=2．26）；通过广播接受过控烟宣传者较未接受者更赞成公共场所完全禁烟（OR=1．43）。结论3个县（市）人群已有一定的禁烟基础，应尽快制定并推广在公共场所完全禁止吸烟的规定。

摘要：目的克隆、表达恶性疟原虫的巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)同源基因Pfmif。方法参照人MIF基因(Humif)氨基酸序列在***基因组中找到同源核苷酸序列,设计特异引物,采用RT-PCR方法从恶性疟原虫3D7株红内期RNA扩增获得Pfmif基因;利用生物信息学软件分析所扩增的基因;原核表达重组PfMIF蛋白,并亲和纯化。结果从恶性疟原虫RNA中扩增到Pfmif基因,长度为351bp,编码116个氨基酸,具有MIF家族蛋白的典型特征。成功的表达及纯化了融合有GST标签的重组PfMIF蛋白。结论获得来自恶性疟原虫的MIF同源基因,初步确定PfMIF是MIF家族的一个新成员。

摘要：背景与目的:人表皮生长因子(human epidermal growth factor,EGF)是受体起作用刺激细胞增殖和分化的重要生长因子。正常细胞的表面有,但很多肿瘤尤其是实体瘤细胞表面则有异常高水平的EGF受体的表毒早期区4第4编码蛋白,即腺病毒E4orf4蛋白(adenovirus early region ding frame 4 protein)可以特异地诱导肿瘤细胞发生不依赖p53表达的种新型的细胞毒因子。本研究旨在利用EGF的靶向性和E4orf4蛋白的,在分子水平设计合成一个融合蛋白。

摘要：目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂交膜分析该基因在各细胞系的表达;用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,探讨该基因在此过程中的表达变化。结果从文库中筛出长度分别为1878和1382bp的M96cDNA克隆,二者为剪接异构体,其开放阅读框分别编码491及262个氨基酸,分别命名为M961和M962(GenBank接受号分别为AF072814和AF073293)。Northern杂交结果表明,在所检测的10种血细胞系中,人淋巴细胞白血病细胞系CEM的M961基因表达量最高,在有巨核及红系特点的Hel、Dami及K562白血病细胞系中M961的表达量也较高。在K562细胞分化过程中,M961基因表达略有升高。结论M961基因在某些白血病细胞系中表达量较高。

摘要：目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因。方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(D DR T-PCR)技术分析正常老化和年轻BA LB/C小鼠大脑皮层m R NA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经N orthern杂交验证后,作为出发序列,利用生物信息学方法设计引物,以小鼠大脑皮层总R NA的反转录产物为模板通过PCR克隆全长cD NA。结果差异显示分析共获得表达差异明显的EST42条,序列同源性分析显示其中29条为已知基因cD NA片段,13条可能为新EST。对新EST进行N orthern杂交验证后,对确证在正常老化鼠皮层表达明显下调的1个EST,通过生物信息学方法克隆全长cDN A,得到1个新的1382bp的cD NA序列,命名为Arzc,获得G enBank注册号A Y344585。该序列含有1个261bp的开放阅读框,推测的编码多肽包含86个氨基酸残基,与噬菌体编码的重组酶/整合酶的一段氨基酸序列有较高同源性。结论鉴别并克隆到一个可能与小鼠衰老相关的新基因A rzc。