摘要：目的制备肠道病毒71型(EV71)外壳蛋白表位肽多克隆抗血清。方法利用5种B细胞表位预测软件对EV71外壳蛋白进行分析,设计针对病毒蛋白(VP)的4种表位肽,即VP1(aa.204-223)、VP2(aa.133-163)、VP3(aa.139-148+aa.173-191)和VP4(aa.1-23),化学合成后与钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)偶联得到相应肽。然后,分别联合MF59/CpGC274佐剂皮下免疫BALB/c小鼠6次,间隔2周,采集血清,用ELISA和Western blot对其抗体活性进行分析。结果4种抗血清均可有效结合EV71病毒和其变性病毒,VP2抗血清与变性病毒的结合活性较高,其余3种与病毒及变性病毒的结合力相当;而且4种抗血清均可与病毒样颗粒(VLP)及变性VLP结合。VP1和VP2抗血清分别与EV71 VLP中的组成蛋白VP1和VP0(VP2和VP4前体蛋白)结合,其中VP2抗血清的结合活性最好,VP1抗血清次之;同时,VP1和VP2抗血清还可与EV71病毒特异性高效结合,且VP2抗血清可同时结合EV71病毒的空心颗粒的VP0及实心颗粒的VP2。VP3和VP4抗血清与VLP和病毒未显示明显的结合活性。结论成功制备了4种EV71表位肽多克隆抗血清,为ELISA和Western blot提供检测工具,并可用于EV71疫苗质控(QC)研究。

摘要：单碱基编辑器是实用且高效的基因编辑工具,其编辑效率与单向导RNA(single guide RNA,sgRNA)序列的设计密切相关。目前单碱基编辑器sgRNA序列的设计缺少特定的法则,主要依靠经验和大量尝试完成。本研究基于卷积神经网络,开发了一个单碱基编辑器sgRNA序列设计工具BEguider。BEguider利用TensorFlow 2深度学习框架建立编辑效率预测模型,能够在人基因组范围内针对NGG PAM序列依赖的单碱基编辑器ABE7.10-NGG和BE4-NGG批量设计sgRNA序列,预测编辑效率。此外,通过整合Cas-OFFinder,BEguider能够提供对sgRNA脱靶情况的评估。利用BEguider设计sgRNA序列,有助于研究人员提高实验效率,节约实验成本。

摘要：目的总结分析国内糖原累积病Ⅱ型（Pompe病）患者的临床表现及疾病转归的特点。方法回顾性分析17例经酶学确诊的糖原累积病Ⅱ型患者临床资料，通过设计临床调查表进行电话随访，总结归纳临床和转归特点。结果17例糖原累积病Ⅱ型患者中，4例为婴儿型，生后2-6个月发病，均有肌酶升高和心脏受累，伴或不伴呼吸肌受累。4例均未进行治疗。其余13例为晚发型，发病年龄2-22岁，均有肌酶升高。其中11例以肌肉无力起病，2例表现为呼吸肌受累，2例表现为脊柱侧弯，1例表现为肌酶高伴肝功能异常。除3例曾接受呼吸机辅助治疗外，其余10例未接受相关治疗。全部患者仪-1，4-葡萄糖苷酶活性数值均低于正常人10％以下；14例行病理肌活检检测，9例提示糖原累积病Ⅱ型；10例行基因检测，6例检测到2个致病突变。成功电话随访12例，随访率70％。婴儿型4例中，3例在3岁之内死于呼吸衰竭，存活的1例目前1岁7个月。成功随访的晚发型8例中，4例于发病3-5年死亡，均死于呼吸衰竭，存活的4例中3例自觉肌肉无力症状加重，1例自住院时使用呼吸机治疗，至今病情无明显改变。12例随访者中7例死亡，总死亡率58％。结论糖原累积病Ⅱ型在临床表现上存在差异。婴儿型表现为全身性肌肉无力，心脏受累明显，病情凶险，死亡率高。晚发型以慢性进行性肌肉无力，呼吸功能不全为主。经α-1，4-葡萄糖苷酶活性测定、肌肉活检以及基因检测诊断。患者的预后与发病年龄、有无呼吸肌受累相关。

摘要：目的研制中文版临床面部评价量表（FacialClinimetricEvaluation，FaCE），探讨周围性面神经麻痹患者的健康相关生存质量状况。方法通过对FaCE量表的引进、翻译和调试，形成中文版FaCE量表。选择81例周围性面神经麻痹患者和30名健康志愿者进行严格测试，对中文版FaCE量表进行考核，并与医学结局研究简表36项健康调查（sF-36）等其他评价方法进行对比。结果中文版FaCE量表具有良好的可行性：接受率、回收率和有效率分别为96．3％、96．3％和95．1％；量表具有良好的信度、效度和反应性：分半信度=0．79（P〈0．05），重测信度=0．88（P〈0．05），克朗巴赫系数α=0．87（P〈0．05）；FaCE量表总体评分与sF一36量表评分相关性良好（r=0．41，P〈0．05）；因素分析显示量表可以提取出6个维度，与源表的设计结构相吻合，能有效区分面神经麻痹和健康人群的生活质量（P〈0．05）。其总体评分与House—Brackmann分级和Sunnybrook分级评分相关性良好（r=-0．40和0．42，P值均〈0．05）。结论中文版FaCE量表能有效评价面神经麻痹患者的生活质量，可在我国周围性面神经麻痹患者诊疗中应用。

摘要：基底材料的拓扑形貌是影响细胞行为的重要因素之一,材料表面微纳米图案化不但可以提供规则的结构模版,用以研究细胞对生长环境的响应特性,而且可以为组织再生用支架和植入性器件的设计提供基础数据。以表面具有微纳米沟槽结构的聚氨酯薄膜为基底材料,选择在促进组织修复和再生中起重要作用的成纤维细胞为模型细胞,通过细胞活性检测和免疫荧光分析,探讨材料表面的微纳米图案结构对成纤维细胞黏附、增殖、形态以及细胞骨架发育的作用。实验结果表明,微纳米沟槽结构能够明显促进成纤维细胞在材料表面的黏附和增殖,并诱导细胞响应所生长的微纳米沟槽结构进行骨架重排。

摘要：目的:开发一个简单易用的本体构建工具Py2ONTO,探索人工方式和自动化方式相结合的本体构建方案。方法:通过将Owlready常用的底层函数封装为功能函数,在此基础上设计一个基于CSV模板的自动构建本体的流程,并在代码中提供功能函数的调用,通过BioPortal、MedPortal等本体数据库实现术语映射功能。结果:开发了基于Python的本体建设工具Py2ONTO,该工具可以通过命令行方式及Python脚本调用功能函数方式构建本体。通过该工具构建了两个本体,测试结果证明本文构建的本体满足其术语覆盖度和可推理性评估要求。结论:为本体构建提供了一种较为简单且可靠的选择,有助于科研人员构建高质量的本体。

摘要：目的建立一种疟原虫雌性配子体的分子检测法。方法根据疟原虫雌性配子体特异性mRNA靶标(待测靶序列)即动合子表面蛋白(s25)的转录产物,设计特异性的捕获探针和连接探针。血液样品经裂解释放的mRNAs,无需核酸提取,通过“三明治”杂交被捕获到96孔板表面。洗去未结合探针后,将结合在mRNA靶标上的连接探针进行连接,得到两端为特殊设计序列的单链扩增模板。再用通用引物进行染料法qPCR扩增,或在端部设计TaqMan探针序列,用通用引物和通用TaqMan探针进行探针法qPCR扩增。评价这一基于捕获和连接扩增的方法(CLIP-PCR)的灵敏度、特异性和重复性并与普通的RT-qPCR方法进行比较,将其应用于临床样品的检测。结果该CLIP-PCR具有较高的灵敏度和特异性。与普通的RT-qPCR一样,均可检测低至11拷贝数的s25 mRNA靶标;而且该CLIP-PCR操作更简便。该CLIP-PCR可准确检测到疟疾患者血液中的雌性配子体。可将96个样品的检测时间缩短至3 h。结论建立了灵敏高效的染料法和通用TaqMan探针法CLIP-PCR检测疟原虫雌性配子体,为疟疾传播的控制、配子体大规模筛查奠定了基础。

摘要：目的为了增强临床医学专业型硕士生的科研能力,在临床流行病学教学中尝试文献案例汇报与讨论的新教学模式并对其教学效果进行评价。方法选取北京协和医学院2019~2021年各学年选修临床流行病学课程的临床医学专业型硕士生(128名)为研究对象。2019年全部采用专题讲授式教学,2020年和2021年针对“队列研究”专题增设了文献案例汇报和讨论课。2021年选课学生就新教学模式提供了问卷反馈。结果2020年学生期末考试全部题目的题均得分率高于2019年(中位值分别为84.7%vs 75.4%,P<0.001);两学年学生的队列研究题目的题均得分率差异无统计学意义。2020年学生的队列研究案例讨论课得分率与期末考试队列研究题目的题均得分率、全部题目的题均得分率均呈正相关(r=0.40,P<0.01;r=0.31,P<0.05)。2021年学生中,80%自评达到了案例讨论课的知识学习目标,90%认为文献案例汇报与讨论式教学有助于提升临床研究设计能力、文献阅读能力、学术汇报交流能力及团队协作能力,全部学生对案例讨论课表示满意。结论在临床流行病学教学中开展文献案例汇报和讨论式教学,有助于学生更好地掌握临床研究方法学并提升综合科研能力,值得推广。

摘要：目的报道一例Wolcott—Rallison综合征患儿，研究患儿真核生物翻译起始因子-2α-激酶-3基因（eukaryoticinitiation factor 2α kinase3，EIF2AK3）的突变情况，为该病的临床诊断、基因诊断与遗传咨询提供依据。方法分析患儿的临床症状、体征、生化检查及骨骼x线检查并做出临床诊断；提取患儿及其父母的基因组DNA，针对EIF2AK3基因设计特异性引物，应用降落聚合酶链式反应（Touch—downPCR）扩增基因的全部外显子及外显子一内含子交界区，对扩增产物进行直接测序分析。结果（1）9岁4个月男性患儿，身高108cm，智力相当于6岁儿童发育水平；出生3个月时被诊断为1型糖尿病，正规胰岛素治疗后空腹血糖常高于11．0mmol／L，最高达23．5mmol／L；面容异常；肝脏于肋下5cm，剑突下2cm；骨骼畸形，x线提示多发性骨骺发育不良。（2）患儿EIF2AK3基因的外显子8中检测到n1408—1409insT（P．S470FfsX7）杂合突变，外显子9中检测到c．1596T〉A（P．C532X）杂合突变，2个突变位点分别在患儿母亲和父亲的基因中得到验证。结论Wolcott—Rallison综合征临床特点：新生儿或婴儿早期发生的1型糖尿病，多发性骨骺发育不良，体格和智力发育迟缓，多系统损伤；结合患者临床表现与生化、物理检查，对致病基因EIF2AK3进行突变检测是诊断Wolcott—Rallison综合征的可靠方法。E1F2AK3基因c.1408_1409insT与C．1596T〉A是导致该患儿出现Wolcott—Rallison综合征表型的致病突变，患儿为EIF2AK3基因突变的遗传复合体，这2个突变在国内外均未见报道，属新突变。

摘要：队列研究是探索病因和疾病防治知识发现的最有效工具之一。队列研究在我国已有60余年的工作基础,尤其自2016年科技部首次对队列研究专门立项以来,我国队列研究的种类和数量急剧增加。现代队列研究需要在经典的队列研究设计原则基础上,充分应用现代多学科资源和技术方法,以使暴露与结局关联分析和病因推断更加系统和精准。本文介绍了京津冀自然人群队列研究设计的理念、研究进展和挑战,以及在实施中应对的关键问题,可为国内队列研究及其随访机制建设提供参考。